加味吳茱萸湯對高糖高脂及飲酒致大鼠高血壓和血管內皮功能的影響

吳浩杰, 周瑞堂, 倪 寧

(1. 西安市第一醫院心內科, 西安 710002; 2. 西安市第一醫院中醫科, 西安 710002 3. 西安交通大學醫院內科, 西安 710049)

高血壓(hypertension)是臨床上慢性疾病中較為常見的一種，也是多種疾病的主要危險因素。根據《中國心血管病報告2016》[1]概要顯示，我國目前已發現高血壓患者約2.7億例。隨著社會經濟發展，人們的生活習慣也隨之發生改變，高血壓患者越來越多，且發病人群越來越趨向年輕[2]。除嚴重損害和威脅人們的身體健康外，從中冠心病的藥物治療。高血壓還會引發各種嚴重的并發癥，例如腦卒中、冠心病、慢性腎臟疾病以及視網膜病變等等[3]。高血壓疾病的發生發展機制較為復雜，其中血管內皮功能的紊亂與高血壓發病密切相關[4]。有研究證實，加味吳茱萸(Tetradium ruticarpum)湯對自發性高血壓大鼠的血壓具有一定的調節作用[5]。本研究初步探討加味吳茱萸湯對高糖高脂飲酒致大鼠高血壓及血管內皮功能的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF級雄性SD大鼠100只，8周齡，體質量140～160 g，由長沙天勤有限責任公司[SCXK(湘)2019-0023]提供，飼養于屏障設施[SYXK(湘)2019-0013]內。每籠5只，正常飼料適應性喂養，自由飲水，實驗前觀察1周，各大鼠活動、進食、糞便以及一般情況均無異常變化后進行實驗。

1.2 主要藥品、試劑和儀器

加味吳茱萸湯由西安市第一醫院藥劑科調配、煎制，基本方組成：吳茱萸60g，石決明60 g，天麻60 g，黃芪60 g，夏枯草60 g，當歸60 g，人參60 g，大棗45 g，丹參50 g，甘草50 g。按此方比例稱取藥物，加水煎煮2次，每1次加12倍量蒸餾水。每次煎煮1 h，取濾液，加工減壓濃縮至相對密度1.25～1.30(70 ℃)備用(后面治療組湯藥每毫升相當于0.5 g原藥)。紅星二鍋頭酒(乙醇體積分數52%，北京紅星股份有限公司)。細胞間黏附分子-1(ICAM-1)(CD54)免疫組織化學試劑盒購自武漢博士德公司；125I內皮縮血管肽-1(125I-ET-1)放射免疫試劑盒購自北京北方生物技術研究所；一氧化氮(NO)測試盒(一步法)購自南京賽維爾生物有限公司。內皮型一氧化氮合成酶(eNOS)酶聯免疫吸附試驗試劑盒購自中國上海英展機電企業有限公司(EXCELL)。Medlab大鼠無創血壓測量系統購自中國南京卡爾文生物科技有限公司。高糖高脂飼料購自中國醫學科學院實驗動物研究所(基礎飼料68.8%，蔗糖10.0%，蛋黃粉10.0%，豬油10.0%，膽固醇1.0%，膽鹽0.2%)。

1.3 模型建立及實驗方法

100只雄性SD大鼠適應性喂養后，20只大鼠作為正常對照組，給予普通飼料，自由飲水。其余80只大鼠給予高糖高脂飼料及梯度飲酒以制備高血壓大鼠模型[6]：大鼠給予高糖高脂飼料，同時給予勾兌成乙醇體積分數為5%的白酒，連續1周后將酒的乙醇體積分數提升為10%，以后每隔1周將乙醇體積分數提升2%，直到18%。然后每周將乙醇體積分數提升1%，直到22%，再連續喂養至17周完成造模。造模17周后，通過無創血壓測量系統連續5 d且同一時間點分別測量血壓，收縮壓(SBP)持續高于160 mmHg，舒張壓(DBP)持續高于130 mmHg，即認為高糖高脂飼料加飲酒誘導高血壓模型成功。

將造模成功的大鼠隨機分為4組，每組20只，分別為高血壓模型組、低劑量治療組[5 mL·kg-1·d-1]、中劑量治療組[10 mL·kg-1·d-1]和高劑量治療組[20 mL·kg-1·d-1]。采用不同濃度的加味吳茱萸湯藥液每日定時灌胃給藥，20只正常對照組和高血壓模型組大鼠以蒸餾水[10 mL·kg-1·d-1]灌胃，全部大鼠每日灌胃1次，連續灌胃6周。

1.4 血壓測定

實驗前、造模后(給藥前)及治療完成后用動物無創血壓測量系統連續5 d且同一時間點分別測量各組大鼠的SBP、DBP、平均動脈壓(MBP)和心率(HR)，并且記錄數值。

1.5 血清ICAM-1、ET-1、NO及eNOS水平測定

末次給藥后，大鼠腹腔注射8%戊巴比妥鈉(5 mL/kg)麻醉，腹主動脈取血(過程中不注入抗凝劑)。5 mL后室溫下靜置20 min，以3 000 r/min離心15 min，吸取上清液用于ICAM-1、ET-1、NO及eNOS的檢測，測定方法按相應的試劑盒說明書。

1.6 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件進行數據處理。呈正態分布的計量數據以x-±s表示，多組正態分布計量資料使用單因素方差分析進行多組樣本均數的比較，采用SNK-q檢驗進行兩兩比較，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠SBP和DBP比較

與正常對照組比較，造模后(給藥前)各組大鼠的SBP和DBP明顯升高(P＜0.05)；與高血壓模型組比較，在治療后中劑量與高劑量治療組的SBP和DBP明顯下降(P＜0.05)(表1)。

2.2 各組大鼠MBP和HR比較

與正常對照組比較，造模后(給藥前)各組大鼠的MBP明顯升高(P＜0.05)；與高血壓模型組比較，在治療完成后中劑量與高劑量治療組的MBP明顯下降(P＜0.05)。各組大鼠在治療前后HR的差異沒有統計學意義(P＞0.05)(表2)。

2.3 各組大鼠血清ICAM-1、ET-1、NO和eNOS水平

與正常對照組比較，各治療組大鼠的ICAM-1和ET-1水平明顯升高，NO和eNOS水平明顯降低(P＜0.05)；與高血壓模型組比較，中劑量與高劑量治療組的ICAM-1和ET-1水平明顯升高，而NO和eNOS水平明顯降低(P＜0.05)(表3)。

表 1 各組大鼠治療前后的SBP、DBP水平比較Table 1 The systolic blood pressure (SBP) and diastolic blood pressure (DBP) in each group of rats before and after different treatments(-x ± s)

表 2 各組大鼠治療前后的MBP、HR水平比較Table 2 The mean arterial pressure (MBP) and heart rate (HR) in each group of rats before and after different treatments(-x ± s)

表 3 各組大鼠治療后血清中ICAM-1、ET-1、NO、eNOS水平比較Table 3 The serum contents of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1), endothelin-1 (ET-1), nitric oxide (NO)and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) in each group of rats before and after different treatments(-x ± s)

3 討論

目前，全球高血壓患者已超10億人，中國成人高血壓患病率高達33.5%，患病人數近3.3億[7-8]。研究[9-10]表明，高血壓患者具有明顯的血管內皮損傷情況，因此與血管內皮損傷相關的因子表現出異常的表達狀態。在臨床檢測指標中與血管內皮功能相關的因子相對較多，例如ICAM-1、ET-1、NO和eNOS都是評估血管內皮功能的常用指標[11-12]。其中ICAM-1在炎性反應介導過程中發揮重要作用，同樣在白細胞與血管內皮之間的粘附過程中也發揮重要作用，另外，對病理狀態下導致的血管內皮炎性損傷具有更重要的評估意義[13-14]。eNOS由血管內皮細胞生成，eNOS過度表達后eNOS含量、NO活性和cGMP水平均上調。血管中氧自由基產生過多，氧化應激反應損傷血管內皮功能，并促進血管平滑肌細胞增殖和肥大，導致血管重構，從而參與高血壓病發生、發展和靶器官損害[15-16]。

目前，藥物治療加上健康的生活方式管理是針對高血壓最主要的治療方法。中藥在心血管疾病的治療中有著獨特優勢。已有文獻[17-18]報道，加味吳茱萸湯用吳茱萸疏肝降氣、溫胃散寒，人參和大棗補氣健脾，石決明和天麻平肝潛陽，黃芩和夏枯草清肝郁熱，當歸和丹參養血活血，甘草調和諸藥，故能起到降肝氣之上逆，健中氣以運脾，補陰血以養肝腎的標本兼治作用，因而具有顯著的降壓效果。基于此理論，本實驗采用加味吳茱萸湯治療誘發的大鼠高血壓，取得了較好的療效。

本研究發現，中劑量與高劑量的加味吳茱萸湯對高糖高脂飼料及飲酒致高血壓模型大鼠的SBP和DBP都具有一定的調節作用。與高血壓模型組比較，在治療完成后中劑量與高劑量治療組大鼠的SBP和DBP呈現明顯下降趨勢。通過檢測各組大鼠血液中ICAM-1、ET-1、NO和eNOS的水平，發現治療完成后中劑量與高劑量治療組大鼠的ICAM-1和ET-1水平明顯低于高血壓模型組，且趨近于正常組，而NO和eNOS水平明顯高于高血壓模型組。該結果為臨床高血壓患者的治療用藥提供了一定的參考。