結核分枝桿菌的病原學檢測及耐藥性分析

駐馬店市中心醫院醫學檢驗科 （河南 駐馬店 463000）李 松

結核病是由一種結核分枝桿菌引起、可累及多種器官并嚴重危害人類健康的慢性傳染性疾病。我國是全球結核病疫情嚴重且高耐藥國家之一。耐藥性結核桿菌的出現，可影響結核患者的預后并增加其病死率，使抗結核治療及結核病防控工作面臨極大挑戰[1]。為加強結核病控制工作，本文對我院550例結核患者的臨床資料進行回顧性分析。

1 資料與方法

1.1 臨床資料收集我院2017年1月至2018年6月確診的肺結核患者550例，其中男380例，女170例，年齡19～85歲，平均(39.4±10.6)歲；收集同期我院排除肺結核的肺部疾病患者600例，其中男415例，女185例，年齡21～85歲，平均(40.2±9.4)歲。兩組患者一般資料差異無顯著性(P＜0.05)。

1.2 方法

1.2.1 痰涂片檢查：采用無菌器皿收集患者清晨漱口后咳痰，行痰涂片抗酸染色鏡檢，嚴格按照《痰涂片鏡檢質量保證手冊》[2]要求收集痰標本、制作涂片、染色鏡檢、保存等。根據《結核病診斷細菌學檢驗規程》出具報告。

1.2.2 結核菌素試驗：于患者前臂屈側皮內注射0.1mL含5IU的結核菌素(成都生物制品研究所有限責任公司)，72h后觀察反應結果。

1.2.3 結核抗體檢測：抽取患者空腹靜脈血，采用結核分枝桿菌多種抗原IgG抗體蛋白芯片進行結核抗體檢測，嚴格按照芯片說明書進行操作。

1.2.4 藥敏試驗：對鑒定并分離的結核分枝桿菌的菌株進行4種臨床常用抗結核藥物的藥敏試驗。采用改良羅氏培養基，各培養基中藥物臨界濃度分別為鏈霉素(SM)4μg/mL，異煙脛(INH)0.2μg/mL，利福平(RFP)40μg/mL，乙胺丁醇(EMB)2μg/mL，計算耐藥百分比，耐藥百分比大于1% 判斷該菌為耐藥菌。

統計三種方法檢測肺結核患者和肺部疾病患者結核分枝桿菌的陽性例數，計算三種方法檢測結核分枝桿菌的敏感度、特異性。

1.3 統計學方法應用SPSS22.0軟件，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 不同方法檢測結核分枝桿菌結果比較痰涂片抗酸染色法檢測結核分枝桿菌的靈敏度、特異度分別為28.2%、100%，結核菌素試驗檢測結核分枝桿菌的靈敏度、特異度分別為79.5%、47.8%，結核抗體檢測結核分枝桿菌的靈敏度、特異度分別為76.9%、83.3%。痰涂片抗酸染色法特異性高于結核菌素試驗和結核抗體檢測(P＜0.05)；而靈敏度低于這兩種檢測方法(P＜0.05)，結核抗體檢測的特異性高于結核菌素試驗(P＜0.05)，但這方法檢測結核分枝桿菌的靈敏度差異無顯著性(P＞0.05)。詳情見表1。

2.2 結核分枝桿菌的耐藥情況對分離的340株結核分枝桿菌做藥敏試驗，耐1藥45株(13.2%)，耐SM、INH、RFP、EMB分別為4株(8.8%)、28株(62.2%)、10株(22.2%)、3株(6.7%)；耐多藥株295株(86.8%)，其中耐HR、HRS、HRE、HRSE分別為101株(34.2%)、63株(21.3%)、35株(11.9%)、96株(32.5%)。

表1 不同方法檢測結核分枝桿菌結果比較

3 討 論

早期診斷是早期治療和有效控制結核病的關鍵。其中病原學診斷是明確診斷的重要手段。目前，臨床常用的結核桿菌實驗室檢測方法有抗酸染色鏡檢法、結核抗體檢測法、直接培養法等[3]。

痰涂片抗酸染色鏡檢法是臨床上廣泛應用的一種肺結核診斷方法，具有簡便、快捷、低廉的優點，特異性強。但抗酸染色受痰中細菌數量限制，一般每毫升標本中需5000～10000個細菌才會呈陽性結果，與疾病的病變程度、傳染性強弱及痰標本質量均有關[4]，且結核病人是間斷性排菌，可能出現假陰性結果。此外，檢查時干擾因素多，系統及人為引起的誤差大。因此，該方法敏感性較差。

結核分枝桿菌具有特異性抗原，此為血清抗體檢測診斷的基礎。血清結核抗體檢測方法操作簡單，重復性好，結果判斷清楚，避免人為因素的干擾及主觀判斷對結果的影響，對于涂片陰性、無痰患者、兒童及肺外結核的臨床診斷有重要參考價值[5]。

結核菌素試驗操作簡單，但既往感染過結核分枝桿菌而治愈的人群也會出現陽性結果。由于我國結核分枝桿菌感染率高，因此，該試驗在人群中有著極高的假陽性率。而感染結核分枝桿菌15個月后，體內結核抗體也已消失[6]。因此，人群結核分枝桿菌高感染率對血清結核抗體檢查的影響較結核菌素試驗小。此外，結核菌素試驗結果會受到接種卡介苗的影響。

本研究結果顯示，痰涂片抗酸染色法檢測結核分枝桿菌的特異性為100%，但其敏感性較差，檢出率不高。結核抗體檢測的特異性高于結核菌素試驗(P＜0.05)，兩種方法檢測結核分枝桿菌的靈敏度差異無顯著性(P＞0.05)，可見結核抗體檢測方法優于結核菌素試驗。聯合痰涂片抗酸染色法和血清抗體檢測兩種方法，可以提高診斷的準確性。

近年來，隨著全球結核病疫情的回升，加上抗結核治療的特殊性，耐藥和耐多藥菌株日益增多，嚴重影響了治療效果，并加大了治療難度。本研究結果顯示，耐1藥45株(13.2%)，耐多藥株295株(86.8%)，其中耐HR、HRS、HRE、HRSE分別為34.2%、21.3%、11.9%、32.5%。

綜上可知，耐藥率和多耐藥率較高，需常規、定期進行耐藥性監測，根據藥敏結果及時合理用藥。