慢性乙型肝炎后肝硬化患者外周血T細胞亞群及促炎癥亞群CD16+單核細胞的變化及臨床意義

孟玉麗，王 斌，張紅旭

(河南省漯河市中心醫(yī)院，河南 漯河 462000)

慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)簡稱乙肝，是一種由過血液途徑傳播的乙型肝炎病毒性疾病，指患者表面抗原呈陽性，轉氨酶間歇或持續(xù)性上升超過半年，隨著病情變化，患者將逐漸向肝硬化發(fā)展[1，2]。主要是因患者機體內免疫功能發(fā)生紊亂所致，而T細胞參與機體免疫調節(jié)，且是目前臨床上對免疫狀態(tài)進行有效評估的細胞因子[3]。研究指出，CHB患者體內存在著較多的非特異性細胞例如調節(jié)性T細胞、樹突狀細胞等均參與了乙型肝炎向肝硬化發(fā)展的過程，對肝炎的病變過程具有重要意義[4]。而眾所周知，單核細胞在CHB患者的肝臟中的浸潤及損傷的病變中具有緊密聯系[5]。而目前關于外周血T細胞及促炎癥亞群單核細胞在CHB患者中的意義的相關研究較少[6]。本研究對本院確診的142例CHB及乙型肝炎后肝硬化患者進行分析，探究T細胞亞群與促炎癥亞群CD16+單核細胞的表達對乙型肝炎后肝硬化患者的病程變化的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2017年8月至2019年8月我院收治的研72例乙型肝炎患者和70例乙型肝炎后肝硬化患者，均經臨床上慢性乙型肝炎或肝硬化診斷標準[7]確診且未合并酒精性肝炎、自身免疫性肝病及其他類型肝炎或其他感染性疾病。再納入60例同時間段進行體檢的健康人群作為對照組，各組基線資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組一般資料比較

1.2 方法試劑與儀器：運用PE標記的單克隆抗體CD16以及運用FITC進行標記的CD14、T細胞亞群試劑盒(美國BD公司)、流式細胞分析儀(美國BD FACSCalibur)、石蠟、4%甲醛。檢測方法：①T細胞亞群檢測：抽取所有受檢者3 ml清晨空腹靜脈血，并加入EDTA-K2進行抗凝。由專業(yè)技術人員嚴格按照說明將標準量的抗體抽取放置于流式管，予以加入100 μl已經混勻的全血并漩渦混勻放置于避光處15 min，將BD溶血素1.5 ml溶入流式管并于避光處孵育10 min直至完全溶透亮，再加入PBS予以洗滌一次并進行離心，將上清液摒棄后再次加入PBS洗滌2次，洗滌完成后加入600μl的1% 固定液，上機待檢。②促炎癥亞群CD16+單核細胞檢測：將抽取的靜脈血加入枸櫞酸鈉抗凝處理放置于流式管，再將50μl全血混入，其中一支試管中加入予以標記的單克隆抗體CD16+、CD14，放置于避光處15 min，再加入1.5 ml BD溶血素加入試管，其余步驟同上，另一支試管溶入全血后則加入IgG予以對照。將兩組流式管放置于分析儀，其檢測結果運用CELLQuest軟件分析。選取各組樣本的有核細胞的散射光和銀光區(qū)信號15萬個通過光散射性質設定單核細胞區(qū)，并對細胞亞群進行分類和測定。③患者肝臟病理病變程度檢測：予以確診為乙型肝炎后肝硬化的患者進行一秒鐘肝臟穿刺，并利用4%甲醛將肝穿組織予以固定，予以石蠟包埋進行病理組織檢測。

1.3 統計學方法應用SPSS 18.0軟件分析數據。計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用F檢驗及LSD-t檢驗；計數資料以百分比(%)表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組外周血T細胞亞群計數情況比較對照組CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+計數明顯高于乙型肝炎組和乙型肝炎后肝硬化組，乙型肝炎組上述亞群計數高于乙型肝炎后肝硬化組(P<0.05)。見表2。

表2 各組外周血T細胞亞群計數比較

2.2 各組促炎癥亞群CD16+單核細胞計數情況比較乙型肝炎后肝硬化組的CD14+CD16+亞群計數比率明顯高于乙型肝炎組和對照組，對照組低于乙型肝炎組(P<0.05)；對于CD14+CD16-亞群計數比率，對照組明顯高于乙型肝炎組、乙型肝炎后肝硬化組，乙型肝炎后肝硬化最低(P<0.05)。見表3。

表3 各組促炎癥亞群CD16+單核細胞計數情況比較 (%)

2.3 乙型肝炎后肝硬化患者外周血T細胞亞群及促炎癥亞群CD16+單核細胞與肝炎病變程度相關性分析乙型肝炎后肝硬化患者的CD14+CD16+/CD14+與肝炎病變程度成正相關關系，而外周血T細胞亞群以及CD14+CD16-/CD14+的表達與患者肝炎病變程度呈負相關(P<0.05)。見表4。

3 討論

由于我國人口基數大，慢性乙型肝炎的患病率較高，約占我國總人數的7%以上，而肝硬化就是及主要并發(fā)癥之一[8]。慢性乙型肝炎后肝硬化的臨床癥狀呈多樣性，輕者可出現輕度的營養(yǎng)不良癥狀，例如貧血、食欲缺乏、腹水、黃疸、全身乏力等癥狀，長期以往，則可能出現門靜脈高壓引起消化道出血，甚至死亡[9]。目前慢性乙型肝炎后肝硬化的治療原則就是預防乙型病毒性肝炎[10]。

目前所知，乙型肝炎病毒(HBV)發(fā)生感染并慢性病變的原因主要是機體免疫調節(jié)降低，特別是細胞免疫功能下降導致機體不能對HBV進行全面的清除[11，12]。而細胞免疫中最重要的免疫調控因子就是T細胞，該細胞的表達可有效反映機體的免疫調節(jié)功能，并分為CD4+和CD8+兩個T細胞亞群[13]。有報道稱，若HBV處于急性感染期可通過激活體內的細胞免疫系統，提高T細胞亞群表達量，并激發(fā)機體產生免疫防御；當HBV處于慢性感染期則可能導致免疫細胞亞群CD3+數量大量減少，從而引起體內免疫效力降低，若CD4+和CD8+細胞亞群表達同時降低，將加重免疫功能降低程度，從而造成肝硬化，甚至肝衰竭[14，15]。而在本研究中，健康對照組的T細胞亞群計數顯著高于CHB及乙型肝炎后肝硬化患者，這也有效的驗證了上述研究。

單核細胞同樣也是免疫系統的不可或缺的一部分，當單核細胞被激活將釋放大量的炎癥細胞因子，并參與真菌、病原體、細菌等所致的病變的免疫防御[16]。有相關研究顯示，單核細胞也具有功能及表達功能各不相同的亞群，其中最常見的就是促炎癥亞群CD16+[17]。CD16+單核細胞可產生大量促炎性因子例如白介素-6(IL-6)或腫瘤壞死因子等對免疫系統造成一定的影響[18]。CD16+單核細胞包括CD14+CD16+亞群和CD14++CD16-亞群[19]。研究證明，促炎癥亞群CD16+可有效維持炎癥因子水平[20]。而在本研究中可知，CHB及慢性乙型肝炎后肝硬化患者促炎癥亞群CD14+CD16+的表達明顯高于正常水平，且隨病情變化逐漸升高，而CD14+CD16-亞群的表達則與之相反，這在一定程度上說明了CD14+CD16+亞群隨病變的程度逐漸上升，有效的促進了肝硬化的產生。

本研究結合乙型肝炎后肝硬化患者的肝臟組織活檢并進行Spearman相關性分析發(fā)現，促炎性細胞CD14++CD16-/CD14+、外周血T細胞亞群的水平與肝炎病變程度呈負相關，而CD14+CD16+/CD14+與肝炎病變程度呈正相關，這有效的說明了外周血T細胞及單核細胞亞群CD16+與乙型肝炎后肝硬化患者的病變過程具有重要聯系，此結論與楚玉蘭[21]、楊喆娟等[22]研究結果大致相同。

綜上所述，慢性乙型肝炎后肝硬化患者單核細胞亞群CD16+和外周血T細胞的表達與患者病情變化具有一定聯系，患者病情程度及免疫狀態(tài)均可通過上述細胞亞群有效的反映出來，在一定程度是上可作為臨床上對患者疾病程度診斷的重要依據。