芽孢桿菌制劑對雞腸道腸球菌的影響和評價

陳 彬，郝思軍，朱 超

（1.寶應縣畜牧獸醫站，江蘇 揚州 225800；2.寶應縣曹甸鎮農業技術推廣服務中心，江蘇 揚州 225803）

本次實驗選取日齡相同，體重大小相近的新揚州雞（公雞）共21只，按體重配對隨機分為3組，一組對照組，一組實驗1組，一組實驗2組，每組7只即每組7個重復，采用改進的強飼法來研究基礎日糧中添加一種新開發的活菌制劑（芽孢桿菌制劑）對雞盲腸、直腸的影響。通過實驗結果表明，在日糧中添加0.4%的該活菌制劑可以顯著促進某些腸球菌的生長。

1 活菌制劑的微生物種類及主要特性

選作活菌制劑的微生物種類主要有酵母類微生物、乳酸桿菌屬、芽孢桿菌屬等，這些主要從土壤、發酵食品、腌制品、動物消化道、動物糞便的無毒菌株中提取。目前，首選的是乳酸菌，芽孢桿菌次之。

乳酸桿菌屬為厭氧或兼性厭氧菌，主要分泌乳酸及短鏈脂肪酸，能降低腸道中的pH值，抑制有害菌的生長。但是，該類菌較不穩定，不能耐受飼料加工和長期存放；酵母類是飼料中應用最早、最廣泛的飼用微生物，主要是為動物提供蛋白質，幫助消化，提高機體的代謝力；芽孢桿菌屬的菌為需氧菌，它在無氧條件下不繁殖，它通過競爭奪氧來抑制有害菌和外來菌的生長、繁殖，從而維持動物消化道的微生態平衡等。因此，近年來對芽孢桿菌屬的制劑研究增多。

1.1 芽孢桿菌的特點

芽孢桿菌是目前常用的一類活菌制劑，作為微生態制劑，有人稱其為超乳酸菌。芽孢桿菌是一類好氧或兼性需氧生長、可形成芽孢的革蘭氏陽性菌，在制劑中以內生孢子形式存在。在制備過程中，其孢子具有耐高溫、耐酸堿、耐擠壓的特性，且在飼料加工制備過程中損傷性小。芽孢桿菌對外界環境的抵抗力比較強，可耐高溫在60℃以上，在常溫情況下可以保存一年以上，易培養和加工成各種制劑，而且效果相對穩定。芽孢桿菌制劑作為活菌制劑，芽孢孢子進入動物的腸道后，在動物腸道上部休眠的孢子將迅速復活發芽、生長成為有新陳代謝作用的營養型細胞，分泌活性很強的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶，利于降解飼料中某些復雜化合物，飼料的利用率也能夠得到有效提升；還可以產生具有拮抗腸道致病菌的多肽類物質，同時通過生物奪氧消耗腸道內的氧氣，形成厭氧環境。腸道原籍優勢菌多屬于厭氧菌，而消化道中的有害菌多為需氧菌，使用芽孢桿菌可以維持腸道的生態平衡。

1.2 腸球菌臨床的重要性

腸球菌在自然界中的分布比較廣泛，也是人和畜禽動物胃腸道的正常菌群之一。在臨床實踐中發現，糞腸球菌約占80%～90%，屎腸球菌約占5%～15%，鶉雞腸球菌、鉛黃腸球菌、堅忍腸球菌、鳥腸球菌和棉子糖腸球菌約占5%以下。近年來，一些少見的菌種所致的感染時有報道，如盲腸腸球菌腹膜炎、膽囊炎、腦膜炎、心內膜炎、尿路感染及腎盂腎炎等多種感染。出現這些情況的主要原因是腸球菌對現有的一些抗生素耐藥性在逐年增加，甚至出現了萬古霉素耐藥腸球菌的相關案例，張正等對兩年間分離于院內感染標本的553株腸球菌進行了耐藥分析，其中91.9%的為糞腸球菌，對萬古霉素的耐藥率分別為2.95%、對替考拉寧的耐藥率分別為0.83%，其中VanA6株、VanB9株、VanC3株有VRE的出現，導致很難控制該菌在患者之間的傳播。感染控制措施要依靠隔離和控制VRE定植或感染的病人。盡管VRE定植的方式尚不清楚，但采取有效的方法快速鑒定病人定植或感染VRE是非常必要的[1]。

本次試驗采用選擇性培養基對雞體內腸球菌在盲腸、直腸的分布進行了測定，為以后微生態制劑研究在腸段選擇，菌種選擇方面做基礎，為微生態制劑的研發工作提供參考和幫助。

2 試驗及分析

2.1 材料與方法

2.1.1 實驗動物：選購揚大農牧場內120日齡種公雞21只，均臨床健康。

2.1.2 實驗制劑：活菌制劑（由張艷云老師提供）；雞場自配基礎日糧；腸球菌從雞腸道分離。

2.1.3 培養基：腸球菌培養基（疊氮鈉--結晶紫--七葉苷瓊脂）：用于選擇培養腸球菌；購于北京陸橋技術有限責任公司。

2.1.4 實驗儀器：電熱恒溫培養箱；電熱鼓風干燥箱；高壓滅菌鍋；微凈化操作臺；推棒；酒精燈；三角燒瓶；試管；恒溫水浴震蕩器。

2.2 方法

2.2.1 實驗分組：將21只雞分為3組，每組為7只。實驗1組中的7只雞，在飼喂的食料中添加了0.2%微生態活菌制劑；實驗2組中的7只雞，在飼喂的食料中添加了0.4%微生態活菌制劑；實驗3組中的7只雞，飼喂基礎的日糧作為對照組。

2.2.2 實驗雞準備：預試期：將3組雞在同一環境條件下飼喂基礎日糧，每日觀察雞群的精神狀態、采食及排便情況，進行飼喂一周以后，21只雞的健康狀況均良好。正試期：3組雞分開飼喂，每天喂給實驗組1的雞150g拌有活菌制劑0.2%的飼料；每天喂給實驗組2的雞150g拌有活菌制劑0.4%的飼料；喂給對照組雞150g基礎日糧，3組雞均在同一環境條件下飼喂。

2.2.3 取材與處理：選好試驗用的雞后送到實驗室進行剖殺，先用75%的酒精對皮毛消毒后再進行無菌手術。將盲腸和直腸取出后，段成小段后放入滅菌平皿中，取3g內容物放在滅菌三角燒瓶內，加入27ml生理鹽水稀釋液在37℃恒溫水浴震蕩器中，振蕩30分鐘以后形成均勻的懸濁液，再以10倍稀釋法依次稀釋為10-1、10-2……10-9。

2.2.4 接種與培養：取稀釋好的腸內容物100ul，分別從低稀釋度至高稀釋度接種，每個稀釋度接種3個平皿，要快速準確的完成操作步驟，操作完成后立即將腸球菌放在37℃恒溫培養箱中，培養時間為24h。

2.2.5 計數及數據統計：采用活菌計數法，每克糞便中的活菌數對數值log10nCFU/g=log（稀釋倍數×3個平皿菌落均值）。所以數據均采用Excel統計工具進行統計分析，顯著性檢驗采用SPSS法進行檢驗。

2.3 結果與分析

微生態制劑飼喂實驗結果見表1（單位：logCFU/g）

3 討論

乳酸菌作為健康的腸道細菌之一，對人體是安全的。由于乳酸菌大量定植在腸道中，會影響到腸道的消化吸收及其他功能。由于現在對廣譜抗生素、免疫抑制劑等的使用較多，以及艾滋病、肝炎、腫瘤等疾病的出現導致機體免疫力下降，造成受感染幾率增加。

腸球菌屬自1984年獨立新屬來至今已有19個菌種，其中糞腸球菌更易成為條件致病菌。腸球菌是重要的乳酸產生菌，能調節脂代謝，具有微生態學的意義，已經應用于保健品及臨床如一些酸奶、飲料、藥品等。屎腸球菌與不溶血腸球菌可能更適合作為微生態調節劑。

隨著我國畜禽業的不斷發展，對畜禽健康生長的產品研究探尋也在進行中。中國加入WTO后，綠色健康的農產品面臨著一定的壓力，越來越多的學者提倡對微生態制劑的開發和應用。根據微生態學原理，采用微生態制劑和微生態工程技術能夠重建畜禽腸道的正常微生物菌群，預防和治療畜禽養殖過程中出現的腸胃疾病問題，減少使用抗生素，提升飼料轉化率，減少畜禽養殖的生產成本。而且，在畜禽飼養中使用微生態制劑可確保畜禽產品無毒、無害、無殘留和無污染。同時，能夠減少畜禽糞便產生的氣味，從而保護環境，可見微生態制劑的開發和研究的前景廣闊。