絕經后骨質疏松癥患者外周血T淋巴細胞亞群檢測及臨床意義

吳高峰

【摘要】 目的：觀察絕經后骨質疏松癥（OP）患者外周血T淋巴細胞亞群的變化，并分析其臨床意義。方法：選取筆者所在醫院2016年3月-2019年3月60例絕經后女性為研究對象，其中30例OP患者設為OP組，另30例非OP患者設為對照組。兩組均采用流式細胞儀檢查其外周血T淋巴細胞亞群水平，并進行統計分析。結果：OP組外周血T淋巴細胞、抑制性淋巴細胞（Ts）及輔助性T細胞（Th）均低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。OP組Th/Ts比值、NK細胞（CD16+CD56+）及B淋巴細胞均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05）。結論：絕經后OP患者的外周血T淋巴細胞亞群改變可能引起T淋巴細胞、Ts、Th降低，導致其體液免疫及免疫應答改變，使絕經期女性發生免疫系統紊亂。

【關鍵詞】 絕經 骨質疏松癥 T淋巴細胞亞群

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.25.026 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2020）25-00-03

[Abstract] Objective： To observe the changes of peripheral blood T lymphocyte subsets in postmenopausal osteoporosis （OP） patients and analyze its clinical significance. Method： A total of 60 postmenopausal women in our hospital from March 2016 to March 2019 were selected as the study objects， among which 30 patients with OP were set as the OP group and the other 30 non-OP patients as the control group. The peripheral blood T lymphocyte subsets of both groups were examined by flow cytometry and analyzed statistically. Result： The levels of peripheral blood T lymphocytes， inhibitory lymphocytes （Ts） and helper T cells （Th） in the OP group were lower than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The Th/Ts ratio， NK cell （CD16+CD56+） and B lymphocytes in the OP group were higher than those in the control group， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion： The change of T lymphocyte subsets in peripheral blood of postmenopausal OP patients may cause the decrease of T lymphocytes， Ts and Th， resulting in the changes of humoral immunity and immune response， and the immune system disorder of menopausal women.

[Key words] Menopause Osteoporosis T lymphocyte subsets

First-authors address： Zhongshan Hospital， Xiamen University， Xiamen 361004， China

骨質疏松癥（OP）是一種代謝性骨病變，主要癥狀為骨組織量減少，發生于任何年齡且男女不限，多見于絕經后女性和老年男性[1]。有研究顯示，OP與女性體內分泌系統密切相關，特別表現為雌性激素下降，人體免疫細胞因子、生長因子等作為多溶性介質，也可影響骨細胞[2]。人體外周血淋巴細胞主要分為T淋巴細胞、抑制性淋巴細胞（Ts）、輔助性T細胞（Th）、細胞毒性T細胞（Tc）、效應T淋巴細胞（Te）、B淋巴細胞及NK細胞（CD16+CD56+）。有研究表明，絕經后OP患者外周血T淋巴細胞亞群的變化可影響人體免疫功能，抑制免疫應答發生[3]。本研究通過抽取筆者所在醫院30例絕經后OP患者與30例絕經后非OP患者，對比分析其外周血T淋巴細胞亞群水平，以期進一步明確OP是否能影響絕經后女性免疫系統，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取筆者所在醫院2016年3月-2019年3月60例絕經后女性為研究對象，納入標準：（1）均為絕經后婦女;（2）近2個月未接受其他藥物治療。排除標準：（1）近期無新生骨折;（2）長期服用治療骨組織藥物;（3）有自身免疫性疾病、感染性疾病及腫瘤等。其中30例OP患者設為OP組，另30例非OP患者設為對照組。根據世界衛生組織OP診斷標準，T值≥-1.0為骨組織量正常，-2.50.05），有可比性。本研究經過醫院倫理委員會批準。患者及家屬簽署同意書。

1.2 方法

采用流式細胞儀檢測兩組外周血T淋巴細胞亞群：（1）制備單細胞懸液，將1X10-7的細胞放入1.5 ml離心管中3 000 r/min離心5 min，棄上清液，然后加入FACS緩沖液100 μl懸浮細胞;（2）封閉表面Fc受體，在步驟（1）得到的液體中加入Fc受體抗體0.5 μl（0.5 mg/ml），水浴3 min;（3）細胞與熒光抗體結合，在步驟（2）得到的液體中加入熒光抗體1 μl（0.5 mg/ml），水浴30 min;（4）洗細胞去除游離的熒光抗體，在步驟（3）中加入FACS緩沖液350 μl，輕輕搖晃混勻，放置3 000 r/min的離心機離心5 min，棄上清液，重復步驟此操作2次;（5）上樣前處理，取100 μl儀器緩沖液加入細胞沉淀中，輕輕混勻懸浮細胞，將細胞懸液移入FACS專用管中，準備進行儀器檢測和分析[6]。

1.3 觀察指標

比較兩組T淋巴細胞、Ts、Th、Th/Ts、CD16+CD56+、B淋巴細胞水平。

1.4 統計學處理

本研究數據采用SPSS 19.0統計學軟件進行分析和處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組外周血T淋巴細胞、Ts、Th比較

OP組T淋巴細胞、Ts、Th均低于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 兩組外周血Th/Ts、CD16+CD56+及B淋巴細胞水平比較

OP組外周血Th/Ts、CD16+CD56+及B淋巴細胞水平均高于對照組，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

3 討論

OP是由于人體正常骨質量低下，骨結構受損引起骨脆性升高的一種全身性骨病，分為原發性和繼發性兩大類，發病機制包括內分泌系統紊亂、機體代謝紊亂及其他因素，臨床上主要癥狀有腰背疼痛、骨折、呼吸功能下降。人到中老年時期，由于免疫功能低下，可能會引起此疾病產生，部分女性絕經后雌性激素下降也可導致OP發生。有研究顯示，絕經年齡可判斷OP發病率，即年齡越晚，發病率越低，與女性絕經后體內雌性激素水平下降有關，由于雌性激素能抑制破骨細胞的活性，雌性激素水平越低，破骨細胞活性越強，骨組織吸收量遠大于骨形成量[7]。

T細胞是人體內重要的免疫細胞，也是淋巴細胞的主要組分，能直接殺死靶細胞，輔助B細胞產生抗體，其分泌的炎性因子與配體，能有效促進骨組織的形成吸收，另外，T淋巴細胞通過CD40配體及刺激分子，共同調節骨間質細胞及成骨細胞之間的代謝，維持骨形成和骨吸收的動態平衡，這些細胞按功能可分為三個亞群，包括Th、Ts和Tc，Th通過與多肽發生反應并分泌細胞因子，調節機體免疫反應，增生免疫細胞;Th會協助B細胞產生抗體，與巨噬細胞結合后會去辨認抗原，抗原刺激后釋放白介素，使得B細胞大量繁殖;Ts能抑制Th活性，從而抑制B細胞分化及Tc殺傷功能，負向調節體液免疫和細胞免疫;Tc分泌各種細胞因子參與免疫作用，能殺死某種病毒及腫瘤細胞等抗原物質，與NK細胞構成機體抗病毒、抗腫瘤免疫的重要防線。本研究中，OP組外周血T淋巴細胞、Ts及Th均低于對照組，表明OP能改變患者T淋巴細胞亞群水平，從而影響免疫系統，使得細胞免疫及體液免疫出現異常，這與劉欣榮等[8]的研究結果一致。OP組Th/Ts比值、CD16+CD56+及B淋巴細胞均高于對照組，也表明T淋巴細胞亞群的變化，導致人體免疫系統紊亂，方虹等[9]的研究結果也證實了這一點。絕經后女性免疫系統與成骨細胞和破骨細胞相互影響，T淋巴細胞亞群的改變導致免疫系統紊亂，進而引起自身免疫性疾病，出現關節、骨骼等功能受損。

T細胞能刺激或抑制成骨細胞、破骨細胞，與其亞群、細胞因子等因素有相似作用，還可產生調節因子影響骨組織與細胞之間的代謝，活化后的T細胞產生破骨細胞必要的效應因子，通過酶切效應因子分泌可溶性因子，對骨轉移及絕經后OP患者也起著非常重要的作用，人體B淋巴細胞分化過程為前B細胞、不成熟B細胞、成熟B細胞、活化B細胞和漿細胞。其中前兩期增殖分化過程在骨髓中進行，后階段的增殖分化過程主要在免疫器官中進行，人體淋巴細胞的增殖分化與其骨髓造血微環境處于同一個環境中，可共享微環境中多種細胞因子、調節分子等[10-12]。通過細胞因子調節造血細胞的增殖分化，使得免疫系統與骨骼系統保持動態平衡，當免疫系統處于異常狀態，骨骼系統任何功能變化都會導致骨細胞出現嚴重危害，從而使得免疫功能紊亂。

綜上所述，絕經后OP能使T淋巴細胞、Ts、Th指標降低，Th/Ts，CD16+CD56+及B淋巴細胞水平升高，導致患者體液免疫及免疫應答出現相應的改變，使絕經期女性發生免疫系統紊亂。

參考文獻

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（收稿日期：2020-03-27） （本文編輯：桑茹南）