藥用復合膜中苯二胺含量測定及限度標準研究*

張 璞，吳紅洋，曹 汐，范能全

（重慶市食品藥品檢驗檢測研究院，重慶401121）

20世紀80年代至今，我國開發了多種適宜片劑、膠囊、顆粒劑等藥品的包裝材料，其中藥用復合膜發展迅速，成為固體制劑主要的包裝形式[1-4]。藥用復合膜是通過黏合劑復合而成的多層結構，由塑料薄膜、鋁箔、黏合劑及油墨組成[5]。我國目前用得最多的黏合劑為聚氨酯類黏合劑。聚氨酯由多羥基化合物和芳香族異氰酸酯聚合而成，生產過程中為了獲得更好的黏接性能，通常會適當過量使用芳香族異氰酸酯組分[6]，但過量的芳香族異氰酸酯水解后會釋放產生芳香胺類物質。苯二胺是芳香胺中常見的一種，對人體健康有潛在危害[7]。藥用復合膜包裝藥品時，存在遷移進入藥品而影響藥品安全的風險，是藥用復合膜使用過程中的重大安全隱患。目前，國內外有關苯二胺含量的檢測標準和文獻主要集中在染發劑和化妝品[8-11]，現行國家藥品包裝材料標準未對黏合劑中的初級芳香胺如苯二胺進行控制。本研究中對初級芳香胺中苯二胺的測定方法進行了研究，并對樣品中苯二胺的殘留量進行質量控制。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GC2010 Plus型氣相色譜儀（日本Shimadzu公司）；XPE205型電子天平（MettlerToledo公司，精度為0.01mg）；KQ-500DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為500 W，頻率為40 kHz）。

1.2 試藥

鄰苯二胺（批號為K1827010，純度為99.5%，規格為25 g），對苯二胺（批號為L1829016，純度為99.0%，規格為100 g），間苯二胺（批號為C1906096，純度為99.5%，規格為100 g），均購自Aladdin公司；甲醇為色譜純（安徽時聯特種溶劑股份有限公司，批號為6508JW21）；試驗用水為Milli-Q超純水（美國EMDMillipore公司）；藥用復合膜（A公司，批號分別為20170215，20171220，20170225；B公司，批號分別為20170301-06，20170301-07，20170301-08；C公司，批號分別為170301，170401，170502）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：島津Rtx-5毛細管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25μm）；溫度：進樣口為200℃，氣化室為220℃，FID為300℃；流速：載氣高純度氮氣為0.8 mL/min，氫氣為40mL/min，空氣為400mL/min，尾吹為30mL/min；柱溫：程序升溫，初始溫度為100℃，保持1min，以20℃/min的速率升至200℃，保持0 min，再以20℃/min的速率升至280℃，保持10 min；分流比：5∶1；進樣量：1μL。

2.2 溶液制備

對照品溶液：分別取鄰苯二胺、對苯二胺和間苯二胺各0.25 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并定容至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液2.0 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品中間貯備液。精密量取對照品中間貯備液適量，加甲醇稀釋成每1 mL含1，2，5，10，20，50，100μg的混合對照品溶液。

供試品溶液：取樣品適量，裁取表面積0.03 m2（約1.3 g），剪成3 mm×30 mm大小，置100 mL具塞錐形瓶中，加適量甲醇，超聲（功率為500 W，頻率為40 kHz）提取30 min后取出，冷卻至室溫后轉移至50 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，用0.22μm濾膜過濾，即得。

2.3 方法學考察

專屬性試驗：精密吸取空白溶劑（甲醇）及2.2項下2種溶液各1μL，按擬訂色譜條件進樣檢測，色譜圖見圖1。結果鄰苯二胺、對苯二胺和間苯二胺對照品的理論板數分別為140 022，157 670，190 333。供試品溶液色譜圖中，均未檢出與對照品溶液保留時間相同的色譜峰；空白溶劑色譜圖中，在與對照品溶液相同保留時間處無干擾峰，表明該方法專屬性良好。

線性關系考察：分別取各質量濃度的混合對照品溶液各1μL，注入氣相色譜儀，以進樣質量濃度（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得鄰苯二胺、對苯二胺、間苯二胺的回歸方程，Y鄰=3 026.03X鄰-5 053.46（r=0.999 5，n=7），Y對=2 936.18X對-5 564.23（r=0.999 5，n=7），Y間=2 988.44X間-5 150.78（r=0.999 6，n=7）；鄰苯二胺、對苯二胺、間苯二胺質量濃度分別在0.996 8～99.680 0μg/mL，0.991 4～99.140 0μg/mL，1.003 8～100.380 0μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取2.2項下質量濃度為10μg/mL的對照品溶液適量，按擬訂色譜條件重復進樣6次，記錄峰面積。結果鄰苯二胺、對苯二胺與間苯二胺峰面積的RSD分別為1.68%，1.74%，1.90%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：精密吸取同一對照品溶液，室溫下分別放置0，3，6，8，12 h時按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果鄰苯二胺、對苯二胺與間苯二胺峰面積的RSD分別為1.60%，1.37%，1.97%（n=5），表明對照品溶液在12 h內測定結果穩定。

加樣回收試驗：取已知鄰苯二胺、對苯二胺與間苯二胺含量的樣品9份，各裁取0.03 m2，分別精密加入混合對照品適量，依法制備供試品溶液，進樣測定，記錄峰面積，并計算含量。結果見表1。

檢測限與定量限：取2.2項下混合對照品溶液倍比稀釋，進樣測定，當信噪比（S/N）為3時為檢測限，S/N為10時為定量限。鄰苯二胺、對苯二胺與間苯二胺的檢測出限分別為0.797 4，0.793 1，0.803 0μg/mL，定量限分別為0.996 8，0.991 4，1.003 8μg/mL。

2.4 樣品含量測定

圖1氣相色譜圖

表1加樣回收試驗結果（n=9）

取9批樣品，各2份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，結果所有樣品中均未檢出鄰苯二胺、對苯二胺、間苯二胺。

3 討論

各國藥典均未收載藥用復合膜中苯二胺的測定方法及限度，故無法直接查閱苯二胺限度的相關標準。在制訂本品苯二胺限度標準時，擬根據《藥品與包裝材料相容性研究相關指導原則解讀-試驗結果的評估》[12-13]中建議的采用允許日暴露量（PDE）的評估方法進行評估，并結合每日最大攝入量計算得藥用復合膜中苯二胺的限度。

查閱TOXNET數據庫可知，鄰苯二胺、對苯二胺與間苯二胺的大鼠經口急性毒性的半數致死量（LD50）分別為510，80，280 mg/kg，歐盟原料藥委員會在其發布的《原料藥工廠中清潔驗證指南》中收載了由LD50計算NOEL的公式（NOEL=LD50/2 000）[14]，根據人用藥品注冊技術要求國際協調會（ICH）Q 3C殘留溶劑指導原則中有機溶劑PDE值的計算方法[15]：PDE=NOEL×體質量調整/（F1×F2×F3×F4×F5），式中NOEL為未觀察到作用水平，F1～F5為一系列安全系數值。通過計算得到鄰苯二胺、對苯二胺與間苯二胺的PDE值分別為51，8，28 mg/d。目前，市場上藥用復合膜包裝顆粒劑最多。顆粒劑按最常見規格為每袋10 g，1次10 g，每日3～4次，空袋的質量按1 g計，得到鄰苯二胺、對苯二胺與間苯二胺的限度分別為1.275%，0.2%，0.7%。考慮到藥用復合膜包裝各種制劑的實際情況和臨床上的聯合用藥，為提高用藥安全性，故將苯二胺的限度值暫訂為0.05%，并根據后期毒性研究試驗結果對現暫訂苯二胺濃度限度標準作進一步修訂。

本研究中建立了采用氣相色譜法測定藥用復合膜中苯二胺含量的方法，并制訂了限度標準。按該方法進行測定，結果均符合規定。為更好地控制產品質量，建議在藥用復合膜中增加苯二胺的殘留量測定。