阿爾茨海默病與血漿Klotho蛋白水平相關性研究*

李寶善，唐渝平△，馬厚勛，蔣 宜，李婷婷，裴文楠

（1.重慶市急救醫療中心/重慶大學附屬中心醫院，重慶400014；2.重慶醫科大學附屬第一醫院，重慶400016）

老年期癡呆是老年人群癡呆的總稱，包括阿爾茨海默病（AD）、血管性癡呆、額顳性癡呆、路易體癡呆等，其中AD患者占比超過50%［1］。AD不僅嚴重影響患者的生活質量，也給患者家庭帶來沉重的經濟負擔，已成為嚴重的公共健康問題。研究發現，Klotho基因多態性及其表達與認知功能損害有關［2-3］，而Klotho基因表達產物——Klotho蛋白水平的高低與AD的相關性尚未深入開展研究。本研究中應用酶聯免疫吸附（ELISA）法檢測AD患者與非AD患者血漿Klotho蛋白水平，探索Klotho蛋白與AD相關性，為AD的綜合防治提供新思路?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入標準：觀察組，年齡大于65歲；符合第5版《美國精神疾病診斷與評估手冊》（DSM-Ⅴ）中AD診斷標準［4］；符合美國國家衰老研究所（NIA）和阿爾茨海默病學會（AA）2011年發布的NIA-AA診斷標準中的“很可能”AD的診斷標準；簡易智力狀況量表（MMSE）評分中文盲≤17分，小學程度≤20分，中學程度≤22分，大學程度≤23分；臨床癡呆評定量表（CDR）評分≥1分；Hachinski缺血量表評分≤4分。對照組，同期本科住院患者；年齡大于65歲；MMSE量表評分中文盲＞17分，小學程度＞20分，中學程度＞22分，大學程度＞23分；CDR評分為0分。本研究方案遵循《赫爾辛基宣言》，經重慶市急救醫療中心醫學倫理委員會批準，患者家屬簽署知情同意書。

排除標準：血管性癡呆、帕金森病、抑郁癥、硬膜下血腫、腦出血、腦積液、腦瘤、甲狀腺功能減退、譫妄等所致癡呆或記憶障礙；Hachinski缺血量表評分＞4分；腎臟疾病及其他嚴重精神、軀體疾病。對照組，近年來認知功能有明顯下降；腎臟疾病及其他嚴重精神、軀體疾病。

病例選擇與分組：選取重慶市急救醫療中心老年病科2016年5月至2018年5月收治的69例AD患者作為觀察 組，男40例、女29例，年齡79～99歲、平均（83.10±5.05）歲；將70例非AD患者作為對照組，男34例、女36例，年齡77～96歲、平均（83.80±4.02）歲。兩組患者一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 觀察指標

認知功能：2位主治醫師以上職稱者分別采用MMSE量表、CDR量表、Hachinski缺血量表評估。

相關檢查：患者入院行系統體格檢查，測量身高、體質量，并計算體質量指數（BMI）；完善頭顱CT或MRI影像檢查。抽取患者清晨空腹靜脈血3 mL，抗凝，離心、分離出血清，采用7060型全自動生化分析儀（日本Hitachi公司）檢測總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平。

Klotho蛋白濃度：取患者清晨空腹靜脈血3 mL，抗凝，離心，分離得血漿，采用680型酶標儀（美國BioRad公司），以人Klotho蛋白ELISA檢測試劑盒（美國R&D公司）檢測。按試劑盒說明書及儀器操作標準流程進行。

1.3 統計學處理

采用PASW Statistics 18.0統計學軟件分析。計量資料以表示，行t檢驗；計數資料以率（%）表示，行χ2檢驗；相關因素行Logistic多因素回歸分析。P＜0.05為差異有統計學意義。多因素回歸分析時，血漿Klotho蛋白水平低于中位數視為降低，賦值1，否則賦值0；男性賦值1，女性0；年齡以所有研究對象年齡中位數為分界線，高于中位數賦值1，否則0；糖尿病、高血壓者賦值1，否則0；TC，TG，LDL-C均高于正常值，HDL-C低于正常值者賦值1，否則0。

2 結果

2.1 觀察指標

結果見表1。

2.2 AD相關因素分析

以單因素Logistic回歸分析模型評價AD的相關因素。該模型包括性別、年齡、受教育程度、高體質量指數、高血壓、2型 糖尿病、高TC、高LDL-C、高TG、低HDL-C及低血漿Klotho蛋白水平。結果發現，高齡和低血漿Klotho蛋白水平是AD的危險因素；TG升高有助于減少AD。多因素連續Logistic回歸分析提示，低血漿Klotho蛋白水平和高齡均為AD的獨立危險因素；性別、受教育程度、高BMI、高血壓、2型糖尿病、高TC、高LDL-C、高TG、低HDL-C的P值均大于0.05。詳見表2、表3。

表1兩組患者觀察指標比較

表2 AD危險因素的單因素回歸分析

表3 AD危險因素的多因素連續回歸分析

3 討論

癡呆現已確定的危險因素包括年齡、家族史、遺傳因素，可能的危險因素包括腦外傷、性別、教育程度、婚姻狀況、職業、地區和種族差異、輕度認知功能損害、中風相關風險因素、炎癥、職業暴露、雌激素水平、唐氏綜合征等［5-7］。根據2010年第六次人口普查的結果，我國總人口達13.3億，65歲以上人口接近2.4億，占比達18.05%，按AD 5%［2］的發病率保守估算，目前我國AD患者多于1 100萬。AD可使患者失智甚至失能，需要專人長期照護，給家庭、社會帶來沉重負擔。

增齡、腦血管病是老年期癡呆至關重要的危險因素，本研究中證實，高齡是AD的獨立危險因素，但對此尚無有效干預手段。因此在AD防治措施中，控制腦血管疾病相關危險因素，防治腦血管疾病顯得極其重要。同時，本研究中發現，低血漿Klotho蛋白水平是AD的危險因素。DUBAL等［8-9］發現，Klotho蛋白不僅可提高模型小鼠的認知功能，還可抵抗AD淀粉樣前體蛋白過表達導致的神經退化。Klotho蛋白存在于腎臟、腦室脈絡叢、大腦、海馬、胎盤、小腸、前列腺等組織器官中［10］。有學者認為，腎臟表達的Klotho蛋白進入血液循環，而脈絡叢產生的Klotho蛋白則進入腦脊液［11］。進一步研究發現，腦脊液中Klotho蛋白水平也隨年齡增長而下降，AD患者腦脊液中Klotho蛋白水平也有下降［12］。這與外周血中Klotho蛋白水平具有一致性。

細胞表面存在一些尚未鑒定出的Klotho蛋白特定受體，Klotho蛋白通過與其高親和力相結合，啟動細胞內信號傳導。該信號傳導可抑制胰島素樣生長因子1（IGF-1）受體與胰島素受體底物中酪氨酸的磷酸化，進而導致磷脂酰肌醇激酶3與胰島素結合減少，從而抑制胰島素/IGF-1信號傳導［13］。而胰島素/IGF-1信號傳導的下調與老年癡呆相關。LABAK等［14］研究證實，抑制了腦胰島素受體及其表達的動物，表現出認知障礙和AD常見的神經降解特征。此外，還發現高胰島素血癥可增加腦組織β淀粉樣肽前體蛋白（Aβ）和炎癥指數，從而促進晚期糖化終末產物的形成、脂質活性氧（ROS）的增加，嚴重危害神經元可塑性、記憶和認知系統。綜上推測，血漿Klotho蛋白水平降低，胰島素/IGF-1信號活性減弱，神經降解、腦組織Aβ增加，ROS增加，神經元、記憶和認知系統受到損害，從而有利于AD的發生、發展。

SEMBA等［15］研究發現，AD患者腦脊液中Klotho蛋白水平較對照組下降。KUANG等［16］對AD模型小鼠的研究發現，可溶性Klotho蛋白水平升高可顯著改善記憶障礙和Aβ水平，其機制與抑制IGF-1/Akt/mTOR信號通路有關。由此推測，血漿Klotho蛋白的高表達可能有益于AD的防治，但具體機制尚待研究。

腦組織及腦脊液中均可檢測到Klotho蛋白，且該蛋白具有改善認知功能、Aβ水平等作用，但其抗衰老、改善認知功能的具體臨床機制尚不明確。LEON等［17］通過增加外源性Klotho蛋白片段誘導并增強NMDA依賴性突觸可塑性，從而達到改善小鼠認知功能的目的，為AD的治療提供了新的思路和方法。

綜上所述，低血漿Klotho蛋白水平與AD發病相關，監測血漿Klotho蛋白水平對AD的預防、診斷及預后判斷有重要臨床意義。