枇杷苯醚甲環唑和多菌靈殘留分析方法的探討

張亮，付巖，王全勝，凌淑萍，胡晨雷，陳紅霞

(寧波市農業科學研究院，浙江 寧波 315040)

枇杷別名蘆橘、金丸、蘆枝等[1]，原產于中國東南部，如今長江以南地區均有種植。成熟的枇杷味道甜美，營養物質豐富，含有多種果糖、葡萄糖、鉀、磷、鐵、鈣以及維生素A、B、C等[2-3]。枇杷果實有潤肺止咳的功效，再加上枇杷成熟期恰逢一年中新鮮水果匱乏季節，因此，深受消費者的厚愛。浙江地區的枇杷一般在5月成熟，恰逢高溫高濕的梅雨季節，病害極易發生，為保證枇杷的產量和品質，不可避免的要使用苯醚甲環唑及多菌靈等殺菌劑，這也給枇杷的食用安全帶來一定的風險。

苯醚甲環唑是一種安全性較高的三唑類殺菌劑，具有保護和治療作用，廣泛應用于果樹、蔬菜等作物，能有效防治黑星病、黑痘病、白腐病、斑點落葉病、白粉病、褐斑病、銹病、條銹病、赤霉病等[4-6]。多菌靈是一種高效低毒的苯并咪唑類殺菌劑，可通過干擾病原菌有絲分裂中紡錘體的形成，影響細胞分裂，起到殺菌作用，能有效防治大田作物、蔬菜、水果等作物上的多種病害[7-9]。

目前，我國關于苯醚甲環唑和多菌靈的檢測方法主要有酶聯免疫法[10-14]、氣象色譜法[15-19]、高效液相色譜法[20-24]和液相色譜串聯質譜法[25-30]等，但鮮見液相色譜串聯質譜法同時檢測枇杷中苯醚甲環唑和多菌靈的研究報道，也未見有關其貯藏穩定性的報道。本研究建立采用UPLC-MS/MS技術同時測定枇杷中苯醚甲環唑和多菌靈殘留量的方法，操作簡單、快捷，定性定量準確可靠，靈敏度高，并對其在枇杷中的穩定性進行了考察研究，以期為苯醚甲環唑和多菌靈在枇杷中的進一步研究提供分析方法和數據參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

乙腈、甲酸為色譜純，無水硫酸鎂為分析純；PSA填料40～63 μm，購于安普公司；苯醚甲環唑、多菌靈標準品濃度均為100 μg·mL-1，均購自農業部環境保護科研監測所；LC-MS/MS(Waters)，備色譜柱Acquity UPLC BEH C18 (2.1 mm×100 mm，1.7 μm)柱；恒溫振蕩器(IKA KS4000ic)，高速離心機(Sigma 3K15)，旋渦混合器(IKA GENIUS3)，電子天平(MettlerQuintix124)。

1.2 樣品前處理

稱取勻漿后的枇杷樣品5 g(精確至0.01 g)置于50 mL離心管中，加入10.0 mL乙腈，以350 r·min-1振蕩提取30 min后，加入5 g氯化鈉劇烈震蕩1 min，再以9 500 r·min-1離心3 min，吸取2 mL上清液于裝有150 mg PSA和300 mg無水硫酸鎂的5 mL塑料離心管中，漩渦振搖1 min，9 500 r·min-1離心3 min。吸取凈化上清液1.0 mL至另一試管中，并加入1.0 mL 0.1%甲酸溶液混合均勻，過0.22 μm濾膜后供LC-MS/MS測定。

1.3 標準液配制

分別吸取100 μL濃度為100 mg·L-1的苯醚甲環唑和多菌靈標準品，用色譜純乙腈稀釋成10 mg·L-1混合標準工作溶液；分別吸取10 μL濃度為100 mg·L-1的苯醚甲環唑和多菌靈標準溶液，用枇杷空白基質液和0.1%甲酸溶液(5∶5，V∶V)逐級稀釋成1.000、0.500、0.100、0.050、0.010、0.005、0.001 mg·L-1的基質標準工作液。

1.4 檢測條件

流動相為0.1%甲酸溶液(A)和乙腈(B)，采用梯度洗脫，0～1.0 min，維持50%B；1.0～2.0 min，50%B線性變化至80%B；2.0～4.00 min，維持80%B，4.00～4.10 min，80%B線性變化至50%B；4.10～5.00 min，維持50%B。色譜柱柱溫35 ℃，樣品室溫度10 ℃，流速為0.3 mL·min-1，進樣體積10 μL。

采用多重反應監測(MRM)分析，電噴霧離子源，正離子電離模式(ESI+)，電離電壓2.50 kV，去溶劑氣(N2)流速1 000 L·h-1，錐孔氣流速50 L·h-1，源溫150 ℃，霧化溫度500 ℃。苯醚甲環唑母離子406.10m/z，子離子分別為337.00m/z和251.00m/z(定量離子)，駐留時間為0.081 s，錐孔電壓為40 V，碰撞電壓分別為13和22 eV；多菌靈母離子191.97m/z，子離子分別為132.00m/z和159.93m/z(定量離子)，駐留時間為0.081 s，錐孔電壓為24 V，碰撞電壓分別為283和18 eV。

1.5 貯藏穩定性試驗

2 結果與分析

2.1 方法的線性范圍與靈敏度

基質匹配外標法定量分析。結果表明，苯醚甲環唑和多菌靈在0.001～1.000 mg·L-1質量濃度范圍內均呈現良好的線性關系，兩者線性回歸方程分別為Y=1 028 747X+3 038，r=0.999 7(苯醚甲環唑)；Y=421 355X+4 900，r=0.994 8(多菌靈)。根據標準曲線最低濃度0.001 mg·L-1，進樣體積10 μL，計算苯醚甲環唑和多菌靈的最小檢出量均為1.0×10-11g，最低檢出濃度為0.001 mg·L-1。

2.2 添加回收率與相對標準偏差

表1表明，在0.005、0.100、0.500、1.000、6.000 mg·kg-1添加水平下，苯醚甲環唑在枇杷中的平均回收率為77%～108%，多菌靈在枇杷中的平均回收率為87%～105%，且相對標準偏差(RSD)均≤5%(n=5)，表明方法具有良好的準確度和精密度，符合農藥殘留分析要求。其典型色譜圖(圖1)顯示，添加水平為0.5 mg·kg-1苯醚甲環唑和多菌靈的保留時間分別在3.06和0.81 min左右。

表1 枇杷中農藥的添加回收率

圖1 枇杷樣品添加兩種殺菌劑的典型色譜圖

2.3 貯藏穩定性

表2表明，在枇杷基質中，苯醚甲環唑和多菌靈30 d的平均降解率分別為11%和4%，90 d的平均降解率分別為16%和6%，180 d的平均降解率分別為20%和9%。由此可見，苯醚甲環唑和多菌靈在枇杷樣品中的貯藏穩定性至少為180 d。

表2 苯醚甲環唑和多菌靈在枇杷基質中貯藏的穩定性

3 小結與討論

本研究在QuEChERS方法基礎上，建立UPLC-MS/MS同時測定枇杷中苯醚甲環唑和多菌靈的殘留分析方法，在0.001～1.000 mg·L-1質量濃度范圍內，苯醚甲環唑和多菌靈線性關系良好，相關系數大于0.994 8，最小檢出量均為1.0×10-11g，在0.005～6.000 mg·kg-1添加水平下，苯醚甲環唑和多菌靈在枇杷中的回收率為77%～108%和87%～105%，且相對標準偏差(RSD)均≤5%。該方法前處理簡單快速，靈敏度和精密度均符合農藥殘留檢測要求，可為枇杷中苯醚甲環唑和多菌靈殘留的檢測提供方法依據。通過貯藏穩定性試驗發現，在-20 ℃條件下，苯醚甲環唑和多菌靈在枇杷樣品中的貯藏穩定性至少為180 d，說明兩者在枇杷樣品中的穩定性良好。本研究可為短期冷凍枇杷樣品中的苯醚甲環唑和多菌靈的檢測數據的有效性和真實性以及兩者在枇杷上的深入研究提供數據支持和參考。