QuEChERS法結合高效液相色譜-串聯質譜法測定茶葉中12種農藥殘留量

孔玉婷，陶志成，朱丹倩，丁獻榮

（1.浙江金正檢測有限公司，浙江義烏 322000；2.贊宇科技集團股份有限公司，浙江杭州 310009）

茶葉是我國的一種常見出口農產品，在農業生產中占有重要地位。目前，我國是世界第二大茶葉出口國，但是近年來隨著茶葉進口國對茶葉食品安全要求的提高，我國茶葉的出口量正在呈現逐漸下降趨勢，因此亟須建立一種便捷、快速、高效的檢測方法用于測定茶葉中多種農藥殘留。

茶葉由于基質復雜，其中含有的色素、茶堿和茶多酚等物質會造成凈化困難，因而其農殘檢測凈化方式多采用傳統方法，如磺化、SPE 及GPC 技術，但這些前處理技術存在過程繁瑣耗時、實際用量大、檢測成本高等問題。而QuEChERS前處理方法是近年來在國際上新發展起來的一種樣品前處理方法，具有便捷、快速、高效及可靠安全等優點。因此本文采用QuEChERS 法結合高效液相色譜-串聯質譜法，建立了一種可同時測定茶葉中甲萘威、涕滅威、克百威、滅多威等12種農藥的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

茶葉：市售。

甲醇，色譜純；乙腈，色譜純，均購于美國大地公司；甲酸，色譜純，購于阿拉丁。

QuEChERS SPE：15mL PSA/C18 凈 化 管，100mgPSA，100mgC18，300mg MgSO4，購于島津。

甲萘威、涕滅威、克百威、滅多威、茚蟲威、抗蚜威、氯唑磷、內吸磷、滅線磷、吡蟲啉、多菌靈和氧樂果標準品：100mg/L，均購于農業部環境保護科研監測所。

1.2 儀器與設備

Agilent 1260 高效液相色譜儀串聯6460C 三重四極桿質譜儀（美國Agilent 公司）；3-18KS 高速冷凍離心機（德國Sartorius 公司）；純水凈化儀（杭州永潔達凈化科技有限公司）；MS 3 basic 振蕩器（IKA 公司）。

1.3 方法

1.3.1 標準溶液的配制

標準儲備液：分別移取各標準溶液至10mL 棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配制成10μg/mL，置于4℃下避光保存。

混合標準工作液：分別精密吸取各農藥標準儲備液1mL于10mL 棕色容量瓶中，用甲醇稀釋成1μg/mL 的混合標準工作液，置于4℃下避光保存。

基質標準工作液：分別精密吸取適量混合標準工作液于10mL 容量瓶中，用陰性基質溶液進行定容，現配現用。

三是現代技術。現代技術的涌現和日新月異，加之現代分析與研究方法的出現，帶動了電氣自動化向更高級方向的發展。

1.3.2 樣品提取與凈化

（1）提取

稱取2g 樣品（精確到0.001g）于50mL 離心管中，加入20.0mL 0.1%甲酸乙腈溶液，2g 氯化鈉，超聲提取30min，6 000r/min 離心4min，收集上清液待凈化。

（2）凈化

上清液中加入QuEChERS SPE 粉包凈化，渦旋振蕩1min，6 000r/min 離心3min，取上清液4.0mL 于40℃水浴氮吹至近干，殘渣用50%甲醇水復溶并定容至2.0mL。最后經0.22μm 微孔濾膜過濾后，供液相色譜-串聯質譜測定。

1.3.3 質譜與色譜條件

（1）質譜條件

（2）色譜條件

色 譜 柱：Poroshell 120 EC-C18 柱（150mm×3.0mm，2.7μm）；柱溫35 ℃；流速0.3mL/min；進樣量5μL；流動相A 為5mmol/L 乙酸銨-0.1%甲酸水溶液，流動相B 為乙腈，梯度洗脫程序：0～1min，95%A；1～4min，95%～40%A；4～14min，40%～0%A；14～18min，0%～95%A。

2 結果與分析

2.1 色譜條件優化

為選取最優的流動相體系，分別考察了流動相A（0.1%甲酸水-乙腈）、B（0.1%甲酸水-甲醇）、C（5mmoL 乙酸銨水溶液-乙腈）、D（5mmoL 乙酸銨水溶液-甲醇）、E（0.1%甲酸5mmoL 乙酸銨水溶液-乙腈）和F（0.1%甲酸5mmoL乙酸銨水溶液-甲醇）6種流動相體系，在同一濃度下進行峰面積比較。結果表明，當選取流動相E 時，其靈敏度和峰形達到最佳，因此最終選擇流動相E（0.1%甲酸5mmoL 乙酸銨水溶液-乙腈）作為最優流動相體系。

2.2 提取劑的選擇

為選取最優的提取劑，本試驗分別對甲醇、丙酮、乙腈的提取效果進行了考察。在相同條件下，作為提取劑，甲醇較難分層，丙酮和乙腈均能得到較好的回收率，但丙酮提取出的雜質和色素高于乙腈，因此選擇乙腈。而乙腈中添加1%甲酸作為混合提取劑，因甲酸可抑制目標物在水中的電離，回收率與之前相比有了較明顯的提高。因此選擇1%甲酸乙腈作為最適提取劑。

2.3 QuEChERS的影響

為進一步降低基質效應，減少雜峰干擾，提高回收率，選取QuEChERS SPE 進行凈化。凈化前，各個目標物的回收率為30%～70%，凈化后，回收率有了明顯的提高，平均回收率在72.5%～118.8%。表明QuEChERS 凈化可行性，因此采用QuEChERS 法對茶葉進行凈化處理。

2.4 方法線性、檢出限與定量限

在上述最優條件下，分別以濃度為橫坐標，以對應的峰面積為縱坐標繪制標準曲線得到線性方程；3倍信噪比為檢出限（LOD），10 倍信噪比為定量限（LOQ），結果見表1。12種化合物在2.0～100ng/mL 范圍內線性良好，相關系數r2均大于0.999。

表1 12種農藥的檢出限、定量限

2.5 方法精密度和回收率

在茶葉基質樣品中進行低中高3個濃度水平加標回收試驗，考察方法精密度和回收率，結果見表2。加標回收率和精密度均符合GB/T 27404-2008《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》的要求。

表2 12種農藥的回收率和精密度

續表

2.6 方法應用

應用本方法對市場上所售的茶葉進行隨機抽取檢測，共計40個批次，涉及紅茶、綠茶、普洱茶和烏龍茶4大類。其中有2個批次的紅茶檢出多菌靈和氧樂果，綠茶、普洱茶和烏龍茶均未檢出這12種農藥殘留。

3 結束語

本文建立一種QuEChERS 法結合高效液相色譜-串聯質譜法同時測定茶葉中12種農藥殘留量的方法，樣品經1%甲酸乙腈溶液提取，QuEChERS 法凈化，MRM 監測方式測定。12 種藥物在2～100ng/mL 濃度范圍內線性良好，相關系數r2均大于0.999，低中高濃度三個水平加標試驗平均回收率在72.5%～118.8%，RSD 在1.3%～8.1%，方法檢出限為0.260～ 11.5μg/kg，定量限為0.864～38.5μg/kg，符合農藥殘留分析的要求，該方法適用于大量茶葉樣品農藥殘留的快速篩選和定量分析檢測。