殺菌劑對浙貝母灰霉病菌室內(nèi)毒力的測定

阮若昕，羅秀俊，王明爽，王慧中

(1.杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 杭州 310024； 2.杭州師范大學(xué) 浙江省藥用植物種質(zhì)改良與質(zhì)量控制技術(shù)重點實驗室，浙江 杭州 311121)

浙貝母(FritillariathunbergiiMiq.)是浙江傳統(tǒng)中藥材“浙八味”之一，以地下鱗莖入藥，有清熱散結(jié)、化痰止咳等功效。浙江是全國浙貝母主要種植地區(qū)，種植面積約過0.3萬hm2，年產(chǎn)量約0.5萬t。浙貝母是浙江省磐安、東陽和鄞州等地區(qū)農(nóng)民增收致富的主要產(chǎn)業(yè)之一[1]。由灰葡萄孢菌(BotrytiscinereaPers.)引起的灰霉病是浙貝母生產(chǎn)中主要病害之一，如不及時防治，會造成超過80%的植株發(fā)病，不僅會造成產(chǎn)量的損失而且會影響浙貝母的藥效品質(zhì)，進(jìn)而導(dǎo)致商品性和銷售價格下降，嚴(yán)重影響浙貝母產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[2]。單一化學(xué)農(nóng)藥長期反復(fù)施用不僅會增加生產(chǎn)成本，而且會造成產(chǎn)品農(nóng)藥殘留超標(biāo)，嚴(yán)重影響浙貝母的藥用安全性。為了篩選出能有效防治浙貝母灰霉病的殺菌劑，選擇了6種殺菌劑對浙貝母灰霉病菌進(jìn)行室內(nèi)毒力的測定，以期為田間防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試藥劑共6種：25 g·L-1咯菌腈懸浮種衣劑(瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司)，25%吡唑醚菌酯懸浮劑(江蘇東臺東南化工有限公司)，40%嘧霉胺懸浮劑(廣東中迅龍科股份有限公司)，75%百菌清可濕性粉劑(威海韓孚生化藥業(yè)有限公司)，10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑(廣東中迅農(nóng)科股份有限公司)，40%百可得可濕性粉劑(日本曹達(dá)株式會社)。

供試浙貝母灰霉病菌菌株來源于浙江省磐安縣的浙貝母帶病花器，用組織分離法[3]進(jìn)行分離純化，獲得菌株P(guān)AG3-1。經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，確定菌株P(guān)AG3-1為灰葡萄孢菌(B.cinerea)，菌株保存于4 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2 毒力測定

采用菌絲生長速率法在室內(nèi)測定6種殺菌劑對浙貝母灰霉病菌株P(guān)AG3-1的毒力，用無菌水將供試藥劑稀釋成5個梯度濃度后配制含藥PDA平板。各藥劑的濃度分別為：咯菌腈0.4、0.2、0.1、0.05、0.025 μg·mL-1；吡唑醚菌酯100、50、25、12.5、6.25 μg·mL-1；嘧霉胺20、10、5、2.5、1.25 μg·mL-1；百菌清8、4、2、1、0.5 μg·mL-1；苯醚甲環(huán)唑10、5、2.5、1.25、0.625 μg·mL-1；百可得10、5、2.5、1.25、0.625 μg·mL-1。以加入無菌水的培養(yǎng)基作為對照。重復(fù)3次。用打孔器打取5 mm的菌餅，接種于含有不同濃度殺菌劑的PDA平板中央。25 ℃培養(yǎng)5 d，十字交叉法測量菌落直徑，計算菌絲生長抑制率。

1.3 數(shù)據(jù)處理

用SPSS Statistics 20軟件進(jìn)行計算分析，計算出各藥劑毒力回歸方程、EC50值和相關(guān)系數(shù)。根據(jù)EC50值評價殺菌劑毒力大小。

2 結(jié)果與分析

通過室內(nèi)毒力測定，獲得了6種殺菌劑對浙貝母灰霉病菌菌絲生長的EC50值和毒力回歸方程(表1)。經(jīng)EC50值比較，殺菌劑毒力從大到小依次為咯菌腈>百菌清>苯醚甲環(huán)唑>百可得>嘧霉胺>吡唑醚菌酯。咯菌腈對浙貝母灰霉病菌菌絲生長的抑制作用最強(qiáng)，EC50值為0.05 μg·mL-1；百菌清也有較好的抑菌效果，EC50值為1.51 μg·mL-1；苯醚甲環(huán)唑和百可得的抑制作用較弱，EC50值分別為3.15和4.56 μg·mL-1；嘧霉胺和吡唑醚菌酯的抑制作用最弱，EC50值分別為10.06和30.33 μg·mL-1。

表1 6種殺菌劑對浙貝母灰霉病菌的室內(nèi)毒力測定結(jié)果

3 小結(jié)與討論

室內(nèi)毒力測定結(jié)果表明，6種殺菌劑對浙貝母灰霉病菌的菌絲生長有不同程度的抑制作用，其中25 g·L-1咯菌腈懸浮種衣劑對浙貝母灰霉病菌絲生長的抑制作用最佳。咯菌腈是一種新型的非內(nèi)吸性苯基吡咯類殺菌劑，屬假單胞細(xì)菌產(chǎn)生的抗生素硝吡咯的衍生物。據(jù)近期報道，長三角地區(qū)果蔬灰霉病病菌對咯菌腈仍然敏感[4]。

灰霉病菌寄主范圍廣，培育抗病新品種難度大，目前主要還是以化學(xué)防治措施為主。但同一化學(xué)藥劑的連續(xù)使用易導(dǎo)致灰霉病菌產(chǎn)生抗藥性的問題。在其他作物上，灰霉病菌已對苯并咪唑類、二甲酰亞胺類、N-苯氨基甲酸酯類和苯胺基嘧啶類等殺菌劑產(chǎn)生了不同程度的抗性[5-6]。針對浙貝母灰霉病，除了強(qiáng)調(diào)預(yù)防為主的田間措施，篩選新的不同類型的殺菌劑作為替代品或者進(jìn)行輪換使用，也是提高防治效果的一種重要手段。田間試驗表明，異菌脲(二甲酰亞胺類)、氟菌·肟菌酯(甲氧基丙烯酸酯類)和唑醚·氟酰胺(芳酰胺類)對防治浙貝母灰霉病均有一定效果[7]。通過室內(nèi)毒力測定，咯菌腈對浙貝母灰霉病菌有顯著的抑制效果，可以開展進(jìn)一步田間防效試驗，以確定咯菌腈在環(huán)境條件更復(fù)雜的大田的應(yīng)用效果。