新鮮果蔬農殘快速檢測中常見問題及處理
——以CL-BIII型八通道速測儀為例

罕麗華，俸 麗，李海英，陳加賀，王忠誠*

（1.勐海縣農產品質量安全檢測站，云南勐海666200，2.雙江縣勐庫鎮農業農村服務中心，云南雙江677304）

酶抑制法測定新鮮果蔬農藥殘留情況是目前中國控制初級農產品高毒農藥殘留的一種有效方法，也是目前國內和云南省應用最為廣泛的果蔬農藥殘留快速檢測方法[1]，廣泛用于縣、鄉（鎮）、合作社、超市及蔬菜、水果生產基地和批發市場等區域和場所。農殘速測儀在基層被廣泛應用，然而由于基層檢測人員的學歷、專業、年齡差異較大，且多為兼職，人員調動頻繁，開展檢測工作常面臨各種難題。農藥殘留快速檢測法具有用時短、成本低，對檢測人員要求不高，易于在基層推廣等優點。

速測法對于基層人員快速篩選不合格新鮮農產品，提高農產品質量安全監管水平具有重要作用。現對勐海縣鄉（鎮）級農產品質量安全檢測體系運行8年使用CL-BIII 型八通道農殘速測儀器過程中常見的問題及處理方法進行梳理總結。

1 快速檢測操作及結果判定

1.1 實驗操作步驟

1.2 判定依據

快速檢測儀檢測對象是新鮮蔬菜和水果中有機磷類和氨基甲酸酯類農藥[2]。檢測方法依據GB/T 5009.199-2003《蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速檢測》。判定方法依據酶抑制率測定值小于50%為合格；測定值超過50%為不合格，建議重復測定1 次，若測定值仍然超過50%，則初步判定為不合格樣本，需應用大型儀器設備如氣相色譜、液相色譜等進一步定性定量農藥成分及各組分含量。

2 常見問題及處理

2.1 聯機失敗

窗口提示儀器連機失敗時，應檢查儀器設備通訊串口是否匹配正確。點擊我的電腦右鍵-管理-設備管理器-端口-查看串口是 COM1 口、COM2 口、COM3 口還是COM4 口，再打開檢測平臺查看設置菜單欄-設備設置-參數設置-選擇與電腦端匹配的串口，配對成功按確定后，需重啟檢測平臺。當儀器首次安裝、卸載重新安裝或改變USB 插入端口時聯機失敗現象時有發生，也有少數聯機失敗案例是由于數據串口線的損壞引起的，應購買RS-232 串行9 針型串口重新安裝聯機。

2.2 試劑配制錯誤及保存不當

CL-BIII 型速測儀配套的未拆封檢測試劑盒含有2 袋甲乙粉末，即磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀鹽晶體顆粒。配制時應打開甲乙粉末包裝放進潔凈玻璃燒杯里，加蒸餾水配制成510 ml 的緩沖鹽農殘提取液。若配制溶液時因疏漏，只放了1 包甲試劑粉末或者乙試劑粉末，會導致試劑空白對照測定無效，無法進入下一程序。

快速檢測試劑盒規格為186 批次/盒，內含3 ml/瓶凍干劑狀態的酶 6 份、3 ml/瓶底物 6 份、3 ml/瓶顯色劑1 份、白色晶體提取液2 份。未拆封的試劑應保存于0 ℃以下環境的冷凍箱內，保質期為1 年。配制好的試劑及使用過的試劑，需保存在4 ℃條件下的儲藏箱內。配制好的酶、底物保質期為1 周，提取液為1年，顯色劑應避光保存，且有效期為半年。配制好的試劑應貼上標簽，標簽內容應至少包含試劑名稱、唯一性編號、配制人、配制時間，保質期期限等內容。決不允許使用過期試劑藥品開展檢測工作。

已配制的試劑應按要求保存，從冰箱取出時應冷卻至室溫，或用手溫捂熱，使酶恢復其活性再使用。酶的空白對照測試3 min 吸光度變化差值應在0.3 以上，才可進一步操作。

2.3 檢測盲區

盲區體現在2 個方面，一是易產生假陽性型果蔬對抑制率的干擾[3]，可能會造成結果偏高。二是色素含量較高的果蔬，屏蔽了部分吸光度，可能引起測定結果偏低。為減小誤差，軟件配套特殊果蔬《果蔬農藥殘留比對數據庫》來校準因假陽性及色素吸收光譜帶來的干擾。當檢測如韭菜、蔥、蒜等易產生假陽性的蔬菜，以及番茄、紅莧菜、胡蘿卜等色素含量較高的樣本時應單獨設置檢測通道導入標準對照庫相應對照曲線進行樣本分析。

2.4 儀器調0和調100參考線不到位

儀器調0 和調100 是對儀器透射光通道的調試，先調試透射值0 還是100，其先后順序不影響測定結果。檢測平臺譜圖橫坐標為測定時間，縱坐標為投射比（t）。調0 值時放入黑塊，此時光束無法通過，Y=0 的橫軸上應有紅色參考線通過。調100 值時通道為空，光速應100%通過，Y=100 的橫軸上應有紅色參考線通過，運行30 s 后，點擊調試成功按鈕。在調試0 值和100 值的過程中，看不到參考紅線或紅線低（高）于透射值的情況，應點擊“結束分析”，重啟“開始對照分析”繼續調試，直到透射比Y=0 或Y=100 的橫軸上有紅色直線通過才算成功。若以上操作仍不能完成調試，則可能是儀器內部光源或通道已損壞，需要返廠維修。

2.5 抽（取）樣不規范

抽樣、取樣不規范的細節問題時有發生，抽取的樣本應按《農藥殘留分析樣本的采樣方法》（NY/T 789-2004）要求，填好抽樣單，貼上標簽，標簽應至少包含樣品名稱、編號、抽樣人、時間、地點等內容。當樣本到達實驗室后，應立即開展檢測前處理工作，將樣本去除不可食部分，截成小段后混勻，采用四分法縮分。稱樣時樣本剪成1～2 cm 見方即可，不必剁碎，以免造成難以提取澄清溶解液和引起更多的色素干擾。當提取液較渾濁時應過濾后再測定。

2.6 結果未保存

儀器運行測定環節耗時3 min，測定完畢，檢測平臺會彈出樣本是否合格的窗口，應及時點擊保存按鈕。若直接關閉窗口，將導致數據直接消失，前面的工作都是徒勞。若發現窗口彈出的是不合格樣品的提示，應再重復測定1 次，以避免實驗誤差造成誤判。

2.7 實驗環境條件不滿足要求

勐海縣溫濕度較大，應保證室內檢測環境溫度在（23±5）℃，濕度控制在（65±15）%。配制試劑及樣品前處理應在有洗滌池旁的實驗臺面上進行。測定樣品時應將檢測池蓋蓋緊。用完的比色皿應及時用自來水清洗干凈，再用蒸餾水清洗，倒置在濾紙上，待自然風干后及時放進比色皿盒子里。實驗完畢，應做好使用儀器情況登記，及時清洗所用器皿，整理實驗臺面，保證實驗室干凈整潔有序。實驗室還應有關水、關電、禁止吸煙提示及無關人員禁止入內的提醒標志。

2.8 檔案不完整

檔案工作是檢測工作的一項重要內容，檢測流水單或檢測統計單應及時打印并跟隨對應抽樣單歸檔。檔案還應含儀器使用說明書、實驗操作規程、檢測工作年終總結、年初目標責任計劃書、現場抽樣及檢測圖片、開展工作的簡報等內容。

2.9 其他問題

實驗的開展應至少有2 名檢測人員互相監督和配合完成，嚴格按照操作規程的步驟和時間規定進行，不能急于求成，更不能減少步驟。

為減小誤差，樣品應做平行對照，并規定第1 個樣品和每10 個樣品間設置平行對照。

加入底物后，應迅速混勻，立即測試。

移液槍用完要將量程調到最大值，用畢應放置在移液槍架上，不能平放在實驗桌面上，以免提取液回流造成槍體污染。調量程時應遵循數值從大到小的原則。一次性槍頭使用后應及時丟棄，避免樣本交叉污染。