液質聯用法測定雞肉中9種激素類藥物的基質效應研究

代春梅，李卿沛 ，焦紹明，徐尚喜

（金昌市農產品質量安全檢測中心，甘肅 金昌 737100）

基質效應是指在樣品測試過程中，待測物以外的其他物質對待測物響應值的影響，基質效應直接影響分析方法的準確度[1-2]。液質聯用分析中用以評價基質效應的方法一般有柱后注入法和提取后添加法兩種，而提取后添加法可以實現基質效應的量化評價，廣泛應用于方法驗證過程[3-4]。本文研究了液質聯用法測定雞肉中9種激素類藥物的基質效應，為分析方法檢測結果的準確性提供依據。

1 材料與方法

1.1 儀器

Agilent1290-G6460C三重四級桿液質聯用儀（Agilent公司）；23R高速冷凍離心機（力康公司）；IKA RV10旋轉蒸發儀（艾卡公司）；IKA VXR渦旋振蕩器（艾卡公司）；Smart-N30VF超純水機（力康公司）；Agilent Bond Elut C18固相萃取柱（500 mg/3ml，Agilent公司）。

1.2 試劑

9種激素類藥物標準品：地塞米松（100μg/ml），中國農業農村部環境保護科研監測所；乙酸甲地孕酮（1000μg/ml），天津阿爾塔科技有限公司；甲基睪酮（50mg）、乙酸氯地孕酮（50mg）、可的松（250mg）、甲基潑尼松龍（250mg）、諾龍（100mg）、訣諾酮（100mg）、孕酮（50mg），Stanford Chemicals。甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純），美國Fisher公司。市售雞肉樣品。

1.3 方法

1.3.1 樣品前處理 準確稱取雞肉樣品2 g于50 ml離心管中，加入10 ml乙腈，渦旋振蕩5 min，超聲提取10 min，10 000 r/min離心10 min，取上清液至雞心瓶，重復提取一次，合并上清液于雞心瓶中，40℃負壓旋蒸至干，加入5ml 30%甲醇水溶液溶解殘余物，待凈化。

C18固相萃取柱預依次用3ml甲醇、3ml水活化，上述待凈化溶液全部過柱，用2ml 30%甲醇水溶液淋洗小柱，抽干后使用3ml 90%甲醇水溶液洗脫，收集洗脫液于40℃下氮氣吹干，加入1ml 50%甲醇水溶液溶解，過0.22μm微孔尼龍濾膜后待檢測。

1.3.2 標準溶液的制備 取9種激素類藥物標準品用甲醇配制成10 mg/L的混合標準貯備液，于-18℃冰箱中保存。取1 ml標準儲備液用甲醇定容至10 ml，配制成濃度為1 mg/L的標準中間液，再取2ml標準中間液用甲醇定容至10ml，配制成200 μg/L的標準工作液，然后用甲醇逐級稀釋，得到100 μg/L、50 μg/L、20 μg/L、10 μg/L、5 μg/L的標準系列溶液。

1.3.3 基質匹配標準溶液的制備 取空白雞肉樣品作基質，按照前處理步驟制備基質溶液。取9種激素類藥物1mg/L的標準中間液，用空白基質溶液配置成200μg/L的基質標準工作液，然后用空白基質溶液逐級稀釋，得到100 μg/L、50 μg/L、20 μg/L、10 μg/L、5 μg/L的基質匹配標準系列溶液。基質匹配標準溶液現用現配。

1.4 測定

1.4.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SBC18色譜柱（2.1mm×100mm，1.8μm）；柱溫：35℃；進樣量：2μL；流動相：A為0.1%甲酸水溶液，B為0.1%甲酸乙腈溶液；流速：0.25 ml/min；梯度洗脫：0 min 10%B，2 min 40%B，4 min 60%B，6 min 85%B，7 min100%B，9 min 10%B。

1.4.2 質譜條件 采用正離子模式多反應監測，9種激素類藥物保留時間、定性離子、定量離子、傳輸電壓、碰撞電壓等質譜條件參數見表1。

2 結果

2.1 絕對基質效應

一般認為基質標準品峰面積和溶劑標準品峰面積的比為絕對基質效應因子（MEF），MEF小于1表示基質抑制效應，MEF等于1表示無基質效應，MEF大于1表示機制增強效應[2,5-6]。

將配制好的200 μg/L、100 μg/L、50μg/L、20 μg/L、10 μg/L、5 μg/L的標準溶液和基質匹配標準溶液分別上機測定其峰面積，每個濃度重復測6次。雞肉中9種激素類藥物的絕對基質效應因子見表2。可以看出9種化合物在雞肉基質中的基質效應表現各不相同，甲基潑尼松龍、地塞米松整體表現為基質增強效應，乙酸氯地孕酮、乙酸甲地孕酮整體表現為基質抑制效應，其他化合物基質效應因子在0.85～1.15之間，基質效應表現不明顯[3]。

表1 9種激素類藥物質譜條件參數

表2 雞肉中9種激素類藥物的絕對基質效應因子

表3 雞肉中9種激素類藥物不同添加量測定結果

2.2 不同校準方法測定結果

在空白雞肉樣品中添加50 μg/kg、20 μg/kg、10 μg/kg混合標準溶液，經前處理后重復測試6次，用標準曲線和基質匹配標準曲線分別進行定量校準，測定結果見表3。用標準曲線校準的回收率為27.57%～133.53%，其中乙酸氯地孕酮回收率僅為30%左右。用基質匹配標準曲線校準的回收率為73.98%～116.42%，其中乙酸氯地孕酮回收率提高到70%以上。

3 結論

使用液質聯用法測定雞肉中9種激素類藥物，甲基潑尼松龍、地塞米松在雞肉基質中表現為基質增強效應，乙酸氯地孕酮、乙酸甲地孕酮表現為基質抑制效應，對其他化合物基質效應表現不明顯。因此在使用此分析方法時，需采用基質匹配標準溶液的方法降低基質效應的影響，以保證檢測結果的準確性。

[1]劉莉,袁名安,盛仙俏,等.基質效應對黃瓜中4種有機磷農藥殘留檢測的影響[J].浙江農業學報，2014,26(6):1564-1567.

[2] 左英芳.液質聯用儀的基質效應研究[J].新農民，2019,(5):20-21.

[3]王立琦,賀利民,曾振靈,等.液相色譜-串聯質譜檢測獸藥殘留中的基質效應研究進展[J].質譜學報,2011,32(6):321-332.

[4] 周劍,王敏,楊夢瑞.液相色譜質譜分析中的基質效應研究[J].農產品質量與安全,2018,(1)：67-70.

[5]李淑娟,于杰,高玉生,等.HPLC-MSMS測定果蔬中有機磷類農藥的基質效應[J].食品工業科技,2017,38(6):49-53.

[6] 顧亞萍,喬方,林惠純,等.4種蔬菜中20種農藥殘留的基質效應的研究[J].標準與檢測,2017,38(22):148-152.