鹿茸菇生態學特性與液體菌種配方的優化研究

張凌姍

鹿茸菇生態學特性與液體菌種配方的優化研究

張凌姍

（古田縣食用菌研發中心，福建 古田 352200）

以鹿茸菇菌絲為實驗材料，以菌絲生長速度和菌絲干重為主要指標，用平板培養法和液體搖瓶培養法，觀測其不同溫度、培養基pH、碳源、氮源條件下的菌絲生長情況，并優化液體菌種配方。試驗結果為：適合鹿茸菇生長的最佳碳源為淀粉，最佳氮源為酵母粉，菌絲生長的最適溫度為 24 ℃，最適pH為5.6。液體菌種的最優碳源氮源配置培養基為面粉和蛋白胨，25 ℃、120 rpm振蕩培養10天后的菌絲干重0.820 g/mL。

鹿茸菇；液體菌種；培養基配方；菌絲干重

鹿茸菇（）又稱荷葉離褶傘，在我國云南又稱為冷香菌、一窩羊、北風菌等，屬擔子菌亞門，菌傘目，白蘑科，離傘菌屬[1]。研究表明，鹿茸菇子實體中粗蛋白、氨基酸含量較高，脂肪含量較低，還含有對人體有益的微量元素鋅、銅、硒和大量維生素，具有較高的營養價值。據現代科學研究結果，鹿茸菇含有β-葡聚糖，長期食用有抗腫瘤的功效；其還具有降血壓、降膽固醇、抑制糖尿病和抗過敏等藥用功效[2]。有關鹿茸菇的研究目前主要集中在栽培技術上，對培養條件研究多不系統，且缺少液體菌種培養方面的報道。本文對鹿茸菇生態學特性和液體菌種配方予以研究報道。

1 試驗材料

1.1 供試菌株

鹿茸菇1號，編號LR01，保藏于古田縣食用菌研發中心。

1.2 培養基配方

PDB培養基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，水1 000 mL。PSB培養基：馬鈴薯200 g，蔗糖20 g，水1 000 mL。PMB培養基：馬鈴薯200 g，麥芽糖20 g，水1 000 mL。

基礎培養基：蛋白胨8 g，葡萄糖20 g，KH2PO41 g，MgSO40.5 g，維生素B110 mg，瓊脂20 g、蒸餾水 1 000 mL。基礎液體培養基：蛋白胨8 g，葡萄糖20 g，KH2PO41 g，MgSO40.5 g，維生素B110 mg，蒸餾水1 000 mL。

2 試驗方法

2.1 生態學特性研究

（1）溫度。將鹿茸菇菌株接種到PDA平板培養基上，于24 ℃下培養14天后，在超凈工作臺上用經過火焰灼燒滅菌并冷卻的直徑為6 mm的打孔器打取菌落圓片，將菌落圓片接種到直徑9 cm的PDA平板上，置于24 ℃恒溫箱中避光倒置培養。5天后，沿菌落邊緣劃線，然后分別置于4 ℃、20 ℃、22 ℃、24 ℃、26 ℃、28 ℃、30 ℃、32 ℃、34 ℃恒溫培養箱內培養，每溫度設3個重復。7天后采用劃“十”字法測量標記線到菌落邊緣的長度，觀察菌絲長勢，計算菌絲生長速度[3]，菌絲生長速度=/7。

（2）pH。用1 moL/L NaOH和1 moL/L HCl調節PDA培養基pH為4.6，5.6，6.6，7.6，8.6，9.6，10.6，每pH設3個重復。按2.1（1）方法定量接種后，置于24 ℃恒溫培養箱中培養。14天后采用劃“十”字法測量菌落直徑，觀察菌絲長勢，計算菌絲生長速度[4]，菌絲生長速度=（－6）/（2×14）。

（3）碳源。以基礎培養基為對照，分別以蔗糖、麥芽糖、淀粉、木糖代替基礎培養基中的葡萄糖，共制備5種不同碳源的培養基。按2.1（1）方法定量接種于各碳源平板培養基上，置于24 ℃恒溫培養箱中培養，每種碳源設3個重復。14天后采用劃“十”字法測量菌落直徑，觀察菌絲長勢，按2.1（2）方法計算菌絲長速。

（4）氮源。以基礎培養基為對照，分別以酵母粉、硫酸銨、硝酸鉀、尿素代替基礎培養基中的蛋白胨，共制備5種不同氮源的培養基。按2.1（1）方法定量接種于各氮源培養基上，置于24 ℃恒溫培養箱中培養，每種氮源設3個重復。14天后采用劃“十”字法測量菌落直徑，觀察菌絲長勢，按2.1（2）計算菌絲長速。

表1 不同溫度下的菌絲生長情況

注：菌絲生長速度后不同大小寫字母分別表示差異極顯著和顯著。表2同。

2.2 液體菌種配方優化試驗

（1）碳源。以基礎液體培養基為對照，分別用蔗糖、麥芽糖、淀粉、甘露醇、玉米粉、面粉代替其中的葡萄糖，配制成7種不同碳源的液體培養基。采用121 ℃高壓滅菌30 min。將鹿茸菇菌種接在PDA平板上培養10天后，用經灼燒滅菌并冷卻的直徑為6 mm打孔器打取菌落圓片接種到上述7個處理液體培養基上，每培養基接種3片，每處理設4個重復。接種后置于120 r/min、25 ℃搖床條件下培養10天。培養后的菌液采取真空抽濾法，將獲得的菌絲置于55 ℃下干燥至恒重，測量菌絲體質量[5-7]。

（2）氮源。以基礎液體培養基為對照組，分別以黃豆粉、酵母粉、酒石酸銨、硫酸銨、硝酸銨代替蛋白胨，配制成6種不同氮源的液體培養基。方法步驟同2.2（1）。

（3）以上述方法選出的最佳碳源和氮源，配制成優化的液體培養基（簡稱BP培養基），同時配置PDB、PSB、PMB培養基為對照。其他步驟同2.2（1）。

3 結果與分析

3.1 生態學特性表現

（1）溫度與菌絲生長的關系。鹿茸菇在20～32 ℃下均可生長，且菌絲生長速度隨著溫度升高呈現出先升高后降低的趨勢，在22～28 ℃條件下菌絲生長較快速，長勢濃密，最適溫度為24 ℃；在4 ℃下菌絲停止生長，接種塊菌絲潔白，放置12天后轉入24 ℃可恢復生長；在34 ℃下菌絲也不生長，接種塊菌絲顏色變黃，轉入24 ℃后不能恢復生長（表1）。

（2）pH與菌絲生長的關系。鹿茸菇菌絲在pH 4.6～10.6下均可生長，其中在pH 5.6～8.6范圍內菌絲長速差異不顯著，以pH 5.6～6.6的菌絲生長快速、濃密（表2）。表明該菌適于在偏酸性環境下生長。

（3）碳源與菌絲生長的關系。鹿茸菇對供試5種碳源均能利用，且均表現菌絲稠密、潔白，但存在一定的差異（表3）。其中以淀粉為碳源的菌絲生長速度快，平均長速為1.81 mm/d；以木糖為碳源的生長慢，平均長速為0.73 mm/d；以淀粉和麥芽糖為碳源的，相互間差異未達極顯著水平。

表2 不同pH下的菌絲生長情況

表3 不同碳源和氮源下的菌絲生長情況

注：菌絲長勢，所有碳源培養基均為稠密、潔白；氮源培養基中，蛋白胨、酵母粉菌絲稠密潔白，硝酸鉀菌絲稀疏、透明，硫酸銨菌絲白色、幾乎不生長，尿素菌絲枯黃、不生長。

表4 不同碳源、氮源下液體菌種的菌絲干重

表5 不同液體培養基下的菌絲生長情況

（4）氮源與菌絲生長的關系。鹿茸菇對除尿素、硫酸銨外的其他3種供試氮源均能利用，但相互間存在顯著性差異（表3）。其中，以酵母粉為氮源菌絲長速最快，為1.75 mm/d，且長勢好，表現稠密、潔白；以蛋白胨為氮源的對照，菌絲長速雖稍慢于以硝酸鉀為氮源的處理，但長勢較好，表現稠密、潔白；以尿素和硫酸銨為氮源的處理菌絲幾乎不生長。

3.2 液體菌種培養基配方優化試驗結果

（1）碳源。如表4所示，以面粉為碳源時，菌絲體的干重大，菌球數量多、分布密實、大小均勻；以蔗糖、麥芽糖、葡萄糖為碳源的處理，菌球數量均較多，菌絲干重相互間差異不顯著。以玉米粉為碳源的，由于玉米粉本身有一定重量，所以菌絲干重較重而存在一定的誤差。因此，宜選擇面粉為鹿茸菇液體菌種配方的較佳碳源。

（2）氮源。以蛋白胨為氮源培養的菌絲干重大，為0.230 g/L，但其與以酵母粉為氮源的處理間差異不顯著。以黃豆粉為氮源的處理菌絲干重高達0.408 g/L，但其中都是黃豆粉，并無菌絲（表4）。因此，宜選擇蛋白胨為鹿茸菇液體菌種配方的較佳氮源。

（3）不同類型液體培養基的菌絲生長情況。優化的BP培養基中的菌絲量極顯著大于PSB、PDB、PMB培養基（表5），干重為0.820 g/L，菌球密布，大小均勻。適合用于鹿茸菇液體菌種生產。

4 結論與討論

鹿茸菇是一種新興的食用菌品類，了解其生態學特性是人工栽培的前提。鹿茸菇固體菌種萌發慢，容易被污染，液體菌種能夠克服這一缺點，因此，液體菌種優化配方對人工栽培具有重要參考價值。本試驗對鹿茸菇生態學特性的研究結果顯示，在PDA培養基上，最適培養條件為溫度24 ℃、pH 5.6；在固體培養基上的最適碳源為淀粉，最適氮源為酵母粉。對其液體菌種配方優化的研究結果，最優碳源、氮源分別為面粉、蛋白胨，培養出的液體菌種表現分散性好、菌球多、大小均勻。

本試驗在研究鹿茸菇生態學特性和優化液體菌種配方的過程中，僅進行了實驗室條件下和生產中一些常見原料的單因素試驗，

對于不同碳源、氮源無機鹽的多因素多水平研究還需做更多的探索。此外，本試驗液體菌種配方優化僅在搖床培養條件下進行，是否適用于大規模的發酵罐培養也有待進一步試驗論證。

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張凌姍（1991—），女，本科，助理工程師，主要從事食用菌栽培技術研究。E-mail：ywl123789@qq.com。

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2095-0934（2020）06-425-04