血清中microRNA-106b對宮頸癌患者的早期診斷及預后預測價值

高紅敏，楊紅英，劉 鑫

(1.西安市第四醫院婦產科，西安 710004; 2.西安市第九醫院婦產科，西安 710000;3.西安大興醫院婦產科,西安 710014)

宮頸癌(cervical cancer, CC)是發病率和死亡率均較高的婦科惡性腫瘤[1]。近年來，年輕女性罹患CC 的人數呈逐年攀升趨勢，臨床上早期CC主要以手術為主，放化療為輔，晚期CC 以放療為主[2-3]。microRNA 是一類長約19～25 nt 的內源小分子非編碼RNA，microRNA-106b 在甲狀腺癌[4]、視網膜母細胞瘤[5]、胃癌[6]和腎細胞癌[7]等組織中存在異常表達，目前關于microRNA-106b 與CC 的關聯報道鮮有，本研究擬分析microRNA-106b 在CC 早期診斷中的價值，旨在為CC 患者的臨床診治提供參考依據，現具體報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2017年9月～2019年11月西安市第四醫院婦產科收治的經病理學確診的CC 患者150 例為研究對象，患者均為女性，年齡23 ～62 歲，平均年齡41.5±3.2 歲；病理類型均為浸潤型鱗狀細胞癌。手術治療中留取CC 組織和癌旁正常組織(距病灶2 cm)。本研究經由我院倫理委員會批準。

納入標準：(1) 根據國際癌癥協會推薦的TBS系統及病理性診斷為宮頸鱗狀細胞癌者；(2) 患者知情且自愿參加本研究。排除標準：(1) 伴有其他惡性腫瘤者；(2) 妊娠期及哺乳期女性。

1.2 儀器與試劑 TRIzol Reagent 購自美國 Invitrogen 公司，PCR 引物的合成和設計由生工生物工程(上海)股份有限公司完成，PCR 儀為ABI Prism 7900HT 型，Ambion mirVanaTM miRNA 標記試劑盒購自Scien Cell Research Laboratories。

1.3 方法 將組織放入1.5 ml Eppendorf 管中用液氮保存，從液氮中取出Eppendorf 管，使用BioPluverizerTM 冰凍粉碎組織，加入l ml Trizol混勻后，使用MiniBead-Beater-16 勻漿后提取MicroRNA，用1 ml 75ml/dl 乙醇(以焦碳酸二乙酯水配制)洗滌RNA 1次，4℃下離心5 min，移去乙醇，室溫下干燥 5 min，55℃～60 ℃條件下溶于焦碳酸二乙酯處理過的無菌水中，取總RNA 2 μl，紫外分光光度計測定microRNA純度(A260nm/A280nm＞1.8)，并計算其含量。其余總RNA 添加多聚腺苷酸后，再通過Ambion mirVanaTM miRNA 標記試劑盒進行熒光PCR 檢測。

1.4 統計學分析 采用SPSS 20.0 統計學軟件進行數據分析，計量資料采用均值±標準差(±s)表示，行t 檢驗，計數資料采用n(%)表示，行χ2檢驗。P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 microRNA-106b 在CC 組織和癌旁正常組織中的相對表達量 探究microRNA-106b 在CC組織和癌旁正常組織中的相對表達量，結果表明microRNA-106b 在CC 組織中的相對表達量為0.075，顯著高于癌旁正常組織中的相對表達量0.003(P=0.0186)。

2.2 不同水平microRNA-106b 與CC 患者臨床病理特征間的關系 見表1。根據2.1 的結果，microRNA-106b 高表達79 例，microRNA-106b 低表達71 例。不同水平microRNA-106b 與CC 患者的年齡、腫瘤直徑、FIGO 分期無關，與淋巴結轉移和分化程度有密切關系(P ＜0.05)。

表1 microRNA-106b 與CC 患者臨床病理特征間的關系[n(%)]

2.3 不同水平microRNA-106b 對CC 患者總體生存率的影響 探究不同水平microRNA-106b 對CC患者總體生存率(overall survival, OS)的影響，結果見圖1。microRNA-106b 低表達組患者的中位生存時間為70 個月，而microRNA-106b 高表達組患者的中位生存時間為54 個月。microRNA-106b 高表達組患者的OS 顯著低于microRNA-106b 低表達組，其差異具有統計學意義(P=0.036)。

圖1 不同水平microRNA-106b 對CC 患者總生存率的影響

3 討論

近年來，伴隨著我國社會經濟的飛速發展，加之人們生活方式的改變，惡性腫瘤的發病率和死亡率不斷攀升，嚴重威脅著人們的健康。CC 是一種病毒感染性疾病[8]，發病率僅次于乳腺癌，是第二大婦科惡性腫瘤。目前臨床上治療失敗的原因主要是局部復發和遠處轉移，CC 的發生、發展是多基因參與、涉及多步驟的復雜生物學過程[9-10]。microRNA 是一類長約19～25 nt 的內源小分子非編碼RNA，microRNA-106b 在甲狀腺癌、視網膜母細胞瘤、胃癌和腎細胞癌等組織中存在異常表達，其在肝細胞癌和喉癌中呈顯著高表達，發揮促癌作用；而在膠質 瘤和胃癌中呈顯著低表達。目前關于microRNA-106b 與CC的關聯研究相對較少，本研究擬分析microRNA-106b 在CC 中的表達水平及不同水平microRNA-106b 與CC 患者臨床病理特征間的關系，旨在為CC 的臨床診斷提供合理參考。

結果顯示，相較于癌旁正常組織，microRNA-106b 在CC 中呈顯著高表達，提示microRNA-106b 是CC 潛在的生物學標記物。高、低水平的microRNA-106b與CC患者的淋巴結轉移和分化程度有密切關系。此外，高水平的microRNA-106bCC 患者的OS 較低，反之亦然，提示microRNA-106b 可預測CC 患者的預后。下一階段本研究組將繼續深入開展microRNA-106b 在CC 中作用機制的有關研究。

綜上所述，microRNA-106b 與CC 的發生、發展有密切關系，其對CC 的診治及預后有關鍵作用。