張氏仁寶生肌膏中血竭、兒茶的薄層鑒別研究

馬春芳，張金東，馬 莉，張寶玉，戶曉靜，單于德

(寧夏張氏回醫正骨醫院，寧夏 銀川 750001)

“仁寶張氏”“生肌膏”是寧夏張氏回醫正骨家傳秘方，并在此基礎上，歷經四代人的不斷總結和完善研制而成的傳統回藥膏劑，是由血竭、兒茶、赤石脂、乳香等幾味藥組成，具有行氣活血、化瘀止痛、祛腐生肌、收濕斂瘡之功效。為提高藥品的質量控制要求，采用薄層色譜法鑒別張氏仁寶生肌膏中的血竭、兒茶，以期為其他制劑中血竭、兒茶的鑒別提供依據。

1 儀器與試藥

XS205電子天平(梅特勒-托利多公司)；HH-SY21-Ni4電熱恒溫水浴鍋(北京長安科學儀器廠)；硅膠G薄層板[青島海洋化工廠生產，規格100 mm×100 mm，厚度0.20～0.25 mm，批號：20170212；煙臺化工工業研究所生產，規格100 mm×100 mm，厚度(0.20±0.03)mm，批號：20171101]；預制硅膠H板薄層板[青島海洋化工廠生產，規格100 mm×100 mm，厚度0.20 mm～0.25 mm，批號：20170212；煙臺化工工業研究所生產，規格為100 mm×100 mm，厚度(0.20±0.03)mm，批號：20171101]；血竭對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：960-9607)；兒茶素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：120927-201714)；張氏仁寶生肌膏(寧夏張氏回醫正骨醫院提供，批號 20171201、20171202、20171203)；所用藥材購自寧夏明德中藥飲片有限公司；所用試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 血竭的定性鑒別

2.1.1 供試品溶液制備 取本品30 g，加乙醇40 mL，置水浴上攪拌溶化，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 mL溶解，用乙醚20 mL振搖提取，分取乙醚層，蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，取上清液作為供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液制備 另取血竭對照藥材0.01 g，加乙醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。

2.1.3 陰性對照溶液制備 缺血竭的模擬處方陰性樣品由本院制劑室配制，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.2 薄層定性鑒別

照薄層色譜法[1]試驗，吸取“2.1.1”項下各溶液5 mL，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(19∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.3 結果

供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液在與對照藥材色譜相應的位置上，無相同顏色的斑點，見圖1。

2.4 方法學考察

2.4.1 專屬性考察 取供試品3批，按“2.1.1”項下方法制備，吸取張氏仁寶生肌軟膏供試品溶液、血竭陰性對照溶液和血竭對照藥材溶液各5 μL，按“2.2”項下薄層色譜條件試驗，結果陰性對照無干擾，見圖1。

1.張氏仁寶生肌膏，批號20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號20171203；4.血竭對照藥材；5：張氏仁寶生肌膏血竭陰性樣品

2.4.2 耐用性 不同薄層板的比較：取青島海洋化工廠生產的預制硅膠G板與煙臺化工工業研究所生產的預制硅膠G板，分別按上述方法試驗，結果2種預制板無明顯差別，見圖2。

1.張氏仁寶生肌膏，批號20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號20171203；4.血竭對照藥材；5.張氏仁寶生肌膏血竭陰性樣品

不同溫度比較：取點樣后的薄層板，分別在6℃和28℃中展開，置日光下檢視，斑點清晰。結果表明在6～28℃范圍內試驗，對鑒別無明顯影響，見圖3。

1.張氏仁寶生肌膏，批號20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號20171203；4.血竭對照藥材

不同濕度比較：取點樣后的薄層板，分別在用硫酸調節相對濕度32%和88%的層析缸中展開，置日光下檢視，斑點清晰。結果表明在相對濕度32%～88%之間試驗，對鑒別無明顯影響，見圖4。

1.張氏仁寶生肌膏，批號20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號20171203；4.血竭對照藥材

經上述方法學驗證試驗，結果表明血竭的薄層色譜鑒別方法在方法學驗證要求的變動因素下對鑒別無明顯影響，且重現性良好，操作簡便，斑點清晰，分離效果好，陰性對照無干擾，證明此方法具有專屬性及可行性，適用于本品中血竭的鑒別。

2.5 兒茶的定性鑒別

2.5.1 溶液的制備 供試品溶液的制備：取本品10 g，加甲醇50 mL超聲30 min，放冷，濾過，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，取上清液，作為供試品溶液。對照品溶液的制備：另取兒茶素對照品，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，作為對照品溶液。陰性對照溶液的制備：缺兒茶的模擬處方陰性樣品由本院制劑室配制，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.5.2 薄層定性鑒別 按照薄層色譜法[1]試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各2μL，分別點于同一硅膠H板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(6∶5∶0.8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，于日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

2.5.3 結果 供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液在與對照品色譜相應的位置上，無相同顏色的斑點，見圖5。

2.5.4 方法學驗證 專屬性考察。取供試品3批，按“2.1”項方法制備各溶液，吸取供試品溶液、兒茶對照品溶液和兒茶陰性對照溶液各2 μL，按“2.2”項下的薄層色譜條件試驗，結果陰性對照無干擾，見圖5。

1.張氏仁寶生肌膏，批號20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號20171203；4.兒茶素對照品；5.張氏仁寶生肌膏兒茶陰性樣品

耐用性考察。不同薄層板的比較：取青島海洋化工廠生產的預制硅膠G板與煙臺化工工業研究所生產的預制硅膠H板，分別按“2.2”項下的薄層色譜條件試驗，結果2種預制板無明顯差別，見圖6。

1.張氏仁寶生肌膏，批號20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號20171203；4.兒茶素對照品

不同溫度的比較：取點樣后的薄層板，分別在6 ℃和28 ℃中展開，置日光燈下檢視，斑點清晰。結果表明在6～28 ℃范圍內試驗，對鑒別無明顯影響，見圖7。

1.張氏仁寶生肌膏，批號20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號20171203；4.兒茶素對照品

不同濕度的比較：取點樣后的薄層板，分別在用硫酸調節相對濕度32%和88%的層析缸中展開，置日光燈下檢視，斑點清晰。結果表明在相對濕度32～88%之間試驗，對鑒別無明顯影響，見圖8。

1.張氏仁寶生肌膏，批號20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號20171203；4.兒茶素對照品

上述薄層色譜鑒別方法學試驗結果表明，本制劑兒茶的薄層色譜鑒別方法在方法學驗證要求的變動因素下對鑒別無明顯影響，且重現性良好，斑點清晰，分離效果好，陰性對照無干擾，證明此方法具有專屬性及可行性，適用于本品中兒茶的鑒別。

3 討論

3.1 血竭

張氏仁寶生肌膏處方中以血竭、兒茶為君藥，《回回藥方》云：“‘檐木阿黑云’為阿拉伯語‘血竭’的音譯名，回藥用其散瘀定痛，止血生肌[2]。本實驗采用乙醇溶解去除植物油基質，再用水和乙醚萃取，棄去水相中水溶性成分，乙醚提取血竭有效成分[3]，提取率較好，所得溶液重現性好，可使其展開后顯色更為明顯。參照《中國藥典》[4]血竭項下以三氯甲烷-甲醇(19∶1)為展開劑，采用上行展開，結果表明展開情況好，各斑點分離良好，且主斑點Rf值適中。

3.2 兒茶

兒茶有清熱收濕、生肌作用，為生肌斂瘡之佳品[2]。其主要成分為兒茶素，屬于黃烷醇類化合物，在甲醇中溶解，故本實驗應用甲醇超聲提取樣品中的有效成分，發現其提取效果良好。本實驗參考文獻資料[5]中兒茶薄層鑒別的展開劑，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(6∶5∶0.8)為展開劑，采用上行展開方式，結果表明展開情況良好，各斑點分離良好，且主斑點Rf值適中。

4 結論

張氏仁寶生肌膏含有藥味較多，成分較復雜，且因基質為植物油，制劑較為黏稠、流動性差、不易稱取，提取較困難，在本實驗中，通過有效的前處理，除去干擾雜質，使薄層色譜分離效果好，并且設置陰性對照，用3批樣品實驗確證，該方法專屬性強，血竭、兒茶中有效成分斑點清晰，易于判斷、重現性好，能反映該制劑的質量，可用于該制劑的質量控制。