多指標(biāo)權(quán)重分析與正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選黃芪女貞方菌質(zhì)醇沉工藝

王紅麗，劉效栓，李季文，戚鵬飛，馬琴國(guó)，張中華，郭敏，肖正國(guó)，羅燕燕

多指標(biāo)權(quán)重分析與正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選黃芪女貞方菌質(zhì)醇沉工藝

王紅麗1，劉效栓1，李季文1，戚鵬飛2，馬琴國(guó)1，張中華1，郭敏1，3，肖正國(guó)1，羅燕燕1

1.甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050；2.蘭州市食品藥品檢驗(yàn)所，甘肅 蘭州 730050；3.甘肅省中醫(yī)藥研究院，甘肅 蘭州 730050

采用多指標(biāo)正交試驗(yàn)優(yōu)選黃芪女貞方菌質(zhì)的最佳醇沉工藝。以黃芪甲苷、特女貞苷轉(zhuǎn)移率及干膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇藥液濃縮比（A）、乙醇濃度（B）、含醇量（C）、醇沉?xí)r間（D）為考察因素，進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，結(jié)合層次分析法及多指標(biāo)試驗(yàn)全概率評(píng)分法優(yōu)選最佳醇沉工藝。建立了黃芪女貞方菌質(zhì)中黃芪甲苷、特女貞苷含量的HPLC測(cè)定方法。以黃芪甲苷轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，影響因素為C3＞B3＞A2＞D2；以特女貞苷轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，影響因素為A3＞D2＞C2＞B3；以干膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，影響因素為A3＞C1＞B3＞D2。加權(quán)評(píng)分優(yōu)化后確定的最佳醇沉工藝為：菌質(zhì)∶提取液＝1∶1.5，采用85%乙醇，含醇量75%，醇沉18 h。黃芪女貞方菌質(zhì)中黃芪甲苷和特女貞苷在優(yōu)選的醇沉工藝條件下轉(zhuǎn)移率較高，達(dá)到較好的純化效果，工藝穩(wěn)定可行，可為進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

黃芪女貞方菌質(zhì)；多指標(biāo)綜合評(píng)分法；層次分析法；醇沉工藝；含量測(cè)定

近年來(lái)，發(fā)酵技術(shù)與中藥研究聯(lián)合，形成了真菌發(fā)酵工藝應(yīng)用技術(shù)。利用中草藥發(fā)酵的研究從單味藥發(fā)展到復(fù)方[1]，微生物發(fā)酵技術(shù)已成為中藥現(xiàn)代化研究的重要內(nèi)容之一。豆豉、神曲、紅曲、半夏曲等就是采用發(fā)酵法制成的一類獨(dú)具特色的中藥[2]。研究表明，通過(guò)微生物代謝能夠增強(qiáng)中草藥的療效、產(chǎn)生新的活性成分、降低毒副作用、提高生物利用度[3]。黃芪女貞方可補(bǔ)氣養(yǎng)陰、調(diào)節(jié)免疫，用于久病虛損、氣陰不足，在臨床惡性腫瘤治療中配合手術(shù)、放療、化療，促進(jìn)機(jī)體功能恢復(fù)[4-5]。黃芪女貞方菌質(zhì)由益氣滋陰補(bǔ)腎藥黃芪和女貞子飲片按一定比例經(jīng)內(nèi)生菌發(fā)酵制成[6]。本課題前期研究發(fā)現(xiàn)，真菌菌種發(fā)酵有利于富集黃芪女貞方有效成分，發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的活性酶能將黃芪、女貞子中的纖維素類、淀粉類、蛋白質(zhì)類成分進(jìn)行分解，使有效組分更好地溶出。

本試驗(yàn)采用水提醇沉工藝，以黃芪甲苷、特女貞苷轉(zhuǎn)移率及干膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇藥液濃縮比、乙醇濃度、含醇量、醇沉?xí)r間為考察因素，以L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)合層次分析法（AHP）及多指標(biāo)試驗(yàn)全概率評(píng)分法優(yōu)選最佳醇沉工藝，進(jìn)一步去除雜質(zhì)，降低干膏得率以減少服用量，為處方制劑工藝奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1260型高效液相色譜儀（四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，奧泰2000ES蒸發(fā)光檢測(cè)器），美國(guó)安捷倫公司；高效液相色譜儀（Waters1525泵，Waters717進(jìn)樣器，Waters2487雙通道紫外檢測(cè)器），Waters公司；JY10001電子天平，上海之信儀器有限公司；AR124CN電子天平，上海奧豪斯儀器有限公司；SB-3200D超聲波清洗器，寧波新芝生物科技股份有限公司；HWS-24電熱恒溫水浴鍋，上海齊欣科學(xué)儀器有限公司；TGL-16高速離心機(jī)，長(zhǎng)沙平凡儀器儀表有限公司。

黃芪女貞方菌質(zhì)，甘肅省中醫(yī)院科研制劑中心研發(fā)部自制。制備方法：稱取黃芪、女貞子飲片（2∶1）適量，破碎至粒徑為10目，加入適量蒸餾水至初始含水量為110%，混合均勻，置于400 mL發(fā)酵瓶?jī)?nèi)，蓋上棉塞，用包裝紙包好，121 ℃滅菌30 min，作為發(fā)酵培養(yǎng)基。在無(wú)菌室內(nèi)，取真菌菌種適量（接種量10%），平鋪接種到固體培養(yǎng)基中，26 ℃培養(yǎng)15 d，至發(fā)酵瓶底布滿菌絲，即得。批號(hào)分別為190514、190515、190516。對(duì)照品黃芪甲苷（批號(hào)B20564，純度≥98%）、特女貞苷（批號(hào)B21240，純度≥98%），上海源葉生物科技有限公司。無(wú)水乙醇、乙腈、甲醇為色譜純，正丁醇、氨水、95%乙醇為分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃芪女貞方菌質(zhì)水提液制備

結(jié)合前期水提取工藝優(yōu)化結(jié)果，將經(jīng)內(nèi)生真菌發(fā)酵的黃芪女貞方加8倍量水提取3次，每次1.5 h，過(guò)濾，濾液合并后濃縮至菌質(zhì)∶提取液＝1∶1（25 ℃），冷藏備用。

2.2 干膏得率測(cè)定

將正交試驗(yàn)所得醇沉液離心，回收乙醇后定容至50 mL，精密吸取5 mL至干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)?05 ℃干燥3 h，取出，迅速置干燥器中，冷卻至室溫，稱重，測(cè)定干膏得率。

2.3 黃芪甲苷含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件

色譜柱為CAPCELL PAK C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-水（32∶68），流速1 mL/min，溫度為室溫，進(jìn)樣量20 μL。ELSD檢測(cè)條件：檢測(cè)器漂移管溫度105 ℃，載氣（空氣）流速2.7 L/min。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.3.2 對(duì)照品溶液制備

取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為0.22 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3.3 供試品溶液制備

精密量取正交試驗(yàn)項(xiàng)下定容的樣液各25 mL，置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖萃取4次，每次40 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌2次，每次40 mL，棄去洗滌液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次20 mL，棄去水洗液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 方法學(xué)考察

黃芪甲苷在0.55～4.4 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為＝0.568－2.979 9（＝0.999 8）。精密度試驗(yàn)RSD＝1.21%（＝6），表明本方法精密度良好。取同一批樣品6份，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備，測(cè)定黃芪甲苷含量，RSD＝1.75%，表明本方法重復(fù)性良好。供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD＝2.19%（＝6）。黃芪甲苷平均回收率為97.99%，RSD＝2.67%（＝6）。

注：A.對(duì)照品；B.供試品；1.黃芪甲苷

2.3.5 樣品含量測(cè)定

取“2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，代入回歸方程，計(jì)算黃芪甲苷含量。1～9號(hào)樣液黃芪甲苷含量分別為0.11、0.11、0.14、0.13、0.13、0.13、0.14、0.11、0.13 mg/g。

2.4 特女貞苷含量測(cè)定

2.4.1 色譜條件

色譜柱為Symmetry C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為甲醇-水（40∶60），流速1.0 mL/min，柱溫為室溫，檢測(cè)波長(zhǎng)224 nm。色譜圖見(jiàn)圖2。

2.4.2 對(duì)照品溶液制備

取特女貞苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為0.25 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.4.3 供試品溶液制備

精密量取正交試驗(yàn)項(xiàng)下定容的樣液各1 mL，水浴烘干，加稀乙醇，50 ℃超聲提取（功率250 Ｗ，頻率40 kHz）30 min，定容至10 mL容量瓶中，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

注：A.對(duì)照品；B.供試品；1.特女貞苷

2.4.4 方法學(xué)考察

特女貞苷在0.625～5 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為＝1 847 733.26－44 513（＝0.999 8）。精密度試驗(yàn)RSD＝0.79%（＝6），表明本方法精密度良好。取同一批樣品6份，按“2.4.3”項(xiàng)下方法制備，測(cè)定特女貞苷含量，RSD＝0.55%（＝6），表明本方法重復(fù)性良好。供試品溶液在36 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD＝1.02%。特女貞苷的平均回收率為101.02%，RSD＝2.35%（＝6）。

2.4.5 樣品含量測(cè)定

取“2.4.3”項(xiàng)下供試品溶液，按“2.4.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，代入回歸方程，計(jì)算特女貞苷含量。1～9號(hào)樣液特女貞苷含量分別為0.75、0.78、0.75、0.84、0.87、0.85、0.89、0.80、0.90 mg/g。

2.5 正交試驗(yàn)優(yōu)選醇沉工藝條件

2.5.1 層次分析法確定權(quán)重

將黃芪甲苷轉(zhuǎn)移率、特女貞苷轉(zhuǎn)移率、干膏得率作為權(quán)重指標(biāo)，分為3個(gè)層次予以量化[7]。根據(jù)黃芪女貞方菌質(zhì)藥味處方用量及各因素影響的顯著性，確定指標(biāo)的優(yōu)先順序?yàn)辄S芪甲苷轉(zhuǎn)移率＞干膏得率＞特女貞苷轉(zhuǎn)移率，以此構(gòu)成成對(duì)比較的判斷優(yōu)先矩陣（見(jiàn)表1），得到各項(xiàng)指標(biāo)的相對(duì)評(píng)分。根據(jù)評(píng)分結(jié)果，AHP計(jì)算得到干膏得率、黃芪甲苷轉(zhuǎn)移率、特女貞苷轉(zhuǎn)移率權(quán)重系數(shù)分別為0.155 4、0.776 8、0.067 9，一致性比例因子CR＝0.010 4。CR＜0.10即指標(biāo)優(yōu)先比較判斷矩陣具有滿意的一致性，權(quán)重系數(shù)有效[8]。

表1 指標(biāo)成對(duì)比較的判斷優(yōu)先矩陣

權(quán)重指標(biāo)干膏得率黃芪甲苷轉(zhuǎn)移率特女貞苷轉(zhuǎn)移率 干膏得率11/5 2 黃芪甲苷轉(zhuǎn)移率5110 特女貞苷轉(zhuǎn)移率1/21/10 1

2.5.2 數(shù)據(jù)處理

采用多指標(biāo)試驗(yàn)全概率法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以消除單位量綱[9-10]。設(shè)Bi為第i號(hào)試驗(yàn)，Aj為第j個(gè)指標(biāo)，且A1，A2，A3，…，An互不相容，設(shè)各指標(biāo)的重要程度之比為A1∶A2∶A3，…，Ak＝M1∶M2，…，Mk，則：

P（Aj）＝Mj/N j＝1，2，3，…，k （1）

以Xij表示第j個(gè)指標(biāo)的第i個(gè)測(cè)定值，以Sj表示第j個(gè)指標(biāo)各次（n次）試驗(yàn)結(jié)果的和，即：

則：

P（B1/A1）＝Xi/Sj （3）

P（Bi）k＝∑P（Aj）P（Bi/Ai） i＝1，2，3，…，n （4）

公式（4）即為同時(shí)兼顧各指標(biāo)綜合效應(yīng)的全概率公式。以干膏得率、黃芪甲苷轉(zhuǎn)移率、特女貞苷轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，結(jié)合AHP確定的權(quán)重系數(shù)，得到綜合評(píng)分Y的計(jì)算公式Y(jié)＝P（Bi/A1）×0.155 4×100＋P（Bi/A2）×0.776 8×100＋P（Bi/A3）×0.067 9×100，式中i＝1，2，3，…，n。

2.5.3 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

經(jīng)預(yù)試驗(yàn)，影響醇沉工藝的因素主要有藥液濃縮比（菌質(zhì)∶提取液）、乙醇濃度（乙醇體積分?jǐn)?shù)）、含醇量、醇沉?xí)r間，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，每因素設(shè)3個(gè)水平，考察對(duì)醇沉工藝的影響，按L9（34）正交表安排試驗(yàn)，因素水平見(jiàn)表2。

表2 黃芪女貞方菌質(zhì)醇沉工藝正交試驗(yàn)因素水平表

水平藥液濃縮比乙醇濃度/%含醇量/%醇沉?xí)r間/h ABCD 11∶1955512 21∶1.5906518 31∶2857524

2.5.4 正交試驗(yàn)方法與結(jié)果

取“2.1”項(xiàng)下貯備液（菌質(zhì)∶提取液＝1∶1）9份，各40 mL，其中3份加水調(diào)節(jié)至藥液濃縮比為1∶1.5，另取3份加水調(diào)節(jié)至藥液濃縮比為1∶2，進(jìn)行醇沉，加醇量＝醇沉液中乙醇濃度×濃縮液體積÷（添加的乙醇濃度－醇沉液中乙醇濃度）。離心后回收乙醇，定容至50 mL，按“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定干膏得率（Y1），按“2.3.3”“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并測(cè)定黃芪甲苷轉(zhuǎn)移率（Y2）、特女貞苷轉(zhuǎn)移率（Y3），計(jì)算綜合評(píng)分（Y），對(duì)所得結(jié)果進(jìn)行直觀分析和方差分析，見(jiàn)表3、表4。

由直觀分析可知，以干膏得率為指標(biāo)，各因素的作用為A＞C＞B＞D，工藝組合為A3B3C1D2；以黃芪甲苷轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，各因素的作用為C＞B＞A＞D，工藝組合為A2B3C3D2；以特女貞苷轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，各因素的作用為A＞D＞C＞B，工藝組合為A3B3C2D2。分別以極值最小的因素為誤差項(xiàng)進(jìn)行方差分析，結(jié)果顯示：對(duì)于干膏得率，A、C因素有顯著影響；對(duì)于黃芪甲苷轉(zhuǎn)移率，A、B、C因素均有顯著影響；對(duì)于特女貞苷轉(zhuǎn)移率，A因素有顯著影響。對(duì)于綜合評(píng)分，各因素的作用為C＞A＞B＞D，最佳工藝組合為A2B3C3D2，以極值最小的D因素為誤差項(xiàng)，A、B、C三因素對(duì)醇沉工藝均有顯著影響，故確定優(yōu)化后的工藝為A2B3C3D2，即藥液濃縮比（菌質(zhì)∶提取液）為1∶1.5，乙醇濃度85%，含醇量75%，醇沉?xí)r間18 h。

表3 黃芪女貞方菌質(zhì)醇沉工藝正交試驗(yàn)結(jié)果直觀分析

序號(hào)ABCDY1/%Y2/%Y3/%Y 1111112.3055.5353.35 9.85 2122212.3357.0755.8310.10 3133312.0768.4653.8011.59 4212313.3267.3259.6911.67 5223113.0067.1861.9111.64 6231215.0963.7760.8311.43 7313213.1970.5763.6212.15 8321314.5054.0457.37 9.98 9332114.6865.1064.0911.60 Y1K112.2312.9413.9613.33 K213.8013.2813.4513.54 K314.1213.9512.7513.30 R 1.89 1.01 1.21 0.24 Y2K160.3564.4757.7862.61 K266.0959.4363.1663.80 K363.2465.7868.7463.27 R 2.85 6.3510.95 1.20 Y3K154.3358.8957.1859.78 K260.8158.3759.8760.10 K361.6959.5859.7856.95 R 7.37 1.21 2.69 3.15 YK110.5111.2210.4211.03 K211.5810.5711.1211.22 K311.2411.5411.7911.08 R 1.07 0.97 1.37 0.19

表4 黃芪女貞方菌質(zhì)醇沉工藝正交試驗(yàn)結(jié)果方差分析

項(xiàng)目方差來(lái)源 SSfMSF值P值 干膏得率A 6.1392 3.07059.838＜0.05 B 1.5852 0.79215.444＞0.05 C 2.2112 1.10521.546＜0.05 D（誤差） 0.1032 0.510 黃芪甲苷 轉(zhuǎn)移率A 49.413224.70622.936＜0.05 B 67.453233.72631.310＜0.05 C179.937289.96883.522＜0.05 D（誤差） 2.1542 1.077 特女貞苷 轉(zhuǎn)移率A 97.082248.54144.401＜0.05 B（誤差） 2.1862 1.093 C 13.9522 6.976 6.381＞0.05 D 17.9652 8.982 8.216＞0.05 綜合評(píng)分A 1.7842 0.89228.458＜0.05 B 1.4572 0.72923.245＜0.05 C 2.8302 1.41545.138＜0.05 D（誤差） 0.063210.500

注：0.05（2，2）＝19.00，0.01（2，2）＝99.00

2.5.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

取“2.1”項(xiàng)下貯備液（菌質(zhì)∶提取液＝1∶1）3份，各40 mL，按優(yōu)選的最佳工藝進(jìn)行3次試驗(yàn)，離心，回收乙醇后定容至50 mL，按“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)定干膏得率，按“2.3.3”“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并測(cè)定黃芪甲苷、特女貞苷含量，計(jì)算轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 黃芪女貞方菌質(zhì)醇沉工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（%）

試驗(yàn)號(hào)干膏得率黃芪甲苷轉(zhuǎn)移率特女貞苷轉(zhuǎn)移率 115.48±0.0268.2363.15 215.33±0.0368.1763.08 315.37±0.0267.9263.22

3 討論

多指標(biāo)綜合加權(quán)評(píng)分法是目前研究中藥復(fù)方的常用方法，而權(quán)重系數(shù)的賦予是綜合評(píng)分是否科學(xué)、合理的直接體現(xiàn)[11]。AHP是一種多維準(zhǔn)則決策的數(shù)學(xué)方法，能將人的主觀判斷有條理、有層次地予以量化，對(duì)權(quán)重進(jìn)行一致性檢驗(yàn)以判斷矩陣的可接受性，實(shí)現(xiàn)定性到定量的轉(zhuǎn)化[12]。

黃芪女貞方經(jīng)真菌發(fā)酵后溶出率增加，成分復(fù)雜，以單一指標(biāo)評(píng)價(jià)其質(zhì)量不具有代表性，故本試驗(yàn)在醇沉除雜時(shí)，以藥效成分黃芪甲苷、特女貞苷轉(zhuǎn)移率及干膏得率為綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用AHP結(jié)合多指標(biāo)試驗(yàn)全概率評(píng)分法全面分析，優(yōu)化得到最佳醇沉工藝，避免以單一指標(biāo)評(píng)價(jià)造成的局限性和不準(zhǔn)確性。

另外，本試驗(yàn)中黃芪女貞方菌質(zhì)醇沉前平均干膏得率為26.16%，而醇沉后約為15.39%，在有效成分得到最大保留的同時(shí)降低了干膏得率以增加制劑的穩(wěn)定性和澄清度[13]，減少服藥劑量，為后期制備工藝奠定了基礎(chǔ)。

有文獻(xiàn)報(bào)道，藥液的相對(duì)密度在實(shí)際操作中難以控制，故選用藥液濃縮比為考察因素，方便實(shí)用[14-15]。本研究在濃縮過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)藥液濃縮比＞1∶1時(shí)流動(dòng)性變差，冷卻后呈半固體狀，且醇沉?xí)r易成塊，造成有效成分損失；藥液濃縮比＜1∶2時(shí)，易造成乙醇浪費(fèi)，且醇沉?xí)r不易聚結(jié)而難以下沉。因此，選擇藥液濃縮比為1∶1～1∶2范圍內(nèi)的3個(gè)水平進(jìn)行考察。

2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》特女貞苷含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備所用溶媒為稀乙醇[16]。從方差分析結(jié)果看，含醇量對(duì)特女貞苷轉(zhuǎn)移率無(wú)顯著影響，考慮與特女貞苷的溶解性有關(guān)。

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Optimization on Alcohol Precipitation Technology of Mycoplasm fromPrescription Based on Orthogonal Design and Multi-index Weight Analysis

WANG Hongli1, LIU Xiaoshuan1, LI Jiwen1, QI Pengfei2, MA Qinguo1, ZHANG Zhonghua1, GUO Min1,3, XIAO Zhengguo1, LUO Yanyan1

To optimize the alcohol precipitation technology of mycoplasm fromPrescription through multi-index orthogonal experiment.The transfer rates of astragalosides and specnuezhenide and the yield of dry paste were set as evaluation indexes; The ratio of concentration of liquid medicine (A), ethanol concentration (B), alcohol content (C) and alcohol precipitation time (D) were selected as the study factors; the L9(34) orthogonal test was carried out. The optimal alcohol precipitation process was preferred by the method of analytic hierarchy process and the multi-index trial full-probability scoring method.A method for the determination of astragalosides and specnuezhenide in mycoplasm fromPrescription by HPLC was established. With the transfer rate of astragalosides as evaluation index, the influencing factors were C3>B3>A2>D2; with the transfer rate of specnuezhenide as evaluation index, the influencing factors were A3>D2> C2>B3, and the yield of dry paste was A3>C1>B3>D2. The optimal alcohol precipitation process after the optimization of the weighted score were: the concentration ratio of the liquid medicine (mycoplasm: extracting solution) was 1:1.5; the ethanol concentration was 85%; the alcohol content was 75%; the alcohol precipitation time was 18 h.The transfer rates of astragalosides and specnuezhenide in the optimal alcohol precipitation process are high, and better purification effect is achieved. The process is stable and feasible, which can provide basis for further study.

mycoplasm fromPrescription; comprehensive evaluation method; analytic hierarchy process; alcohol precipitation technology; content determination

R283.5

A

1005-5304(2020)10-0080-06

10.19879/j.cnki.1005-5304.201911326

甘肅省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（17YF1FA106）

王紅麗，E-mail：1439662482@qq.com

（2019-11-18）

（2020-02-25；編輯：陳靜）