不同加工方式丹參飲片薄層鑒別研究

鄒欣蓉，謝 宇，龍立慧，羅鈺梅，張玲貞，張洪友，張麗艷*

(1.貴州中醫藥大學，貴州 貴陽 550025；2.貴州廣濟堂藥業有限公司，貴州 貴陽 550014)

丹參是現代醫學研究較多的傳統中藥材之一，為唇形科(Labiatae)鼠尾草屬丹參(SalviamiltiorrhizaBge.)的干燥根及根莖[1]。丹參最早見于《神農本草經》，主產于河北、四川、山東等地，在我國有近2 000年的應用歷史[2]。丹參廣泛用于治療各種瘀血所致的病癥，有活血化瘀、除煩安神等功效[3]，是一種常用的活血化瘀藥。現代藥理學及臨床應用表明，丹參不僅在活血化瘀方面有很好的療效，還在改善心腦血管疾病、抗腫瘤、抗氧化等方面具有良好的藥理作用[4-5]。

超微粉碎技術在20世紀末開始應用于中藥行業，破壁飲片是繼單味浸膏顆粒后出現的一類新型中藥飲片。破壁飲片是可供直接口服的粉末中藥飲片，是傳統飲片利用現代超微粉碎技術粉碎加工為D90<45 μm(300目以上)的粉體[6]。本研究使用的丹參普通破壁飲片、冷凍破壁飲片分別經普通球磨破壁機、冷凍球磨粉碎機超微粉碎加工而成。與傳統飲片相比，破壁飲片具有以下優點：①成分與傳統飲片一致；②提高藥材活性物質利用率和提取率；③攜帶、服用方便；④提高中藥質量可控性等[7-9]。

目前，丹參破壁飲片的研究涉及工藝、質量、安全、有效性以及臨床應用等方面。本研究旨在建立丹參傳統飲片、普通破壁飲片和冷凍破壁飲片中的脂溶性代表成分丹參酮ⅡA和水溶性代表成分丹酚酸B的薄層鑒別方法，分析不同加工方式丹參飲片的差異，為丹參破壁飲片安全、合理、有效地應用和生產提供參考。

1 實驗材料

1.1 試藥

10批樣品為從不同省市零售藥店或飲片公司購得的丹參飲片，所有樣品均經貴州中醫藥大學植物栽培教研室魏升華教授鑒定為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根莖。每批丹參樣品隨機分為3份，一份經實驗粉碎機粉碎過2號篩為傳統飲片，一份經普通球磨破壁機超微粉碎直至D90<45 μm為普通破壁飲片，另一份由冷凍球磨粉碎機超微粉碎至D90<45 μm為冷凍破壁飲片。其中，破壁飲片由貴州廣濟堂藥業有限公司提供。藥材來源信息見表1。

表1 丹參藥材來源

1.2 儀器

KQ5200DE超聲清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；JP2-160電子分析天平(日本)；HH-4數顯恒溫水浴鍋(上海浦東物理光學儀器廠)；ZF7紫外分析儀(鞏義市予華儀器有限責任公司)。

1.3 試劑

硅膠G(批號：20180601，青島鼎康硅膠有限公司)；硅膠GF254(批號：20180619，青島鼎康硅膠有限公司)；丹酚酸B(批號：11907227)、 丹參酮ⅡA(批號：110766-201721)、丹參對照藥材(批號：120923-201615)均購于中國食品藥品檢定研究院；甲苯、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲酸均為分析純。

2 方法與結果

2.1 丹參酮ⅡA供試品及對照品溶液制備

供試品溶液：精密稱取丹參傳統飲片、普通破壁飲片、冷凍破壁飲片藥材粉末各1 g，分別置錐形瓶中，各加乙酸乙酯8 mL，用超聲提取30 min后濾過，濾液水浴蒸干，再加入乙酸乙酯1 mL使其溶解，作為供試品溶液。

丹參酮ⅡA對照品溶液：取丹參酮ⅡA對照品適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成約1 mg·mLkg-1的溶液，作為對照品溶液。

2.1.1 傳統飲片丹參酮ⅡA的TLC鑒別 吸取上述對照品溶液和傳統飲片供試品溶液各5 μL。根據薄層色譜法2015年版《中國藥典》四部通則0502試驗，以甲苯-乙酸乙酯(19∶3)為展開系統，分別依次點樣于同一硅膠G板上，展開，取出，晾干，在日光下觀察。結果顯示，在薄層色譜圖中，丹參傳統飲片樣品，對照品和對照藥材在相應位置出現了顏色相同的斑點，色譜行為基本一致，如圖1所示。

注：1.丹參酮ⅡA對照品；2.丹參對照藥材；3～12.樣品。

2.1.2 普通破壁飲片丹參酮ⅡA的TLC鑒別 吸取上述對照品溶液和普通破壁飲片供試品溶液各7 μL。根據薄層色譜法2015年版《中國藥典》四部通則0502試驗，以甲苯-乙酸乙酯(19∶3)為展開系統，分別依次點樣于同一硅膠G板上，展開，取出，晾干，在日光下觀察。結果顯示，在薄層色譜圖中，丹參普通破壁飲片樣品，對照品和對照藥材在相應位置出現了顏色相同的斑點，色譜行為基本一致，如圖2所示。

注：1.丹參酮ⅡA對照品；2.丹參對照藥材；3～12.樣品

2.1.3 冷凍破壁飲片丹參酮ⅡA的TLC鑒別 吸取上述對照品溶液、冷凍破壁飲片供試品溶液各7 μL。根據薄層色譜法2015年版《中國藥典》四部通則0502試驗，以甲苯-乙酸乙酯(19∶3)為展開系統，分別依次點樣于同一硅膠G板上，展開，取出，晾干，在日光下觀察。結果顯示，在薄層色譜圖中，丹參冷凍破壁飲片樣品，對照品和對照藥材在相應位置出現了相同顏色的斑點，色譜行為基本一致，如圖3所示。

注：1.丹參酮ⅡA對照品；2.丹參對照藥材；3～12.樣品。

2.2 丹酚酸B供試品及對照品溶液制備

供試品溶液：精密稱取丹參藥材傳統飲片、普通破壁飲片、冷凍破壁飲片藥材粉末各0.2 g，分別置圓底燒瓶中加入75%甲醇25 mL，加熱水浴回流1 h，過濾，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液。

丹酚酸B對照品溶液：稱取丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加75%甲醇制成濃度為1 mg·mLkg-1的溶液，作為對照品溶液。

2.2.1 傳統飲片丹酚酸B的TLC鑒別 吸取對照品溶液、傳統飲片供試品溶液各5 μL。根據薄層色譜法2015年版《中國藥典》四部通則0502試驗，依次點樣于同一硅膠GF254板上，以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇-甲酸(2∶4∶3∶0.5∶2)為展開系統，展開，取出，晾干，置紫外燈(254 nm)下觀察。結果顯示，在薄層色譜圖中，丹參傳統飲片樣品，對照品和對照藥材在相應位置出現了顏色相同的斑點，其色譜行為基本一致，如圖4所示。

注：1.丹酚酸B對照品；2.丹參對照藥材；3～12.樣品。

2.2.2 普通破壁飲片丹酚酸B的TLC鑒別 吸取對照品溶液、普通破壁飲片供試品溶液各5 μL。根據薄層色譜法2015年版《中國藥典》四部通則0502試驗，依次點樣于同一硅膠GF254板上，以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇-甲酸(2∶4∶3∶0.5∶2)為展開系統，展開，取出，晾干，置紫外燈(254 nm)下觀察。結果顯示，在薄層色譜圖中，丹參普通破壁飲片樣品，對照品和對照藥材在相應位置出現了相同顏色的斑點，色譜行為基本一致，如圖5所示。

2.2.3 冷凍破壁飲片丹酚酸B的TLC鑒別 吸取對照品溶液、冷凍破壁飲片供試品溶液各5 μL。根據薄層色譜法2015年版《中國藥典》四部通則0502試驗，分別依次點樣于同一硅膠GF254板上，以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇-甲酸(2∶4∶3∶0.5∶2)為展開系統，展開，取出，晾干，置紫外燈(254 nm)下觀察。結果顯示，在薄層色譜圖中，丹參冷凍破壁飲片樣品，對照品和對照藥材在相應位置出現了相同顏色的斑點，色譜行為基本一致，如圖6所示。

注：1.丹酚酸B對照品；2.丹參對照藥材；3～12.樣品。

注：1.丹酚酸B對照品；2.丹參對照藥材；3～12.樣品。

3 討論

本研究對丹參傳統飲片、普通破壁飲片、冷凍破壁飲片中丹參酮ⅡA的提取溶劑和展開體系進行了考察，分別以乙酸乙酯和甲醇為溶劑，結果顯示用乙酸乙酯提取的樣品斑點較清晰圓整；通過對展開劑進行考察發現，以甲苯-乙酸乙酯(19∶3)為展開系統可得到分離度較好、清晰圓整、明顯的斑點。同時，在預實驗中發現丹參傳統飲片、普通破壁飲片、冷凍破壁飲片的丹參酮ⅡA薄層鑒別，在相同點樣量條件下普通破壁飲片和冷凍破壁飲片的斑點不清晰，故加大點樣量使斑點清晰、明顯，最終確定傳統飲片點樣量為5 μL，普通破壁飲片和冷凍破壁飲片點樣量均為7 μL，提示破壁飲片中的脂溶性成分丹參酮ⅡA可能被破壞。

丹參傳統飲片、普通破壁飲片、冷凍破壁飲片中丹酚酸B的薄層鑒別研究通過對提取方法和展開體系進行考察，結果顯示回流提取法和超聲提取法兩種提取法斑點數相同，目標點位置相同，但回流提取的樣品更加穩定，故提取方法選擇回流提取法；展開劑以甲苯-乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇-甲酸(2∶4∶3∶0.5∶2)得到圓整清晰、分離度較好的斑點。丹參傳統飲片、普通破壁飲片、冷凍破壁飲片中丹酚酸B的薄層鑒別結果顯示，三種飲片點樣量相同時，得到的色譜斑點個數、顏色、位置基本一致，由此可以初步確定，丹參經破壁處理后其丹酚酸B含量無明顯變化。

有關實驗研究顯示，丹參酮ⅡA易受光照和溫度的影響，在日光和高溫條件下可發生降解反應而使含量降低[10-11]，而丹酚酸B較穩定[12]，在破壁過程中造成了脂溶性成分丹參酮ⅡA含量降低，而丹酚酸B無明顯變化，可能是由于丹參酮ⅡA本身穩定性較差，也可能是受破壁過程中物料產熱等因素的影響。因此，今后需對丹參破壁工藝進行深入研究，以實現丹參破壁飲片安全、合理、有效地生產和應用。