25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑高效液相色譜分析

李彥飛，馮澤騰，張小軍

(中農(nóng)立華生物科技股份有限公司，北京 100052)

苯唑草酮(topramezone)，化學名稱為[3-(4,5-二氫-3-異噁唑基)-4-甲基磺酰-2-甲基苯]-(5-羥基-1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲酮，是由巴斯夫公司開發(fā)的一類對羥基苯基丙酮酸酯雙氧化酶(HPPD)類抑制劑。其屬于苯甲酯吡唑酮類除草劑，能有效防除玉米田闊葉雜草及禾本科雜草，但對莎草科雜草效果較差，具有活性高、殺草譜廣、可混性強以及對作物和環(huán)境安全等優(yōu)點[1-3]。三氯吡氧乙酸(triclopyr)，又名綠草定，化學名稱為3,5,6-三氯-2-吡啶氧基乙酸，是由陶氏化學公司開發(fā)的一種內(nèi)吸傳導型選擇性吡啶氧羧酸類除草劑，在植物體內(nèi)可傳導到全株，造成植物根、莖、葉畸形，儲藏物質(zhì)耗盡，維管束被栓塞或破裂，植株逐漸死亡。禾本科作物對三氯吡氧乙酸具有耐藥性，因此，該劑可用于非耕地防除木本植物及闊葉雜草，也可用于禾本科作物如高粱、燕麥、小麥和玉米等作物田中闊葉雜草的防治[4-7]。

目前有關(guān)苯唑草酮及三氯吡氧乙酸單劑的分析方法有較多文獻記載，但對于二者復配制劑的分析方法尚無報道。本文旨在建立一種可同時對25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑中的苯唑草酮和三氯吡氧乙酸進行定量分析的高效液相色譜法。該方法操作簡便、快速穩(wěn)定，適用于農(nóng)藥制劑中苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的定量分析。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

美國Agilent 1220型高效液相色譜儀配紫外檢測器及色譜工作站(美國安捷倫科技有限公司)；TU-1901型普析通用紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)。

乙腈(色譜純)(Thermofisher)，85%磷酸(分析純)(國藥集團)，新蒸二次蒸餾水；苯唑草酮標樣(純度≥99%)，三氯吡氧乙酸標樣(純度≥99%)，北京勤誠亦信科技開發(fā)有限公司提供；25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑，自制。

1.2 色譜條件

液相色譜柱：安捷倫ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，內(nèi)裝5 μm C18填充物)；流動相：乙腈-0.1%磷酸水溶液(體積比50∶50)，流量：0.8 mL/min；柱溫：室溫；檢測波長：254 nm；進樣體積：5.0 μL。在上述色譜操作條件下，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的保留時間分別約為3.6 min和9.7 min。苯唑草酮及三氯吡氧乙酸標樣及制劑樣品的高效液相色譜圖分別見圖1、2。

圖1 苯唑草酮(進樣濃度200 mg/L)及三氯吡氧乙酸(進樣濃度800 mg/L)標樣高效液相色譜圖

圖2 25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑高效液相色譜圖

1.3 溶液的配制

1.3.1 標樣溶液的配制

準確稱取0.02 g苯唑草酮標樣(精確至0.000 02 g)或0.08 g三氯吡氧乙酸標樣(精確至0.000 2 g)，分別置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，搖勻，脫氣后備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

準確稱取0.4 g 25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑樣品(精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，搖勻，脫氣后備用。

1.4 測定

在以上色譜條件下，待儀器基線狀態(tài)穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，計算各針相對響應(yīng)值的復性，待各針標樣相對響應(yīng)值的變化小于1.5%時按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液順序進行分析測定。重，的

1.5 計算

將測得的2針試樣溶液及試樣前后2針標樣溶液中的苯唑草酮或三氯吡氧乙酸峰面積分別進行平均。試樣中苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的質(zhì)量分數(shù)X(%)按下式計算：

式中：A1為標樣溶液中苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)平均峰面積值；A2為樣品溶液中苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)平均峰面積值；m1為苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)標樣的質(zhì)量(g)；m2為樣品的質(zhì)量(g)；P為標樣中苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的質(zhì)量分數(shù)(%)

2 結(jié)果與討論

2.1 流動相的選擇

試驗發(fā)現(xiàn)，當選用甲醇與水混合溶劑為流動相時，苯唑草酮的出峰時間太早且峰形較差，拖尾嚴重，而采用乙腈-水混合溶劑為流動相時，苯唑草酮的峰形明顯優(yōu)于以甲醇-水作為流動相的峰形，且加入0.1%磷酸后其峰形和分離度均有明顯改善。當流動相中乙腈比例太高時，苯唑草酮及三氯吡氧乙酸出峰時間均提前，分離度變差。當流速控制在0.8 mL/min，乙腈-0.1%磷酸水溶液的體積比為50∶50時，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的出峰時間相對適中，且峰形尖銳對稱，無拖尾，分離效果最好。

2.2 檢測波長的選擇

利用TU-1901型普析通用紫外可見分光光度計對苯唑草酮和三氯吡氧乙酸標樣溶液進行全波長紫外掃描，得到苯唑草酮或三氯吡氧乙酸的最大吸收波長與相關(guān)濃度響應(yīng)值的紫外吸收光譜圖。經(jīng)驗證，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸在波長254 nm下均有較大紫外吸收，且能夠得到較好的峰型，同時避免雜質(zhì)的干擾。因此本試驗選定254 nm作為本分析方法的檢測波長。

2.3 分析方法的線性相關(guān)性

分別稱取5個不同質(zhì)量的苯唑草酮、三氯吡氧乙酸標樣于5個100 mL的容量瓶中，配制成一系列標準溶液，按照本方法所確定的液譜條件進行進樣測定，結(jié)果見表1。以苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的進樣質(zhì)量(x)為橫坐標，以苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)同質(zhì)量濃度溶液的峰面積(Y)為縱坐標作圖，得苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的線性關(guān)系曲線，見圖3和圖4?？梢?，苯唑草酮(或三氯吡氧乙酸)的質(zhì)量濃度與其響應(yīng)值之間呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，其線性方程分別為y苯唑草酮=1 642.5x+8.046 2，y三氯吡氧乙酸=92.661x-4.406 2，相關(guān)系數(shù)分別為r2苯唑草酮=0.999 9，r2三氯吡氧乙酸=0.999 4。

表1 線性關(guān)系試驗結(jié)果

圖3 苯唑草酮進樣質(zhì)量與峰面積之間的線性關(guān)系

2.4 方法的精密度

從同一批25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑樣品中準確連續(xù)稱取5個試樣，在上述規(guī)定操作條件下進行分析，試驗結(jié)果見表2。由表2可見，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的標準偏差分別為0.012%和0.013%，變異系數(shù)分別為0.24%和0.06%，說明該方法的精密度良好，能滿足日常定量分析的要求。

2.5 方法的準確度

準確稱取5個25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑試樣，加入一定量的苯唑草酮和三氯吡氧乙酸標樣，按1.2的液相色譜條件進行測定，并計算回收率，結(jié)果見表3。可見，苯唑草酮和三氯吡氧乙酸加標回收率分別為99.0%～100.5%和99.3%～101.6%，平均回收率分別為99.5%和99.7%，說明該方法準確度較高，可滿足定量分析要求。

圖4 三氯吡氧乙酸進樣質(zhì)量與峰面積之間的線性關(guān)系

表2 25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑分析方法精密度試驗

表3 25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑加標回收率試驗

3 結(jié)論

本文建立了采用高效液相色譜法同時快速測定混配制劑中苯唑草酮和三氯吡氧乙酸的方法。采用C18不銹鋼色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)和紫外檢測器，以乙腈-0.1%磷酸水溶液(體積比50∶50)為流動相，同一色譜柱定量分析檢測25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑中的苯唑草酮和三氯吡氧乙酸2種有效成分，得到2種有效成分的加標回收率和精密度相對較高，線性關(guān)系良好。該方法具有操作簡便快速、檢測過程穩(wěn)定、檢測結(jié)果準確、分離效果好等特點，可用于25%苯唑草酮·三氯吡氧乙酸懸浮劑生產(chǎn)過程中產(chǎn)品質(zhì)量檢測與質(zhì)量控制。