60%噁唑菌酮·氰霜唑水分散粒劑高效液相色譜分析

俞建忠，邵貴芳，陳列忠，侯佳音，俞瑞鮮，胡秀卿，趙學(xué)平

(浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所 部省共建農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全危害因子與風(fēng)險防控國家重點實驗室(籌)農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥殘留檢測重點實驗室，浙江 杭州 310021)

噁唑菌酮(famoxadone)是美國杜邦公司研制的一種新型高效、廣譜性殺菌劑，主要通過阻斷泛醌醇酶，抑制病原菌的孢子釋放，起到殺菌作用，可用于防治多種作物的白粉病、晚疫病、霜霉病、銹病等，且對后茬作物安全、無藥害[1]。氰霜唑(cyazofamid)是日本石原產(chǎn)業(yè)研發(fā)的一種磺胺咪唑類殺菌劑，具有高效、低毒、環(huán)境友好等特點，主要用于防治卵菌類病害，如疫病、霜霉病等，目前已在大白菜、番茄、黃瓜、荔枝樹、馬鈴薯、葡萄、西瓜等作物上登記使用[2-3]。

目前，噁唑菌酮的檢測方法有氣相色譜法和液相色譜法[4-6]，氰霜唑的主要分析方法為液相色譜法[2，7]，二者復(fù)配制劑的分析法已有報道，采用氣相色譜法進行分析[8]，但適用性更為廣泛的液相色譜法尚未見報道。本文采用高效液相色譜法同時對噁唑菌酮和氰霜唑進行定性和定量。該方法操作快速、準(zhǔn)確、便捷，適用于該產(chǎn)品的質(zhì)量檢測。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀Agilent1100，具有二極管陣列檢測器和色譜工作站；色譜柱為ZORBAX Eclipse-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；過濾器(孔徑0.45 μm有機膜)。BSA224S電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；超聲波清洗機(昆山舒美有限公司)。噁唑菌酮標(biāo)準(zhǔn)品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%，沈陽化工院研究有限公司)；氰霜唑標(biāo)準(zhǔn)品(質(zhì)量分?jǐn)?shù)97.2%，沈陽化工院研究有限公司)；乙腈(色譜純，德國默克公司)；純凈水(杭州娃哈哈公司)；60%噁唑菌酮·氰霜唑水分散粒劑試樣(農(nóng)藥廠提供)。

1.2 液相色譜操作條件

流動相：乙腈+水(體檢比70∶30)；檢測波長：220 nm；流量為1.0 mL·min-1；柱溫30 ℃；進樣體積5 μL；保留時間：氰霜唑約8.7 min，噁唑菌酮約10.0 min。典型的噁唑菌酮和氰霜唑標(biāo)樣及試樣高效液相色譜圖見圖1～2。

圖1 噁唑菌酮和氰霜唑標(biāo)樣高效液相色譜

1.3 測定步驟

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取噁唑菌酮標(biāo)樣約0.065 g(精確至0.000 1 g)和氰霜唑標(biāo)樣約0.05 g(精確至0.000 1 g)置于100 mL容量瓶中，加入適量乙腈溶解，超聲波振蕩5 min后冷卻至室溫，再用乙腈稀釋至刻度，搖勻備用。

圖2 60%噁唑菌酮·氰霜唑水分散粒劑高效液相色譜

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取60%噁唑菌酮·氰霜唑水分散粒劑試樣約0.2 g(精確至0.000 1 g)置于100 mL容量瓶中，加入適量乙腈溶解，超聲波振蕩5 min后冷卻至室溫，再用乙腈稀釋至刻度，搖勻過濾備用。

1.3.3 測定

在上述高效液相色譜儀器條件下，儀器基線走穩(wěn)后，連續(xù)注射標(biāo)樣溶液，直至標(biāo)樣溶液的峰面積響應(yīng)值相鄰兩針相對變化小于1.2%后，按照一針標(biāo)樣溶液、兩針試樣溶液、一針標(biāo)樣溶液的進樣順序進行含量測定。

1.3.4 質(zhì)量分?jǐn)?shù)計算

試樣中按式(1)計算：

(1)

式中：ω1為試樣中噁唑菌酮或氰霜唑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)，A2為試樣溶液中噁唑菌酮或氰霜唑峰面積的平均值(將測得的兩針試樣溶液中噁唑菌酮或氰霜唑面積分別進行平均)，m1為標(biāo)樣的質(zhì)量的數(shù)值(g)，ω為標(biāo)樣中噁唑菌酮或氰霜唑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)，A1為標(biāo)樣溶液中噁唑菌酮或氰霜唑峰面積的平均值(將測得試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中噁唑菌酮或氰霜唑面積分別進行平均)，m2為試樣的質(zhì)量的數(shù)值(g)。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

通過Agilent 1100高效液相色譜儀二極管陣列檢測器的全波段掃描功能，獲得氰霜唑和噁唑菌酮的紫外吸收光譜圖(圖3～4)。

圖3 氰霜唑紫外吸收譜

圖4 噁唑菌酮紫外吸收譜

從紫外吸收譜圖中可知，氰霜唑最大吸收波長在280 nm處，噁唑菌酮最大吸收波長在230 nm處。為避免溶劑對其干擾，且兩者均有較強的紫外吸收，試驗選擇220 nm為檢測波長。根據(jù)噁唑菌酮和氰霜唑的物理化學(xué)性質(zhì)，考慮到被試物的溶解性，選用溶劑乙腈溶解樣品，選擇乙腈和水混合溶液作為流動相，將流動相按乙腈+水不同體積比進行分離試驗，最終確定流動相為Ψ(乙腈∶水)=70∶30，流速為1.0 mL·min-1。在該條件下，各組分分離良好，色譜峰峰形尖銳、對稱，分離時間較短。

2.2 方法的線性相關(guān)性試驗

準(zhǔn)確稱取噁唑菌酮標(biāo)樣0.0 961 g和氰霜唑標(biāo)樣0.0 514 g，置于同一25 mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻備用。用移液管分別移取上述標(biāo)樣溶液0.5、1.0、2.0、2.5、5.0 mL于5個10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋到刻度，搖勻，配制噁唑菌酮、氰霜唑標(biāo)準(zhǔn)溶液。待儀器穩(wěn)定后，在上述色譜條件下，按濃度從低到高的順序進樣，每個濃度進樣2次。以噁唑菌酮(氰霜唑)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到噁唑菌酮線性回歸方程y=14.992x+202.8，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 4；氰霜唑線性回歸方程y=8.8518x+33.83，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 5。試驗結(jié)果表明該方法線性關(guān)系良好。

2.3 方法的精密度試驗

在上述高效液相色譜操作條件下，準(zhǔn)確測量5個60%噁唑菌酮·氰霜唑水分散粒劑試樣的含量，計算標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)。表1顯示，噁唑菌酮標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.11，變異系數(shù)為0.32%；氰霜唑標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.22，變異系數(shù)為0.86%，表明該方法精密度較好。

表1 精密度試驗結(jié)果

2.4 方法的準(zhǔn)確度試驗

準(zhǔn)確稱取5份已知含量的60%噁唑菌酮·氰霜唑水分散粒劑試樣，在每份試樣中分別加入一定量的噁唑菌酮和氰霜唑標(biāo)樣，在相同條件下測定其含量，計算標(biāo)樣添加回收率。表2顯示，測得噁唑菌酮平均回收率為99.31%；氰霜唑平均回收率為99.81%，表明該方法準(zhǔn)確度較高。

表2 準(zhǔn)確度試驗結(jié)果

3 小結(jié)

使用高效液相色譜法同時檢測混劑中噁唑菌酮和氰霜唑的含量。該方法在測試濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，分析時間短，方法精密度和準(zhǔn)確度高，操作簡單、快速，是噁唑菌酮和氰霜唑復(fù)配制劑理想的分析測定方法。