不同產地苦蕎的質量評價研究

賓 婕 張 郴 晏 通 胡建林

1.紅河衛生職業學院，云南 紅河 661199；2.昆明醫科大學藥學院暨云南省天然藥物藥理重點實驗室，云南 昆明 650500

苦蕎[Fagopyrumtartaricum(Linn)Gaench]屬蓼科蕎麥屬雙子葉植物，多產于云貴高原、黃土高原兩地[1]。其根、莖、葉、花、種子及籽殼中都含有大量黃酮類化合物，如蘆丁、槲皮素、肌醇。傳統醫學和現代醫學都證實苦蕎具有降血糖、降血脂、降尿糖、防便秘等功效[2-3]，被權威專家稱為“三降食品”和“21 世紀人類的健康食品”。因此苦蕎中蘆丁、槲皮素及肌醇含量是評價苦蕎功能性優劣的重要指標之一。此外，苦蕎中蛋白質含量也較高，有極高的營養和醫藥價值[4]。蕎麥蛋白除能顯著降低血液膽固醇濃度，其效果優于大豆蛋白質[5]，還具有抗衰老、抑制大腸癌的發生等作用。隨著其臨床研究和應用越來越廣泛，制訂苦蕎的質量標準迫在眉睫。由于水分過多會導致霉變，引入安全性問題，且影響食藥價值。有效成分的含量多少也直接影響療效。且有專家提出：重金屬、農藥殘留量檢查是中藥材走向世界，創立綠色中藥名牌產品的中藥標志之一[6]。為此，本試驗對苦蕎中有效成分進行測定，及對水分，浸出物，重金屬、砷鹽和農藥殘留進行了檢查，旨在為制訂苦蕎的質量標準提供依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-2010型高效液相色譜儀(包括四元梯度泵、自動進樣器、柱溫箱、紫外檢測器和蒸發光散射檢測器，日本島津)，ODS柱(4.6 mm×150 mm，5μm，島津)， Luna C18柱(4.6 mm×150 mm, 3μm，Phenomenex公司)，SK3200H超聲提取器(上海儀器制造廠)，CP-224S電子天平(德國賽多利斯)。

1.2 材料 甲醇(色譜純，美國TEDIA天地試劑公司)，乙腈(色譜純，美國Mallinckrodt Baker公司)，水(娃哈哈飲用純凈水)，其余試劑均為分析純。蘆丁(批號：09072231)、槲皮素(批號：09120411)對照品購自上海同田生物技術有限公司，肌醇對照品(純度>98%，鼎瑞化工(上海)有限公司)。苦蕎樣品分別來自云南和四川。

2 方法與結果

為了對苦蕎的內在質量有個全面的認識，分別對產自于云南及四川的16個樣品進行了系統性研究，方便對我們的生產使用提供一定的參考依據。

2.1 蘆丁、槲皮素、肌醇的含量測定

2.1.1 色譜條件

2.1.1.1 蘆丁與槲皮素 島津ODS柱(4.6 mm×150 mm, 5 μm)，以乙腈-水(含2%的冰醋酸)為流動相，洗脫梯度為：0～18 min，乙腈濃度17%～40%，流速：1 mL/min，柱溫：25 ℃，檢測波長：360 nm。

2.1.1.2 肌醇 HPLC：甲醇- 水(含0.1%的冰醋酸)為流動相， 洗脫梯度為：0～5 min，甲醇濃度10%～30%，色譜柱：Luna C18柱(4.6 mm×150 mm, 3μm)，流速：1 mL/min，進樣量：6 μL，室溫操作。ELSD: 漂移0；管溫度5 ℃，載氣壓力40 psi。

2.1.2 對照品溶液的制備

2.1.2.1 蘆丁與槲皮素 精密稱取蘆丁對照品4.6 mg，槲皮素對照品4.0 mg，分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，再分別取1 mL至10 mL的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得蘆丁和槲皮素對照品溶液濃度分別為0.046 mg/mL和0.04 mg/mL。

2.1.2.2 肌醇 精密稱取肌醇對照品6.7 mg置于25 mL容量瓶中，用超純水溶解并定容至刻度，搖勻，再精密移取0.5 mL至10 mL的容量瓶中，用超純水定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液濃度為13.4 μg/mL。進樣前取適量溶液用0.22 μm微孔濾膜過濾。

2.1.3 供試品溶液的配制

2.1.3.1 蘆丁供試品溶液的制備 取苦蕎粉末(過60目篩)約100 mg，精密稱定，置于25 mL容量瓶中，加入80%乙醇5 mL，在常溫下超聲(59 KHz)提取30 min，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。進樣前取適量溶液用0.45 μm微孔濾膜過濾。

2.1.3.2 槲皮素供試品溶液的制備 取苦蕎粉末(過60目篩)約100 mg，精密稱定，置于25 mL容量瓶中，加入50%乙醇4 mL，在常溫下超聲(59KHz)提取30 min，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。進樣前取適量溶液用0.45 μm微孔濾膜過濾。

2.1.3.3 肌醇供試品溶液的制備 取苦蕎粉末(過60目篩)約100 mg，精密稱定，置于25 mL容量瓶中，加入40%甲醇溶液4 mL，在常溫下超聲提取20 min，用相應的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。進樣前取適量溶液用0.22 μm微孔濾膜過濾。

分別取10 μL進高效液相色譜儀，記錄峰面積，由線性方程計算各自含量，結果見表1。

2.1.4 線性關系考察

2.1.4.1 蘆丁與槲皮素 分別精密吸取2.1.1項下的蘆丁和槲皮素對照品溶液0.5、1、5、10、15、20、25 μL和0.5、1、5、10、15 μL, 注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積，以進樣量X(μg)為橫坐標，色譜峰面積Y為縱坐標，繪制標準曲線，蘆丁和槲皮素的回歸方程和相關系數分別為：Y= 1703415X+9229.6,r=0.9996；Y=3833824X-11994.2,r= 0.9999。

2.1.4.2 肌醇 精密吸取2.1.2項下的肌醇對照品溶液2、4、6、8、10 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖， 測定其峰面積，以進樣量X(μg)為橫坐標，色譜峰面積Y為縱坐標，繪制標準曲線，得：Y=156739X+43.2,r=0.9997。

2.1.5 樣品含量測定 取不同來源的苦蕎粉末適量，精密稱定，分別按2.2項下方法制備供試品溶液，按1項下色譜條件進行測定，分別記錄蘆丁、槲皮素及肌醇的峰面積，由線性方程計算各自含量，測定結果見表1。

2.2 水分的測定 按照《中國藥典》(2020年版)中水分測定法(四部通則0832)第二法[7]，根據減失的重量，計算苦蕎樣品含水量(%)，結果見表1。

2.3 浸出物的測定 按照《中國藥典》(2020年版)中浸出物測定法(四部通則2201)[7]，分別計算苦蕎樣品中水溶性浸出物及醇溶性浸出物的含量(%)，結果見表1。

2.4 重金屬、砷鹽殘留 按照《中國藥典》(2020年版)中重金屬檢查法(四部通則0821)[7]第二法檢查重金屬；按砷鹽檢查法(四部通則0822)[7]第二法檢查砷鹽，檢測結果見表1。

2.5 農藥殘留 本試驗結合蕎麥生長期的病害特點和針對性的用藥，發現吡蟲啉和多菌靈是種植蕎麥最常用的農藥，故本試驗對吡蟲啉和多菌靈進行殘留量檢查，用液-質聯用方法進行檢測。液相條件：Waters ACQUITY UPLC -MS/MS(API 3200)，色譜柱為ACQUITY UPLC ODS柱(2.1 mm× 100 mm，7 μm)，以乙腈-水為流動相梯度洗脫：0～2 min，乙腈濃度為15%，2～6 min，乙腈濃度15%～90%，柱溫30 ℃，流速0.3 mL/min，進樣1 μL。質譜條件：氣體為高純氮氣，離子源：電噴霧離子源，掃描方式：正離子掃描，檢測方式：多重反應監測，電噴霧電壓：5500 V，霧化氣壓力：0.414 MPa，輔助加熱氣壓力：0.345 MPa，氣簾氣壓力：0.069 MPa，離子源溫度：600 ℃。

對照品和供試品的定性結果見圖1，檢測結果見表1。

A

BA.對照品；B.供試品；1.多菌靈；2.吡蟲啉圖1 定性離子對色譜圖

(n=3)

3 討論

研究考察了16個產地苦蕎樣品的有效成分，其中蘆丁含量最高，在1.02%～2.55%，肌醇含量最低，在0.15%～0.51%；且不同產地苦蕎中蘆丁、槲皮素及肌醇含量有一定差異，說明產地的氣候、土壤特性等生態因子及產地加工方式對藥材質量影響很大。同產地的苦蕎，因加工方式不同含量也有明顯差異。根據測定情況和一般養護經驗，規定本品水分不得過10%。浸出物含量反映了植物體內生物活性物質的積累情況，與藥材質量密切相關[8]。按照測定結果適當下浮來設定指標限度比較符合實際情況，規定本品水溶性浸出物不得少于10%，醇溶性浸出物不得少于5%。

按照國際市場對無公害綠色藥材的要求，對不同產地的苦蕎進行了重金屬、砷鹽及農藥殘留檢測，結果表明，苦蕎樣品符合《藥用植物及制劑進出口綠色行業標準》[9](中華人民共和國對外貿易經濟合作部)規定，及中國藥品生物制品檢定所《中藥中鉛、鎘、砷、汞測定方法起草說明》[10]中提出的四元素的限量標準，即鉛不高于5 ppm，鎘不高于0.5 ppm，砷不高于2 ppm，汞不高于0.2 ppm。

本實險對云南及四川地區苦蕎的蘆丁、槲皮素、肌醇含量、水分、浸出物、重金屬、農殘進行測定，為科學評價苦蕎內在質量積累了科學資料，提供了實驗數據。