特異性免疫治療對支氣管哮喘患兒血清調節性T淋巴細胞水平、IL-10、sIgE水平的影響及療效評價

張義 楊勤 靳蓉 王菲 尹文艷 李悅 韓芳

(1.貴陽市婦幼保健院兒童呼吸科，貴州 貴陽 550003；2.貴州醫科大學基礎醫學院病理生理學教研室，貴州 貴陽 550002)

支氣管哮喘是兒童常見的呼吸系統疾病，病理生理學研究顯示支氣管哮喘是一種以氣道高反應性與慢性氣道炎癥為主要特征的異質性疾病。臨床表現為反復發作性喘息，咳嗽、胸悶或呼吸困難[1-2]。哮喘病因復雜，免疫耐受的破壞是哮喘發病的重要環節，調節性T細胞能有效地調節或抑制其他免疫活性細胞的功能，并在多種免疫性疾病中發揮著重要的調節作用。調節性T細胞在哮喘的發病中發揮著重要作用,其水平可用來評估哮喘病情[3]。研究[4]表明，在小鼠哮喘模型中，Treg細胞水平的降低導致氣道高反應的增加。特異性免疫治療(SIT)可刺激機體免疫系統產生的應變原耐受，當患者再次接觸此變應原，可顯著減輕甚至完全控制過敏癥狀[5-6]。本研究通過研究SIT對于支氣管哮喘患兒血清中調節性T細胞(CD4+CD25+T細胞、CD4+CD25highCD127lowTreg細胞)、IL-10、SIgE水平變化的影響，初步探討Treg及其細胞因子在兒童支氣管哮喘中的作用機制，現報告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取貴陽市婦幼保健院、貴陽市兒童醫院呼吸哮喘專科2017年2月至2018年4月收治的支氣管哮喘患兒60例，隨機分為實驗組和對照組，各30例。對照組男17例，女13例；年齡(9.33±0.84)歲，病程(2.30±0.47)年，近1年急性發作次數(1.67±0.55)次。實驗組男19例，女11例；年齡(9.53±1.20)歲，病程(2.43±0.50)年，近1年急性發作次數(1.53±0.51)次。兩組患者一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。納入標準：(1)符合兒童支氣管哮喘診斷標準[7]；(2)年齡<13歲，病程>1年，且近1年急性加重次數≥1次；(3)符合免疫治療適應證；(4)霧化吸入沙丁胺醇后可逆程度≥12%，或FEV1>80%預估值；(5)粉塵螨和/或屋塵螨皮膚試驗陽性，貓、狗、蟑螂類、霉菌類、草類及樹、花粉類皮膚試驗陰性；(6)入選前4周內未參加其他臨床研究；(7)本人能耐受，家屬均知情且簽署同意書。排除標準：(1)精神障礙；(2)合并先天性心臟病；(3)伴有氣胸、活動性肺結核、胸腔積液、傳染性鼻炎、鼻竇炎等；(4)有過敏性休克或者不明原因濕疹；(5)曾經接受過免疫治療；(6)近1個月內因哮喘急性發作接受過急診治療。

1.2方法 對照組給予基礎用藥治療，給予吸入糖皮質激素。治療期間必要時給予β2-受體激動劑。實驗組在基礎用藥治療的同時給予SIT，給予阿羅格(購自Novo-Helisen-Depot 默克雪蘭諾公司)螨變應原注射液，在無菌條件下給藥，于上臂遠端1/3處皮下注射，初始劑量為1級濃度0.1 mL，后逐漸增加劑量，每次增加0.1～0.2 mL，至第15周增加至最大劑量(3級濃度1.0 mL)，后維持該劑量延長用藥時間間隔，直至每4～6周給藥1次，共1年。

1.3觀察指標 (1)對比兩組CD4+CD25+T細胞、CD4+CD25highCD127lowTreg細胞：于治療前和治療1年后檢測，取上肘靜脈血5mL，收集標本送檢。采用流式細胞儀檢測，計算二者在CD4+中的占比；(2)對比兩組IL-10、sIgE水平變化：于治療前和治療1年后檢測，取上肘靜脈血5mL，收集標本后送檢；采用酶標儀檢測，根據人總免疫球蛋白E定量檢測試劑盒操作指南測定sIgE水平；(3)兩組臨床療效判定：根據2016年GINA制定的支氣管哮喘控制水平分級判斷標準，臨床控制率=良好控制例數/總例數×100%。

2 結 果

2.1調節性T淋巴細胞水平變化 治療前兩組患兒血清CD4+CD25highT細胞、CD4+CD25highCD127lowTreg水平比、差異無統計學意義(P>0.05)。治療1年后兩組血清CD4+CD25highT細胞、CD4+CD25highCD127lowTreg水平均較治療前明顯改善(P<0.05)，且實驗組優于對照組(P<0.05)。見表1、圖1～4。

表1 兩組調節性T淋巴細胞水平比較

圖1 實驗組治療前流式圖 圖2 對照組治療前流式圖

圖3 實驗組治療1年后流式圖 圖4 對照組治療1年后流式圖

2.2免疫因子水平變化 治療前兩組患兒血清IL-10、sIgE水平差異無統計學意義(P>0.05)。治療1年后，兩組血清IL-10水平均升高(P<0.05)，且實驗組高于對照組(P<0.05)；治療1年后，兩組血清sIgE水平均下降，且實驗組低于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組免疫因子水平比較

2.3臨床癥狀改善情況 治療前兩組患兒咳喘發作次數與持續時間比較差異無統計學意義(P>0.05)。治療1年后，兩組患兒臨床癥狀均明顯改善，實驗組患兒平均咳喘次數、持續時間均明顯低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組臨床癥狀改善情況

3 討 論

支氣管哮喘是一種以慢性氣道炎癥與氣道高反應性為主要特征的異質性疾病，涉及多種細胞及和細胞組分。調節性T淋巴細胞屬于細胞群，具有免疫抑制功能，可抑制自身抗原的免疫反應，還可調控其它免疫細胞的活動，在多種免疫性疾病中均呈紊亂狀態。有研究[8]報道，支氣管哮喘發病過程中，T淋巴細胞轉化為Th2細胞，啟動、調節氣道炎癥反應，合成并釋放細胞因子，促使炎癥細胞在氣道內聚集并活化，從而發揮效應功能。Th1/Th2失衡也是該病發生的重要機制，可導致Th2細胞活性增強，刺激IgE生成的因子增多，最終可引發慢性炎癥反應。還有研究[9]發現，哮喘的嚴重程度與IgE水平密切相關；IgE介導的嗜酸細胞和肥大細胞導致I型變態反應，釋放出白三烯、組織胺，引起炎癥損傷及支氣管痙攣，導致喘息、咳嗽等臨床癥狀，抗體IgE水平增加，也是過敏性哮喘重要診斷指標。但是另有報道指出[10]，Th1細胞并不能有效抑制Th2激活導致的炎癥反應，反而會加重炎癥反應，且Th1細胞分泌的IFN-γ也不會與Th2產生的因子相互協同促進炎癥，反而加重臨床癥狀。有研究[11]顯示，調節性T淋巴細胞水平紊亂參與了支氣管哮喘的發生和發展，且也可誘發炎癥反應，影響肺通氣與換氣功能。在小鼠哮喘模型中，Treg細胞水平的降低導致氣道高反應的增加[12]。

SIT是指從低劑量開始給予患者接觸變應原藥物，逐漸增加劑量后維持用藥，持續足夠療程，可刺激機體免疫系統產生的應變原耐受，當患者再次接觸此變應原，可顯著減輕甚至完全控制過敏癥狀[5]。有研究證明聯合進行SIT可緩解支氣管哮喘的發作次數，提高支氣管哮喘控制率，減少復發率[13]。本研究結果顯示，治療1年后兩組CD4+CD25highT細胞、CD4+CD25highCD127lowTreg升高，且實驗組優于對照組(P<0.05)。提示SIT可改善支氣管哮喘患兒調節性T淋巴細胞水平，控制炎癥反應，且其作用明顯優于常規基礎治療。本研究結果還顯示，治療1年后兩組血清 IL-10水平升高，血清sIgE水平均降低，且實驗組優于對照組(P<0.05)。表明SIT有助于刺激并激活哮喘患者的免疫系統，從而對該致敏原產生耐受性，通過改善支氣管哮喘患兒調節性T淋巴細胞水平，調節血清IgG4水平和sIgE水平，控制炎癥反應等途徑發揮治療作用，可緩解哮喘癥狀，避免哮喘急性發作，還有可能避免新發變態反應[14]。本研究結果顯示，兩組經過治療后，臨床癥狀均明顯改善，治療1年后實驗組患兒平均咳嗽次數、持續時間明顯低于對照組(P<0.05)，提示經聯合SIT后患兒癥狀改善效果更為顯著，表明SIT有助于縮短兒童哮喘癥狀持續時間，減少哮喘發作次數，有助于緩解病情。

綜上，SIT聯合哮喘基礎治療與單純哮喘基礎治療比較，前者能更加明顯改善兒童哮喘的臨床癥狀、減輕氣道慢性炎癥，降低哮喘復發率。

(本文圖1～4見封三)