優(yōu)化液質(zhì)聯(lián)用法對氟喹諾酮類藥物殘留的檢測

□ 戴菲菲 廣東省惠州市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測所

氟喹諾酮（fluoroquinolones，F(xiàn)Qs）類藥物具有6-氟-7-哌嗪-4-諾酮環(huán)的特征結(jié)構(gòu)，且具備酸堿兩性，因其具有機(jī)體吸收快、組織濃度高、殺菌效果好、抗菌譜廣等優(yōu)勢，故在治療家禽感染性疾病中的應(yīng)用十分廣泛。氟喹諾酮類藥物對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、細(xì)胞內(nèi)病原菌、霉形體及某些耐藥菌株都有很好的抗菌活性，常用藥物包括恩諾沙星、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、諾氟沙星、沙拉沙星等。但是，隨著氟喹諾酮類藥物的廣泛應(yīng)用，其被濫用的問題也逐漸引起各方重視—長期食用氟喹諾酮類藥物超標(biāo)的肉類、蛋類等食物會致使人體內(nèi)的抗生素蓄積，進(jìn)而導(dǎo)致內(nèi)分泌系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等損傷，甚至產(chǎn)生細(xì)菌耐藥性。當(dāng)前，農(nóng)業(yè)部制定了《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650-2019），發(fā)布《在食品動物中停止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4種獸藥的決定》(農(nóng)業(yè)部公告第2292號)等，以規(guī)范氟喹諾酮類藥物的使用。

目前，適用于檢測氟喹諾酮類藥物殘留的方法包括免疫分析法、微生物法、高效毛細(xì)管電泳分析法、高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等，在《國家食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則》中采用的方法主要有《動物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 20366-2006）、《動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》（GB/T 21312-2007）等。由于GB/T 20366-2006中不使用固相萃取柱，且提取過程需使用大量乙腈和正己烷，并存在旋蒸耗時長等問題，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)不夠簡便快捷。因此，筆者從提取、旋蒸、定容等方面對GB/T 20366-2006的方法進(jìn)行了優(yōu)化，以期為動物源食品中氟喹諾酮類藥物殘留的測定提供參考。

1 儀器設(shè)備

1.1 檢測儀器

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：AB SCIEX API 4000，配有電噴霧離子源；

ZORBAX Eclipse Plus C18 600Bar （3×100mm，1.8μm）。

1.2 前處理設(shè)備

均質(zhì)器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、氮吹儀、渦旋混勻器、離心機(jī)、分析天平、移液器、聚四氟乙烯離心管等。

1.3 試劑

甲酸，優(yōu)級純；乙腈、正己烷，色譜純；一級水。

1.4 氟喹諾酮類藥物標(biāo)準(zhǔn)品

恩諾沙星（Dr.）、環(huán)丙沙星（Dr.）、諾氟沙星（Dr.）、恩諾沙星（Dr.）、氧氟沙星（Dr.）、沙拉沙星（Dr.）。

用乙腈配制成1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并逐級稀釋配制成混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

2 實(shí)驗(yàn)方法

參照《動物源產(chǎn)品中喹諾酮類殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（GB/T 20366-2006）。

3 結(jié)果與分析

3.1 優(yōu)化提取體積

分別用5、10、20mL甲酸-乙腈溶液提取待測樣品2次，使用提取溶液總體積為10、20、40mL，其余步驟按照GB/T 20366-2006進(jìn)行。結(jié)果顯示，提取溶液體積與回收率呈正相關(guān)，依次為40.3%～50.6%、66.8%～75.2%、69.5%～77.4%。當(dāng)提取溶液總體積為20mL時，既能得到較好的回收率，又可以降低有機(jī)溶劑的使用量。因此，將甲酸-乙腈溶液20mL作為優(yōu)化后的提取體積，同時正己烷的用量相應(yīng)減少。

3.2 優(yōu)化旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)

在進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)操作時，經(jīng)常因提取溶液中的水分較多不易蒸干而耗費(fèi)大量時間。本實(shí)驗(yàn)在正己烷除脂后，于下層提取溶液中加入適量無水硫酸鈉以除去提取溶液中的水分，同時提高旋蒸溫度以減少蒸干時間。如表1所示，添加無水硫酸鈉的同時提高旋蒸溫度對回收率無顯著影響，且旋蒸用時縮短了6～8分鐘。因此，將添加無水硫酸鈉、50℃旋蒸作為優(yōu)化后的旋蒸條件。

表1 不同旋蒸條件的用時和回收率

3.3 優(yōu)化定容液

GB/T 20366-2006使用的定容液為甲酸-乙腈（2+98），由于乙腈比例太高，導(dǎo)致峰形不好，響應(yīng)不高，定量不準(zhǔn)確。本試驗(yàn)將定容液改為乙腈-0.1%甲酸-水（乙腈：水=2∶10）溶液后，峰形和響應(yīng)都得到明顯改善，回收率為85.1%～113.7%。因此，將乙腈-0.1%甲酸-水（乙腈：水=2∶10）溶液作為優(yōu)化后的定容條件。

4 結(jié)論

研究結(jié)果顯示，采用10mL甲酸-乙腈溶液提取2次，并相應(yīng)減少正己烷用量，添加無水硫酸鈉后于50℃旋蒸，用乙腈-0.1%甲酸-水（乙腈：水=2：10）定容，其余按照GB/T 20366-2006步驟進(jìn)行，不僅能夠在減少有機(jī)溶劑使用量的同時縮短實(shí)驗(yàn)用時，更可以改善峰形，提高響應(yīng)值，進(jìn)而得到令人滿意的回收率。