伊紅染液在小組織標本組織處理預染色中的改良應用

楊 屹，周林艷

隨著人們健康意識不斷增強和醫療需求的不斷增長，尤其是不宜手術的腫瘤晚期患者明確診斷與靶向治療的需求，內窺鏡和穿刺等微創技術得到廣泛應用，使得小標本如胃腸鏡、鼻咽鏡、細針穿刺活檢標本不斷增多。因此小標本的收集、取材、包埋、切片等制片環節對診斷與進一步基因檢測至關重要。未經預染色的小組織標本，由于在制片過程中未經染色預處理，色彩不明顯，與包埋的石蠟難以區分，給病理技術員的工作帶來不便，影響了工作效率的提高，甚至因為組織塊太多太小而導致遺漏的可能。因此良好的預染色可以提高技術員的工作效率和制片質量。作者在日常工作中不斷實踐摸索，在原預染方法上進行改良，發現在脫水最后一缸95%乙醇中添加伊紅的方法對比其他預染色方法有更好的效果，現介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料收集常州市金壇區病理中心活檢小標本：穿刺活檢等小標本共160例。全自動組織脫水機徠卡Asp300s；組織包埋儀：派斯杰BM450A型；10%中性福爾馬林；二甲苯；75%乙醇；95%乙醇；無水乙醇；醇溶性伊紅。

1.2 方法收集的穿刺標本均固定5 h以上。160例標本隨機分成4組，每組40例。實驗組：在最后一缸95%乙醇中添加4%伊紅，三組對照組：(1)對照組1在脫水機第1缸10%中性福爾馬林中添加4%伊紅；(2)對照組2取材時滴染(時間1 min)；(3)空白對照組未采取任何預染手段(表1)。脫水程序均按常規標本脫水、透明、浸蠟程序相同處理。制片包括包埋、切片均按技術操作規范完成[1]。并由同一名經驗豐富的技術員完成四組標本的所有制片過程。

表1 四組組織處理方式

1.3 結果判定經過脫水、透明、浸蠟處理后，組織呈現深紅色判定為()，組織呈現淡粉紅色判定為(+)，組織無著色判定為(-)(圖1)。

圖1 預染色結果：A.組織呈深紅色()；B.組織呈淡粉紅色(+)；C.組織無著色(-)

1.4 統計學分析所有數據應用SPSS 21.0軟件進行統計學分析，四種方法的各項指標是否具有統計學差異采用多個樣本比較的秩和檢驗、χ2檢驗及單因素方差分析。

2 結果

2.1 組織眼觀效果差異通過脫水、透明、浸蠟處理后的小標本，結果顯示使用三種不同預染方法的標本均不同程度著色，且實驗組的染色效果明顯好于其他兩種預染方法(P<0.01，表2)。

表2 四種方法的效果肉眼觀對比

2.2 鏡下染色效果4組標本在同一位技術員、同批次制片并HE染色后在鏡下觀察，結果顯示4種方法的染色效果差異均無顯著性(圖2)。

ABCD

2.3 甲級片比例的差異實驗組、對照組1、對照組2、空白對照組的甲級片比例分別為97.5%、97.5%、92.5%、92.5%，結果顯示四組差異無顯著性(P=0.434)。

2.4 工作效率的比較分析四組實驗在工作效率中的差異，結果顯示四者包埋、切片所用時間差異具有顯著性(表3)。經過預染色處理的三組標本在制片效率上明顯高于空白對照組標本(P<0.01)；且在最后一缸95%乙醇中添加伊紅的標本(實驗組)在制片中工作效率高于使用其他兩種預染方法的標本(P<0.01)。

表3 4種方法工作效率的比較

3 討論

內窺鏡及穿刺小組織標本體積小，標本來源珍貴，且在制片過程如包埋、切片中不明顯，難以辨認。技術員稍有不慎就可能將組織包埋在不同的平面，甚至會丟失組織，并且在切片過程中增加了技術員操作上的難度，也增大了診斷醫師漏診的幾率。

目前國內病理科常采用的小標本預染色方法有：(1)取材時使用伊紅滴染組織[2-5]；(2)在脫水機中使用伊紅-福爾馬林固定液預染小標本[6]。作者經過多次實踐摸索，采用在脫水機中的最后一缸95%乙醇中添加伊紅的方式對小標本進行預染色，與上述兩種方法在預染色效果、工作效率與最終制片質量方面進行了對比，結果顯示在最后一缸95%乙醇中添加伊紅的預染效果好于其他兩種預染方法，且明顯提高了制片工作的效率。四組標本制成的HE切片鏡下觀察均顯示結構清晰，層次分明，甲級片比例差異無顯著性。因此作者認為在最后一缸95%乙醇中添加伊紅的方法可行且能顯著提高工作效率。

關于在最后一缸脫水95%乙醇中添加伊紅較其他兩種預染色方法效果更好的原因，可能是組織在經乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟浸蠟后，伊紅被洗脫，造成預染色效果不佳。此外，作者沒有在脫水程序中最后兩缸無水乙醇里添加伊紅，而選擇在它們前一缸的95%乙醇中添加伊紅，是考慮到伊紅溶液中含有部分的水會影響組織的脫水效果，且經過多次實驗，發現在95%乙醇中添加200 mL伊紅使濃度達到4%即可獲得良好的預染色效果，伊紅濃度過低其預染色效果不佳，濃度過高預染色效果提升不明顯且浪費試劑。

綜上所述，小標本的預染色是十分必要的，且在95%乙醇中添加適量伊紅可以使小標本在制片過程中顯示鮮艷的顏色，有利于技術員進行包埋與切片，提高了制片效率，減少不必要的差錯。該方法簡便快捷，節約試劑，效果穩定且良好，值得推廣應用。