瑤藥材廣東石豆蘭生藥學研究

白燕遠，李金月，李洪梨，李耀燕，閆國躍，張 曼，李 彤

(廣西中醫藥大學 瑤醫藥學院，廣西 南寧 530001)

瑤藥材廣東石豆蘭為蘭科植物廣東石豆蘭(BulbophyllumkwangtungenseSchltr.)的干燥假鱗莖或全草。廣東石豆蘭又名單葉巖珠、巖棗，分布于浙江、江西、福建、湖北、湖南、廣東、廣西、四川等地，通常生于海拔約800m的山坡林下巖石上[1]?？扇萑胨?。最近廣西瑤藥標準第二卷的編寫前準備工作正在進行中，廣東石上蝦是瑤藥標準第二卷的收錄品種之一，筆者圍繞標準編制的內容，對廣東石豆蘭進行相關研究。從生藥學角度對廣東石豆蘭進行了研究，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究材料

本研究共收集樣品8批，詳細信息見表1，經廣西中醫藥大學韋松基教授和廣西中醫藥研究院黃云峰副研究員鑒定為蘭科植物廣東石豆蘭BulbophyllumkwangtungenseSchltr.。完成樣品收集后，將8批樣品進行粉碎處理，并統一過40目篩，備用。

表1 廣東石豆蘭樣品信息

1.2 研究方法

本研究采用文獻查閱和實驗研究相結合的方法。

1.2.1 藥理作用 廣東石豆蘭水提物的止咳作用(濃氨水噴霧引咳法)研究。取50只小鼠，隨機分為空白對照組，模型對照組，陽性藥止咳片(1.2 g·kg-1)組，石上蝦水提物高、中、低劑量(7.5、5.0、2.5 g生藥·kg-1，相當于人日用劑量的30倍、20倍、10倍)組，每組10只。各給藥組小鼠按20 mL·kg-1體重灌胃給予相應藥物，空白對照組和模型對照組灌胃給予等體積蒸餾水，連續7天，每天1次。第7天末次給藥1 h后，將小鼠置于2L玻璃鐘罩內，超聲霧化噴入30%氨水10 s引咳，記錄小鼠咳嗽潛伏期(從噴入濃氨水到產生咳嗽的時間為咳嗽潛伏期)及3 min內咳嗽(小鼠出現腹肌收縮、縮胸，張大嘴為咳嗽)次數。

1.2.2 毒理學實驗 選取18～22 g小鼠60只，分為3組，每組20只，雌雄各半。禁食不禁水12 h，每天灌胃給藥3次，給藥間隔4 h，給藥體積均為40.0 mL/kg。其中空白對照組給予等體積蒸餾水，石上蝦水提物組給予最大耐受濃度藥液(1.84 g生藥/mL)。給藥后即刻及其后14天內，觀察記錄小鼠出現的中毒癥狀及死亡情況。觀察期結束時，處死全部存活小鼠進行肉眼尸檢，以觀察內臟的病變。

1.2.3 鑒別 性狀鑒別：肉眼觀察廣東石豆蘭并描述相關性狀。顯微鑒別：制作廣東石豆蘭假鱗莖、葉和莖的橫切面切片以及粉末片，在顯微鏡下觀察并拍圖，然后描述相關特征。

薄層色譜：取本品粉末1 g，加甲醇溶液10 mL，超聲處理60 min，過濾，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試液。取對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2015版四部通則 0502)試驗，分別吸取廣東石豆蘭、對照藥材各1～5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(6∶4)為展開劑，上行展開，展至8 cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰。同時進行耐用性實驗考察：采用點狀點樣，①對不同預制板(青島海洋化工廠，批號：20181221，10 cm×15 cm，批號：20191209，10 cm×20 cm；青島碩遠硅膠科技有限公司，批號：20191011，10 cm×10 cm)的展開效果進行考察；②對不同展開溫度：12 ℃、25 ℃進行考察；③對不同相對濕度(RH)：46%、88%進行考察。

1.2.4 測定 水分測定：按照水分測定法(《中國藥典》2015版四部通則 0832第二法)對本品8批樣品進行水分測定。灰分測定：按照灰分測定法(《中國藥典》2015版四部通則2302總灰分測定法和酸不溶性灰分測定法)對本品8批樣品進行總灰分和酸不溶性灰分測定。浸出物測定：分別用水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、無水乙醇為溶劑(以GDSDL～1為供試品)，照浸出物測定法(《中國藥典》2015版四部通則2201)進行預試測定，結果發現熱水提取效果最佳，最終確定以水為溶劑，按照水溶性浸出物測定法(《中國藥典》2015版四部通則 2201)項下的熱浸法，對本品8批樣品進行浸出物測定。

2 結果

2.1 化學成分

研究表明，廣東石豆蘭全草含芪類化合物、多苯酚類、三萜類、甾類及糖苷類等化合物[2]。

2.2 藥理作用

實驗結果表明：與空白對照組比較，止咳片和廣東石豆蘭水提物高劑量(7.5 g藥材·kg-1)均能減少濃氨水導致小鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數，差異具有統計學意義(P<0.01，P<0.05)；廣東石豆蘭水提物中，低劑量對濃氨水導致小鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數影響不大(P>0.05)。結果見表2。

表2 廣東石豆蘭水提物止咳作用

2.3 毒理學實驗

急性毒性試驗結果表明，一天給予3次廣東石豆蘭水提物后，連續觀察14天，小鼠狀態良好，無死亡情況發生。解剖小鼠，肉眼觀察小鼠的腦、心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，未發現明顯異常。計算空白對照組小鼠體重增長33.5%，計算廣東石豆蘭水提物組小鼠體重增長率為36.69%；廣東石豆蘭水提物的最大耐受量為220.80 g生藥·kg-1，相當于人用量(0.25 g生藥·kg-1)的883倍，說明小鼠在220.80 g生藥·kg-1劑量下灌胃給藥，未出現急性毒性反應。

2.4 鑒別

2.4.1 性狀鑒別 根莖纖細，直徑1～1.5 mm，每隔1.4～2.5 cm生一假鱗莖，卵狀矩圓形，類圓錐形，長0.8～1.5 cm，直徑4～8 mm，表面具細總棱紋，近根莖的一側具一較寬的凹槽，基部不收縮成柄狀，頂端生葉1枚，矩圓形，長1.6～2.7 cm，寬7～11 mm，頂端微凹，基部近無柄。氣微，味甘、淡[3]。見圖1。

圖1 廣東石豆蘭藥材

2.4.2 顯微鑒別 假鱗莖橫切面：表皮細胞1層，外有較厚蠟質層，形狀較小，不規則?；颈”诮M織細胞含草酸鈣簇晶，較小，直徑8～13 μm，棱角鈍；未見草酸鈣針晶；外圍的維管束外側有帽狀纖維束；中部維管束較大，其內外側均有纖維束[3]。見圖2。

葉橫切面：上、下表皮均有較厚的蠟質層，上、下表皮細胞各1列。表皮內均具有1～2層薄壁細胞，葉肉未分化，細胞形狀相似，類圓形，細胞排列緊密，胞內多見草酸鈣簇晶。外韌維管束間斷成排列于葉肉中，外層具石細胞群。偶見下陷氣孔[3]。見圖3。

1.表皮；2.皮層；3.初生組織；4.草酸鈣簇晶；5.纖維束；6.維管束

1.下表皮蠟質層；2.下陷氣孔；3.下表皮；4.維管束；5.石細胞群；6.皮層薄壁細胞；7.葉肉；8.上表皮

莖橫切面：表皮細胞外有較厚的角質層，表皮細胞1層，形狀較小，不規則。皮層較寬，由多層不規則薄壁細胞組成，中間為多個維管束均勻分散分布形成的維管柱[3]。見圖4。

1.表皮；2.皮層；3.初生組織；4.維管束

2.4.3 薄層色譜 供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，見圖5。耐用性實驗結果均表明本法的耐用性良好。

1.GDSDL-1；2.GDSDL-2；3.GDSDL-3；4.GDSDL-4；5.GDSDL-5；6.GDSDL-6；7.GDSDL-7；8.GDSDL-8(對照藥材)；A.紫色斑點；B.紅色斑點；C.紅黃色斑點；D.紅色斑點

2.5 測定

2.5.1 水分測定 據最高值、最低值及平均值，將本品水分限度擬定為不得過9.5%。結果見表3。

表3 廣東石豆蘭樣品水分測定結果 (%)

2.5.2 灰分測定 總灰分測定結果見表4，據最高值、最低值及平均值，將本品總灰分限度擬定為不得過6.0%。酸不溶性灰分測定結果見表5，據最高值、最低值及平均值，將本品酸不溶性灰分限度擬定為不得過1.3%。

表4 廣東石豆蘭樣品總灰分測定結果 (%)

表5 廣東石豆蘭樣品酸不溶性灰分測定結果 (%)

2.5.3 浸出物測定 結果見表6，據最高值、最低值及平均值，將本品浸出物限度擬定為不得少于20%。

表6 廣東石豆蘭樣品浸出物測定結果 (%)

3 結論

本研究分析了廣東石豆蘭的生藥學研究資料，包括化學成分、藥理作用、毒理學、性狀鑒別、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、水分測定、灰分測定及浸出物測定，可為該藥材的進一步研究提供參考。