田頭菇菌種分離與培養(yǎng)特性*

吳 芳，黃曉輝，喻初權(quán)，王春暉，馮立國

（湖南省食用菌研究所，湖南 長沙 410000）

田頭菇（Agrocybe praecox） 屬擔(dān)子菌綱（Basidiomycota） 傘菌目（Agaricales） 球蓋菇科（Strophariaceae） 田頭菇屬（Agrocybe），亦稱春生田頭菇[1-3]。常見于春、秋季林中、田野和草地，子實(shí)體乳白色至淡黃色，菌蓋直徑2 cm～8 cm，扁半球形，后漸平展，菌肉白色，較厚；菌褶銹褐色，直生或彎生；菌柄圓柱形，白色，后變污白色，有粉末狀鱗片；菌環(huán)白色，膜質(zhì)，易脫落，是一種味道鮮美的野生食用菌。目前國內(nèi)研究較少，尚未形成栽培產(chǎn)業(yè)。

本試驗(yàn)菌株采集于洞庭湖區(qū)漉湖蘆葦濕地，經(jīng)ITS測序結(jié)合形態(tài)學(xué)分析鑒定為田頭菇Agrocybe praecox(Pers.)Fayod。田頭菇子實(shí)體主要生長于郁閉度較低的空曠蘆葦?shù)兀瑔紊騾采谕寥拉h(huán)境呈弱酸性的腐爛蘆葦根系及附近。其味道鮮美，口感鮮嫩爽滑，深受當(dāng)?shù)鼐用裣矏邸ａ槍μ镱^菇菌種生產(chǎn)和培養(yǎng)所需條件以及營養(yǎng)成分，篩選其菌絲生長和培養(yǎng)所需合適的碳源、氮源，以及培養(yǎng)所需的溫度、pH，以期為標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)模化、產(chǎn)業(yè)化人工栽培田頭菇提供理論依據(jù)[4-6]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)菌種

采集于沅江漉湖蘆葦場，采用組織分離法獲得。

1.1.2 培養(yǎng)基

加富PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200.0 g、麥麩10.0 g、葡萄糖 20.0 g、KH2PO53.0 g、MgSO41.5 g、瓊脂20.0 g。基礎(chǔ)培養(yǎng)基：馬鈴薯200.0 g、葡萄糖20.0 g、瓊脂20.0 g。

1.1.3 儀器設(shè)備

PRX-250A恒溫箱、YX-400A高壓蒸汽滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、電子天平等。

1.2 試驗(yàn)方法

取新鮮田頭菇子實(shí)體，用75%酒精棉擦凈菇體表面雜質(zhì)，于超凈工作臺(tái)將已消毒處理的種菇用滅菌解剖刀在菌柄與菌蓋交界處，切取米粒大組織塊接種于無菌平板培養(yǎng)基表面，于24℃恒溫箱中倒置培養(yǎng)。待形成白色菌絲后，取健壯優(yōu)勢菌絲轉(zhuǎn)接至平板純化培養(yǎng)1次后，再轉(zhuǎn)管至斜面培養(yǎng)基，經(jīng)24℃培養(yǎng)8 d，菌絲長滿斜面且無雜菌，即為田頭菇母種。

1.2.2 菌種培養(yǎng)條件研究

1） 溫度試驗(yàn)

試驗(yàn)選用加富PDA培養(yǎng)基，設(shè)置5℃、10℃、15℃、18℃、21℃、24℃、27℃、30℃、35℃、40℃，共10個(gè)溫度處理，其他條件相同，每個(gè)溫度處理重復(fù)3次。用已滅菌的打孔器打取菌絲塊分別接入已滅菌平板中央，倒置培養(yǎng)8 d，以平板培養(yǎng)基上菌絲長勢、菌絲密度和生長速度為菌絲生長指標(biāo)，取其平均值，比較不同溫度對田頭菇菌絲生長的影響。

2） pH試驗(yàn)

試驗(yàn)選用加富PDA培養(yǎng)基，用0.1 mol·L-1NaOH和0.1 mol·L-1HCl將培養(yǎng)基pH分別調(diào)節(jié)到5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5和8.0這7個(gè)不同的處理，每個(gè)處理重復(fù)3次。處理與記錄參照溫度試驗(yàn)。

3） 碳源試驗(yàn)

燃料價(jià)格及電力需求不確定下電力生產(chǎn)決策的魯棒優(yōu)化··············································汪 建 王 挺 劉惠霞 (5,807)

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分別用蔗糖、麥芽糖、甘露醇代替葡萄糖，制成固體培養(yǎng)基，接種田頭菇菌種塊，在24℃條件下避光培養(yǎng)7 d，以菌絲長勢、菌絲密度和生長速度為菌絲生長指標(biāo)。每個(gè)處理3次重復(fù)，取平均值，比較不同碳源對田頭菇菌絲生長的影響[7-8]。

4） 氮源試驗(yàn)

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分別用2%蛋白胨、2%酵母膏、2%牛肉膏代替馬鈴薯，制成固體培養(yǎng)基，接種田頭菇菌種塊，在24℃條件下避光培養(yǎng)7 d，以菌絲長勢、菌絲密度和生長速度為菌絲生長指標(biāo)。每個(gè)處理3次重復(fù)，取平均值，比較不同氮源對田頭菇菌絲生長的影響[7-8]。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 19.0數(shù)據(jù)處理軟件分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，結(jié)果用平均值表示，數(shù)據(jù)采用LSD法，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度對田頭菇菌絲生長的影響

不同溫度對田頭菇菌絲生長的影響見表1。

表1 不同溫度對田頭菇菌絲的影響Tab.1 Effect of different temperatures on the mycelium of Agrocybe praecox

由表1可知，隨著溫度升高，田頭菇菌絲生長速度與溫度呈正相關(guān)，各處理之間相互存在極顯著差異。溫度越低，菌絲密度越大，隨著溫度的增加，菌絲密度降低，在21℃～30℃，菌絲長勢較好。試驗(yàn)溫度設(shè)置在5℃與40℃時(shí)，菌絲均不生長，但5℃時(shí)，菌絲依然具有生命力，恢復(fù)適宜溫度即可萌發(fā)生長，40℃超過一定時(shí)間，菌絲死亡。可見，在試驗(yàn)設(shè)置范圍內(nèi)，溫度對菌絲生長存在顯著影響，綜合生長速度、菌絲長勢與菌絲密度觀察，溫度在24℃～27℃，適宜于田頭菇菌絲培養(yǎng)。

2.2 pH對田頭菇菌絲生長的影響

不同pH對田頭菇菌絲生長的影響見表2。

表2 不同pH對田頭菇菌絲的影響Tab.2 Effect of different pH on the myceliumof Agrocybe praecox

由表2可知，田頭菇菌絲在中性和弱酸、弱堿性條件下均可生長，pH在6.0～7.0菌絲長勢較好，菌絲濃密，生長較快，其中，pH為6.5時(shí)，菌絲生長速度最快，菌絲長勢最佳，且菌絲潔白，濃密均勻，與其他處理呈極顯著差異，可見，弱酸性培養(yǎng)基最適宜培養(yǎng)田頭菇菌絲。

2.3 碳源對田頭菇菌絲生長的影響

不同碳源對田頭菇菌絲生長的影響見表3。

表3 不同碳源對田頭菇菌絲的影響Tab.3 Effect of different carbon sources on the mycelium of Agrocybe praecox

由表3可知，田頭菇菌絲以葡萄糖和麥芽糖為碳源時(shí)，生長速度和長勢最佳，菌絲較密，與蔗糖存在顯著差異，與甘露醇存在極顯著差異。可見，葡萄糖和麥芽糖均為田頭菇菌絲生長的合適碳源，但使用葡萄糖時(shí)生長速度略高。

2.4 氮源對田頭菇菌絲生長的影響

不同氮源對田頭菇菌絲生長的影響結(jié)果見表4。

表4 不同氮源對田頭菇菌絲的影響Tab.4 Effect of different nitrogen sources on the mycelium of Agrocybe praecox

由表4可知，以蛋白胨為氮源時(shí)，田頭菇菌絲生長速度和長勢最佳，其次為酵母膏和馬鈴薯，以牛肉膏為氮源時(shí)，菌絲速度偏慢，長勢較差，菌絲密度與生長勢變化基本一致。

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，田頭菇菌絲生長合適碳源為葡萄糖和麥芽糖，合適氮源為蛋白胨、馬鈴薯和酵母膏，菌絲培養(yǎng)適宜溫度為24℃～27℃，適宜pH為6.0～6.5。結(jié)合生境調(diào)查，田頭菇為一種中溫型蘑菇，適合弱酸性條件培養(yǎng)，是一種適用于規(guī)模化、標(biāo)準(zhǔn)化、產(chǎn)業(yè)化的具備開發(fā)潛力的食用菌新品種。通過試驗(yàn)探索田頭菇生物學(xué)特性，以期為后續(xù)培養(yǎng)配方篩選、液體發(fā)酵工藝和栽培生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化以及產(chǎn)業(yè)化開發(fā)提供理論基礎(chǔ)，有望實(shí)現(xiàn)后續(xù)的產(chǎn)業(yè)化栽培。

目前，我國作為食用菌生產(chǎn)大國，食用菌產(chǎn)量與栽培品種均居世界前列，但新優(yōu)品種的馴化與選育，工廠化與標(biāo)準(zhǔn)化栽培仍處于較落后的水平。田頭菇味道鮮美，口感嫩滑，商品性能佳，是一種適宜標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)和開發(fā)的食用菌新優(yōu)品種。因此，研究田頭菇菌絲培養(yǎng)基礎(chǔ)特性，選育優(yōu)良菌株進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化開發(fā)，具有重要經(jīng)濟(jì)意義[9]。