ANCA不同檢測方法對慢性支氣管炎患者早期診斷的價值研究

于紅博 王海波

1.吉林省吉林市中心醫院檢驗科，吉林吉林 132000；2.吉林醫藥學院附屬醫院檢驗科，吉林吉林 132013

慢性支氣管炎是氣管、支氣管黏膜及周圍組織的一種慢性非特異性炎癥，是我國老年人群的一種常見病和多發病，據相關醫學統計，發病率約為15%[1-3]。患者病后，初期癥狀僅表現為咳痰、咳嗽和喘息等，隨著病情的進展，后期可導致肺氣腫等多種并發癥，甚至引起呼吸衰竭和窒息等，直接危及患者生命[4-5]。因此慢性支氣管炎患者的早期診斷，是改善和提高患者康復質量的重要前提。近年來，隨著檢驗醫學的發展，抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）的檢測逐步成為慢性支氣管炎患者早期診斷的一個新的研究方向。常規的檢驗方法包括線性免疫分析法和間接免疫熒光法等，為了進一步探討不同檢測方法的準確性，我院檢驗科根據慢性支氣管炎患者患病程度的不同，分為輕癥組和重癥組兩組，分別采取線性免疫分析法、間接免疫熒光法和聯合檢測的方法加以檢測。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2019年9月～2020年1月檢驗科收集的281份血清樣本作為研究對象。男151例，女130例，年齡19～76歲，平均（51.1±6.2）歲。69例為確診的慢性支氣管炎患者，其中39例為輕癥支氣管炎患者，30例為重癥慢性支氣管炎患者。其余212例為體檢中心體檢的健康人群。慢性支氣管炎的診斷標準參照符合中華醫學會呼吸學分會制定的《慢性阻塞性肺炎診治指南》中的相關標準。另外根據患者支氣管炎患病程度的不同，將患者血氧分壓檢測結果和動脈血二氧化碳分壓檢測結果分別≥60mm Hg和≤55mm Hg定義為輕癥患者，將檢測結果分別＜60mm Hg和＞55mm Hg的患者定義為重癥患者。

1.2 檢驗方法

研究對象均清晨空腹采血5mL，分離血清后，放入-20℃冰箱中保存。然后分別采取線性免疫分析法、間接免疫熒光法和聯合檢驗的方法檢測ANCA。在線性免疫分析法檢測方面，試劑盒購自德國IMREC公司。實驗步驟為檢驗醫師首先將核抗原印跡于硝化纖維膜上，將非特異反應區封閉，切割纖維膜為膜條。結合膜條上的抗原與特異性抗體，然后剔除未結合蛋白。加入辣根過氧化物酶標記的抗人IgG二抗與之結合，加入TMB底物，結合抗體表現藍色的免疫復合物。ANCA陽性的判定標準為：實驗完成后，將膜條與試劑盒配套的Cut-Off、PR3、MPO三條帶進行顏色比較。若顏色比Cut-Off同色或偏深，則判斷ANCA為陽性，反之判斷為陰性[6]；在間接免疫熒光法檢測方面，試劑盒購自歐盟公司。檢驗師先將生物載片從試劑盒中取出。用磷酸緩沖鹽溶液1∶100稀釋血清和抗體。然后將加樣板置于泡沫板上，滴加稀釋后的血清樣本25μL于加樣板的反應區中，開始第一次溫育，時間為30min。溫育完成后，用磷酸鹽緩沖液沖洗載片1s后，浸入脫色缸浸洗5min。加異硫氰酸熒光素標記羊抗人IgG，再次溫育，用磷酸鹽緩沖液沖洗和脫色缸浸洗，最后使用蓋玻片將樣本封片，實驗操作結束。在熒光顯微鏡下判斷結果。ANCA的陰性判斷標準為中性粒細胞無特異性熒光。胞漿型抗中性粒細胞抗體（cANCA）陽性的判定標準為整個中性粒細胞胞漿中，均勻分布顆粒型熒光，細胞核未顯示熒光。核周型抗中性粒細胞抗體（pANCA）陽性的判定標準為在中性粒細胞核周呈現出外觀為帶狀且光滑的熒光。在聯合檢驗方面，樣本同時采用線性免疫分析法和間接免疫熒光法檢驗，其中任何一種方法檢驗結果為陽性，則判斷結果為陽性。

1.3 觀察指標

（1）不同檢測方法檢查患者ANCA陽性率結果比較；（2）不同檢測方法檢測結果的敏感度比較。

1.4 統計學方法

采用SPSS22.0統計學軟件對本研究數據進行分析。計數資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各種檢測方法檢測ANCA的陽性率結果比較

輕癥患者ANCA陽性率結果，見表1，三種檢測方法總陽性率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；重癥患者ANCA陽性率結果見表2，三種檢測方法總陽性率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.2 不同檢測方法的敏感度比較

輕癥患者和重癥患者檢測結果的敏感度比較見表3。對于輕癥患者，聯合檢驗的敏感度高于線性免疫分析法和間接免疫熒光法，差異有統計學意義（P＜0.05）；對于重癥患者，聯合檢驗的敏感度高于線性免疫分析法，差異有統計學意義（P＜ 0.05）。

表1 輕癥患者ANCA陽性率檢測結果[n（%）]

表2 重癥患者ANCA陽性率檢測結果[n（%）]

表3 不同檢測多法的敏感度比較

3 討論

慢性支氣管炎是老年患者最為常見的一種疾病，據相關醫學統計，發病率約為15%，而且隨著我國老齡化社會的到來，慢性支氣管炎患者的數量將會進一步增長[7-9]。慢性支氣管炎的致病因素較為復雜，如吸煙、空氣污染和過敏等，均是主要的致病因素。如在吸煙方面，香煙的煙霧中包含尼古丁和焦油等多種有害物質，當人體主動或被動吸入后，會對支氣管黏膜上皮造成不同程度的損害；在空氣污染方面，其原理與香煙類似，都是由于毒害物質的吸入而損傷支氣管；在過敏方面，患者內源或外源抗體可引起變態反應，導致支氣管痙攣或產生炎癥等[10-13]。患者發病后，典型的癥狀表現如咳嗽和咳痰等，持續時間長，一般在3個月以上，且容易反復。若干預方法不當，后期還可出現支氣管擴張癥和肺氣腫等并發癥，甚至導致窒息等，從而嚴重威脅患者的健康。

在慢性支氣管炎患者的治療方面，已經形成了較為系統且完善的治療體系，主要是控制感染、鎮咳祛痰和平喘等[14]。但由于患者病程較長，越早對患者加以治療干預，患者后期的預后越好。因此慢性支氣管炎患者的早期診斷工作，成為檢驗科等科室研究的核心問題之一。

ANCA是指與中性粒細胞及單核細胞胞漿中溶酶體酶發生反應的抗體。當中性粒細胞受抗原刺激后，胞漿中的α-顆粒釋放蛋白酶-3、髓過氧化物酶物質及白細胞抗原生成，刺激機體而產生ANCA。近年來，隨著檢驗醫學的發展，經臨床醫學證實ANCA的上升，會激活人體內的NF-κB炎癥性信號通路，從而導致支氣管炎的發生及加重。如劉寧寧等[15]在臨床工作中發現，慢性支氣管炎患者ANCA檢測數值明顯高于健康人群等。

在相關研究的背景下，ANCA的相關檢驗工作，逐步成為各醫院檢驗科工作的重點。現階段主要的檢測方法包括線性免疫分析法和間接免疫熒光法等，為了進一步探討ANCA與慢性支氣管炎之間的關系，我院首先將慢性支氣管炎患者分為輕癥組和重癥組，并采取以上兩種方法獨立檢驗和聯合檢驗的方法，分別加以研究。

在研究結果方面，首先對于輕癥慢性支氣管炎患者，發現線性免疫分析法和間接免疫熒光法兩種方法檢測結果無差異，但采取聯合檢驗后，檢驗結果的敏感度優于以上兩種檢測方法，說明聯合檢驗的方法，對慢性支氣管炎患者可以起到良好的早期診斷的效果；對于重癥慢性支氣管炎患者，同樣未見線性免疫分析法和間接免疫熒光法兩種方法的區別，采取聯合檢驗后，敏感度高于線性免疫分析法，其他各項結果比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。提示聯合檢驗方法效果優于線性免疫分析法。

綜上所述，采取線性免疫分析法和間接免疫熒光法聯合檢驗的方法，對于早期慢性支氣管炎患者具有較為理想的診斷效果，建議對疑似患者盡早檢驗其ANCA水平，以盡早發現和治療。而對于重癥患者，采取間接免疫熒光法和聯合檢驗的方法，可以達到基本相同的檢驗效果，盡量不選擇線性免疫分析法進行檢驗。