濃縮集菌法與其他方法檢測結核分枝桿菌的結果對比分析

張春燕

【摘要】 目的 對比分析濃縮集菌法、直接涂片法、Xpert MTB/RIF法、羅氏培養法檢測痰樣本中結核分枝桿菌陽性率。方法 選擇2018年5月至2019年5月我院185例疑似肺結核患者的痰樣本為試驗對象，均采用濃縮集菌法、直接涂片法、Xpert MTB/RIF法、羅氏培養法進行檢測，比較各種方法的結核分枝桿菌陽性率。結果 濃縮集菌法的陽性檢出率31.35%，較直接涂片法的17.84%明顯升高（P<0.05），但濃縮集菌法（31.35%）與Xpert MTB/RIF法（34.05%）、羅氏培養法（33.51%）的陽性檢出率對比，差異無統計學意義（P>0.05）。結論 應用濃縮集菌法檢測痰樣本結核分枝桿菌具有操作簡易、報告迅速、陽性檢出率高等優點，可為臨床診治提供可靠的參考依據，值得在基層中推廣應用。

【關鍵詞】 結核分枝桿菌;濃縮集菌法;直接涂片法;Xpert MTB/RIF法;羅氏培養法

結核病主要是由于感染結核分枝桿菌所導致的傳染性疾病。相關調查數據顯示[1]，當前全球約有20億人患有結核病，且每年有接近300萬結核病患者死亡。我國為結核病高發的國家之一，其中約有1/3人口感染結核分枝桿菌，嚴重威脅人們身心健康。目前在臨床上，實驗室檢測結核分枝桿菌的方法有很多種，如羅氏細菌培養法、Xpert MTB/RIF法、直接涂片法、濃縮集菌法等。本文為比較上述各項方法檢測痰樣本中結核分枝桿菌的陽性率，探討其臨床價值，特作如下研究。

1 資料和方法

1.1 臨床資料

選擇2018年5月至2019年5月我院185例疑似肺結核患者的痰樣本為試驗對象，其中有127例男性，58例女性，年齡21～80歲，平均（56.31±6.58）歲。

1.2 方法

1.2.1儀器與試劑：LDZX-75KBS立式壓力蒸汽滅菌器;HC-3618R高速冷凍離心機; XW-80A旋渦混合器/振蕩器;美國SHELLAB SCO6WE-2 CO2培養箱;酸性羅氏培養基（鄭州貝瑞特生物技術公司）;奧林巴斯的CX21生物顯微鏡;美國賽沛Gene Xpert分子診斷系統及其配套試劑;抗酸染液（上海遠慕生物科技公司）。

1.2.2檢測方法：（1）樣本采集：采集晨痰，指導患者先進行幾次深呼吸，隨后用力咳出痰液作為痰樣本，取4份痰樣本，存于一次性塑料瓶中送檢。（2）羅氏細菌培養法：取0.1ml經過消化處理的痰樣本，將其接種于酸性羅氏培養基中，于37℃環境中溫育。于樣本接種后的第3d、第7d進行觀察，若有菌落生長的予以抗酸染色處理作進一步證實。以后仍每周察看1次，記錄菌落生長狀況，并采用抗酸染色證實。如果8周后仍無菌落生長則報告陰性。（3）Xpert MTB/RIF法：取1ml痰樣本，加入2mlSR標本處理液，置于振蕩器中劇烈搖動樣本15s，在室溫靜置15min，再于振蕩器中劇烈搖動15s，要求樣本中無痰塊存在。然后用無菌吸管吸取適量已溶化的樣本2ml于檢測盒中，放進檢測模塊打開儀器進行自動監測，結束后直接讀取結果;（4）直接涂片法：選擇痰樣本中含有干酪樣、膿樣變化的痰液0.1ml，均勻涂抹于無菌玻璃片表面，使其形成1cm*2cm的卵圓形痰膜。用黑色記號筆在載玻片的背面編號做標志，隨后進行固定、抗酸染色處理，鏡檢觀察結果;（5）濃縮集菌法：痰樣本進行消化處理，并加入適量的0.5%氫氧化鈉溶液，將樣本置于振蕩器中劇烈搖動3min，以讓痰樣本能夠充分消化。隨后，將樣本進行121℃高壓處理20min，取出樣本管以2500r/min的速率離心處理30min，促使結核桿菌集中沉淀。最后取沉渣制片，進行抗酸染色、鏡檢。

1.3 觀察項目

比較濃縮集菌法與羅氏細菌培養法、Xpert MTB/RIF法、直接涂片法檢測結核分枝桿菌的陽性率。

1.4 統計學分析

選用SPSS20.0軟件，計數資料以百分比描述，予以χ2檢驗，差異有統計學意義為p<0.05。

2 結果

濃縮集菌法檢測結核分枝桿菌陽性率31.35%（58/185）、直接涂片法檢測陽性率17.84%（33/185）、Xpert MTB/RIF法檢測陽性率34.05%（63/185）、羅氏培養法檢測陽性率33.51%（62/185）。濃縮集菌法的陽性檢出率顯著高于直接涂片法（χ2=9.108，p=0.003），但濃縮集菌法分別與Xpert MTB/RIF法、羅氏培養法的陽性檢出率比較，差異均無統計學意義（χ2Xpert MTB/RIF法=0.307，p=0.580;χ2羅氏培養法=0.197，p=0.657）。

3 討論

肺結核的確診依據是在痰樣本中檢測出結核分枝桿菌。因此，如何快速、有效準確地檢出結核分枝桿菌為臨床疾病診治提供可靠的依據是實驗室檢驗的主要課題之一。羅氏細菌培養法為結核桿菌檢測的“金標準”，但培養周期較長，往往需要8周，而且培養的痰樣本需至少有100個/ml細菌數，否則難以及時發現到結核桿菌，影響疾病診治速度[2]。Xpert MTB/RIF法是一種新型的結核桿菌檢測技術，其具有操作簡單、快速診斷、敏感度高等優點，對于結核病的早期診治具有重要的意義[3]。但是目前臨床中該項檢測技術仍未納入到醫保范疇，檢測費用較高，且對檢測儀器要求高，難以在基層醫院中推廣應用。直接涂片鏡檢操作簡單，對檢測設備要求不高，是基層醫療機構檢測結核分枝桿菌的主要手段。但是該檢測方法的敏感度相對較低，而且在檢測過程中痰液粘稠性、痰樣本涂抹不均勻、制片過厚等因素均會影響結核桿菌的檢出率，故其檢測效果并不太理想[4]。而濃縮集菌法可彌補直接涂片鏡檢的不足，其主要通過離心沉淀，盡量將樣本中的結核桿菌濃縮集中于一張載玻片上，隨后按照直接涂片鏡檢的步驟進行檢測，這可以顯著提高結核桿菌檢測的陽性率[5]。本研究結果也顯示，濃縮集菌法的陽性檢出率顯著高于直接涂片法，但濃縮集菌法與Xpert MTB/RIF法、羅氏培養法的陽性檢出率比較無明顯的差異。由此可見，應用濃縮集菌法檢測痰樣本結核分枝桿菌陽性檢出率高，可為臨床診治提供可靠的參考依據，值得在基層中推廣應用。

參考文獻

[1]? ?黃麗美，林健雄，李宏彬，等.肺結核早期診斷中不同檢驗方法的應用[J].現代診斷與治療，2015，26（3）：493-494.

[2]? ? 彭英，蘇欣，江琦，等.新型分子檢測技術在基層實驗室診斷肺結核的效能分析[J].中國防癆雜志，2019，41（2）：145-148.

[3]? 陳軍，陳麗峰，饒有益，等.GeneXpert MTB/RIF試驗與4種結核分枝桿菌檢測方法的比較[J].臨床血液學雜志，2018，31（12）：956-959.

[4]? ?張輝，黃曉英，李素紅.3種方法檢測結核分枝桿菌檢測的比較[J].河南預防醫學雜志，2018，29（7）：498-499.

[5]? ?阿繼成，王戰軍.應用濃縮集菌法檢查2例結核菌感染病例的體會[J].青海醫藥雜志，2014，44（9）：31.