西藏班戈縣牦牛、羊布病抗體血清學檢測

扎西次仁，蘇中華，格桑卓瑪，扎西旺杰，羅潤波，索朗斯珠*

（1.西藏那曲市班戈縣農牧科學技術服務站，西藏 班戈 852501；2.西藏自治區動物疫病預防控制中心西藏自治區畜牧總站，西藏 拉薩 850000；3.西藏農牧學院，西藏 林芝 860000）

布病又稱為布氏桿菌病或布魯菌病，是由布魯菌引起的人獸共患傳染病。公畜患病后可引起睪丸炎、附睪炎等，母畜患病后多發生流產、早產、不孕。布魯菌是布魯菌屬成員，有9個生物種、21個生物型，為需氧菌[1]。患病動物可長期帶菌。該病歷史悠久，世界性分布，給畜牧業和人類健康帶來嚴重危害[2-3]。我國分布也較為廣泛[4-8]。

西藏班戈縣為純牧業縣，畜牧業的發展與百姓的生活息息相關，為保障畜牧業的健康發展和牧民健康，2019年筆者對班戈縣10個鄉鎮的牦牛和羊進行了布病抗體的血清學檢測。

1 材料和方法

1.1 血清

2019年4月至6月從西藏班戈縣10個鄉鎮共采集牦牛血清460頭份，羊血清454頭份。

1.2 儀器

離心機（金壇市盛藍儀器制造有限公司，型號：TGL-12B）、移液器（eppendorf，100μL、10μL、300μL排槍）、純水儀（杭州東邦科技有限公司，型號：DB-S）、恒溫培養箱（上海博迅實業有限公司醫療設備廠，型號：BSC-250）、酶標儀（雷杜公司，型號：RT-2100C）。

1.3 材料

虎紅平板凝集試驗抗原（中國獸醫藥品監察所，批號：20180920），布氏桿菌病陰性血清（中國獸醫藥品監察所，批號：201801），布氏桿菌病陽性血清（中國獸醫藥品監察所，批號：201802），牛布病抗體酶聯免疫分析試劑盒（上海瀘鼎生物科技有限公司，產品批號：19-0827-D15），羊布病抗體酶聯免疫分析試劑盒（上海瀘鼎生物科技有限公司，產品批號：19-0827-D15）。

1.4 試驗方法

1.4.1 虎紅平板凝集試驗 虎紅平板凝集試驗參考中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業標準《布氏桿菌檢疫技術規范》（SNT1088-2010）。嚴格按照標準要求進行操作。

結果判定：當陰性血清對照不出現凝集（-），陽性血清對照出現凝集（+）時，則試驗成立，可以進行結果判定，否則試驗應重做。在4 min內出現肉眼可見凝集現象(出現凝塊或顆粒物)者判為陽性（+），不出現凝集者判為陰性（-）。出現陽性反應的樣品，用ELISA試劑盒進行復檢。

1.4.2 酶聯免疫吸附試驗 酶聯免疫吸附試驗嚴格按照說明書進行操作檢測，牛、羊布病抗體酶聯免疫分析試劑盒操作方法和判定標準相同。

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00；陰性對照平均值≤0.20。

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15。

陰性判定：樣品OD值＜臨界值（CUT OFF）者為布病抗體(Brucellosis Ab)陰性。

陽性判定：樣品OD值≥臨界值（CUT OFF）者為布病抗體(Brucellosis Ab)陽性。

2 結果

虎紅平板凝集試驗結果顯示，陰、陽性對照孔成立，試驗有效。牦牛血清虎紅平板凝集試驗結果顯示，檢測總血清數460頭份，陽性血清數7頭份，總體陽性率1.52%。羊血清虎紅平板凝集試驗結果顯示，檢測總血清數454頭份，陽性血清數13頭份，總體陽性率2.86%。具體試驗結果見表1、表2。

針對牦牛、羊血清抗體虎紅平板凝集試驗陽性樣品分別進行ELISA抗體檢測，結果顯示，陰陽性對照孔均成立，試驗有效；復檢血清樣品中均未檢測出布病抗體，陽性率均為0。具體試驗結果見表3、表4。

3 討論

虎紅平板凝集試驗和ELISA檢測結果顯示，班戈縣牦牛、羊血清中未檢測到布氏桿菌抗體。結合流行病學調查資料，初步判定班戈縣牦牛和羊群中無布氏桿菌病的流行。

表1 班戈縣牦牛血清布病抗體虎紅平板凝集試驗檢測結果

表2 班戈縣羊血清布病抗體虎紅平板凝集試驗檢測結果

表3 班戈縣牦牛血清布病抗體ELISA復檢結果

表4 班戈縣羊血清布病抗體ELISA復檢結果

張可榮[9]等人應用虎紅平板凝集試驗對2011年采自西藏的557頭份牦牛血清進行了檢測，結果顯示陽性率為5.9%。王一飛[10]等人應用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法對2016年在西藏采集的572頭份牦牛血清進行抗體檢測，結果顯示總體陽性率17.66%。而本次班戈縣檢測結果顯示抗體檢出率為0，這有可能是本次檢測量不夠大，可以加大樣品檢測量以確診是否有布病的流行。也可能是因為班戈縣基本無牛、羊引入，當地無布病的流行。

本次實驗引用虎紅平板凝集和ELISA兩種方法對牦牛和羊血清進行了布病抗體的檢測，虎紅平板檢測結果陽性樣品用ELISA法進行復檢，復檢結果顯示無陽性樣品。這表明虎紅平板凝集試驗存在一定的假陽性情況，該辦法適合用于大批量樣品的初步篩查檢測。而ELISA檢測結果更加可信，適合用于布病的確診試驗，或者用于虎紅平板凝集試驗陽性樣品復檢使用[11]。

本次實驗結果顯示班戈縣常見家畜，牦牛和羊中無布病的流行，但是班戈縣地處交通要道，是牛、羊跨地區運輸的必經之地，存在感染的風險，因此還需要定期對家畜進行布病的篩查工作。特別是有引進牛、羊的養殖場或者合作社一定要做好監測工作，切不可大意，布病監測結果為陰性的畜群方可合群飼養。