老年獲得性免疫缺陷綜合征患者Th17/Treg失衡對繼發真菌感染的影響

張亞武 (武漢市金銀潭醫院感染四科，湖北 武漢 430012)

獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)是一種傳染性較強的傳染病，可經性接觸、血液、母嬰傳播等途徑感染，于感染科較為多見，對社會具有較大危害性〔1〕。該病既往多發于青壯年，但隨著獨居老人的增多，老年AIDS發病率呈逐年增長趨勢，而老年群體因自身免疫力低下，且多合并基礎疾病，若其長期應用抗生素易發生繼發性真菌感染，進而增加臨床治療難度，影響預后〔2,3〕。輔助性T細胞(Th)17、調節性T細胞(Treg)是CD4T細胞中功能相反的2個亞群，其于真菌感染、腫瘤、自身免疫系疾病發展過程中均具有重要作用。有學者指出，Th17/Treg失衡與老年AIDS患者繼發真菌感染存在一定相關性〔4〕。但該觀點尚未得到臨床證實，且相關研究報道較少，本研究旨在探討老年AIDS患者Th17/Treg失衡對繼發真菌感染的影響，為臨床診治提供有效指導。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性收集武漢市金銀潭醫院2018年4月至2019年10月就診的87例老年AIDS患者臨床資料，其中男47例，女40例；年齡64～82歲，平均(73.46±3.45)歲；納入條件：均符合《中國艾滋病診療指南(2018版)》〔5〕中AIDS診斷標準，且經實驗室蛋白印跡實驗法檢查證實血清人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體為陽性；無心、肝、腎等重要臟器功能不全；近期未使用抗菌藥物；臨床資料完整。排除條件：合并其他感染性疾病；合并自身免疫系統疾病；合并中樞系統疾病；合并嚴重心腦血管疾病；精神異常，交流障礙。根據所有老年AIDS患者繼發真菌感染情況，將其分為單純AIDS組(n=53)與繼發真菌感染AIDS組(n=34)，選取同期于我院正常體檢的32例老年群體作為對照組。3組年齡、性別、體重、不良嗜好、婚姻狀況、文化程度對比差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 3組基線資料對比

1.2方法 統計所有老年AIDS患者病原菌檢查結果，檢查方法：取患者血液、尿液、痰液、皮屑、糞便等同一標本進行真菌培養，若一個標本內連續2次及以上均檢出同1種真菌或經涂片檢查可見大量真菌孢子或菌絲，結合繼發性真菌感染臨床癥狀，并依據《血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌感染的診斷標準與治療原則(第三次修訂)》〔6〕中相關標準分組。Th17、Treg檢測方法：取患者清晨空腹肘靜脈血10 ml，置于肝素抗凝管內，以聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-hypaque)密度梯度離心法分離出外周血單個核細胞(PBMC)備用；①Th17檢測：取1×106PBMC，加入5 μg/L佛波醇乙酯(PMA)與1 mg/L離子霉素，于37℃環境下孵育5 h后，磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2遍；分別加入20 μg CD3-Percp、20 μg CD4-APC，于4℃避光環境下進行染色，待染色30 min后，PBS洗2遍；將洗好后標本應用Fix/Prem medium A 液固定，待固定15 min后，分別添加Fix/Prem medium B 液、FITC-IL-17A破膜進行染色，于室溫避光環境下孵育20 min后，PBS洗2遍，應用美國BD公司生產的FACS Calibur流式細胞儀，采用Flowjo軟件評估Th17含量；②Treg檢測：取1×106PBMC，分別加入20 μg CD3-Percp、20 μg CD4-APC、20 μg CD25-PE，于4℃環境下進行染色，待染色30 min后，PBS洗2遍；將洗好后標本加入1 ml Foxp3固定/破膜工作液，于4℃環境下孵育30 min，待孵育結束后，離心去除上層清液，并應用Foxp3破膜緩沖液洗1遍；最后添加20 μl FITC-Foxp3抗體，于4℃環境下進行染色，待染色30 min后，PBS洗2遍，并進行重懸細胞，應用美國BD公司生產的FACS Calibur流式細胞儀，以Flowjo軟件分析Treg含量，比較3組Th17/Treg差異，分析Th17/Treg對老年AIDS繼發真菌感染的影響。

1.3統計學方法 采用SPSS18.0軟件進行t檢驗、單因素方差分析、LSD-t檢驗、一般線性回歸檢驗、χ2檢驗，作線性回歸方程。

2 結 果

2.13組Th17/Treg對比 對照組Th17/Treg(1.16±0.34)最高，其次為單純AIDS組(0.58±0.13)，繼發真菌感染AIDS組最低(0.21±0.07)，3組差異有統計學意義(F=189.636，P=0.000)。

2.2Th17/Treg比值與老年AIDS患者繼發真菌感染的線性回歸結果 將Th17/Treg比值作為自變量，將老年AIDS患者繼發真菌感染作為因變量，線性回歸檢驗結果顯示，Th17/Treg失衡可能對老年AIDS患者繼發真菌感染存在影響(P<0.05)，得到線性回歸方程：Y=2.919-1.429 X。見表2。

表2 Th17/Treg比值與老年AIDS患者繼發真菌感染的線性回歸結果

3 討 論

老年AIDS屬于感染科常見疾病，主要因HIV病毒感染所致，具有較高致死率，對患者身心健康及生命安全具有嚴重影響〔6，7〕。因HIV入侵機體后易攻擊CD4T淋巴細胞，破壞免疫功能，故老年AIDS繼發性感染發生率較高，而繼發真菌感染易導致產生耐藥性，增加臨床治療難度，影響患者預后，而有研究顯示，早期予以合理抗生素可有效扼制疾病發展，延長患者生存時間，因此盡早明確繼發性真菌感染發生情況對臨床診治至關重要〔8，9〕。

Th17、Treg是CD4T淋巴細胞中主要的2個亞群，其中Th17是由Th0細胞于細胞白細胞介素(IL)-6、IL-23刺激下分化而來，具有分泌IL-17、IL-22等促炎因子作用，而IL-17可激活T細胞，刺激多細胞分泌炎癥因子，加劇機體炎癥反應，嚴重可誘發自身免疫性疾病〔10，11〕。Treg屬于調節性T細胞的一種，除來源于胸腺外，還可由外周細胞誘導產生，于外源性抗原誘導下，可通過分泌相應細胞抑制因子與細胞間接觸發揮免疫抑制功能，經大量研究顯示，該細胞于腫瘤感染免疫、微生物感染免疫、免疫穩態維持等方面均具有重要作用〔12，13〕。而老年AIDS患者若發生繼發性真菌感染，病原菌進入機體后易對免疫信號通路中胱天蛋白酶募集域蛋白9產生依賴性，進而促使Th17細胞分化，同時可通過特異性識別受體激發Th17細胞反應，抑制Th17細胞功能，同時據相關研究顯示，Th17及其分泌的IL-7對真菌感染具有保護作用，故Th17于老年AIDS患者繼發性真菌感染發展中具有重要作用〔14，15〕。研究指出，Treg于真菌感染導致的炎癥反應早期可促進細胞增殖、活化，大量分泌IL-10及調節細胞毒性T細胞參與免疫反應過程，抑制機體炎癥反應程度，同時于炎癥反應晚期可抑制Th2細胞介導的免疫應答或變態反應，以減輕炎癥作用，扼制疾病發展〔16〕。正常情況下，Th17與Treg細胞功能與分化過程呈相互對抗狀態，且其比例相較平衡，但當兩者比例失衡，易紊亂機體免疫穩定狀態，增加真菌感染率，進而易導致老年AIDS患者繼發真菌感染，而臨床針對Th17/Treg失衡者，需對其進行病原菌檢測，以了解病情發展，盡早予以臨床治療〔17，18〕。但本研究因納入樣本量較少，故研究結果存有一定局限性，臨床仍需加大樣本量探討，以證實本研究結果真實性。

綜上，Th17/Treg失衡可能對老年AIDS患者繼發真菌感染存在影響，臨床需密切監測老年AIDS患者Th17、Treg水平變化，并予以相應治療措施，預防繼發性真菌感染發生。