唾液α-突觸核蛋白(SNCA)與嗅覺評估在帕金森病早期篩查中的應用研究

尚天明，畢開湘(寶雞市康復醫院精神科, 陜西寶雞 721000)

帕金森病(parkinson’s disease, PD)是目前國內最常見的椎體外系疾病，研究發現PD 的患病率會隨年齡的增長而升高[1]，并且超過90%的PD 患者病情進展較慢。臨床上常用左旋多巴胺類藥物進行治療，但近年來有報道指出長期應用左旋多巴胺類藥物不僅副作用顯著，而且可發生藥效衰減效應，最終可使患者出現肌強直和全身僵硬的臨床表現[2-3]。早期識別并進行單胺氧化酶抑制劑干預治療可有效推遲左旋多巴胺的應用時間，部分患者還可達到阻斷病情進展的效果[4]。因此PD 的早期識別對指導臨床具有重要作用。α-突觸核蛋白(α-synuclein, SNCA)是路易氏小體的主要蛋白質成分，既往有報道顯示SNCA突變與PD 關系密切[5-6]，但較少以唾液為檢測標本。另外，嗅覺缺陷是PD 早期非運動特征表現。因而，本研究探討嗅覺評估和唾液SNCA 在PD 早期篩查中的作用。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取我院2018年2月～2020年2月共45 例PD 患者作為觀察組，另選取同期45 例體檢健康者為對照組。其中觀察組中男性29例，女性16例；平均年齡58.84±13.36 歲；體重指數22.78±1.65kg/m2。對照組中男性32 例，女性13 例；平均年齡58.22±14.09 歲；體重指數22.05±1.71 kg/m2。根據改良H-Y 臨床分級量表[9]，將觀察組45 例PD 患者分為早期(1，2 級)、中期(3 級)和晚期(4，5 級)。兩組的一般資料差異無統計學意義 (P＞0.05)，具有可比性。本研究經由我院倫理委員會批準通過，所有受試者自愿參加且均簽署知情同意書。

入選標準：①參照國際運動障礙疾病協會帕金森病診斷新標準(2015年版)診斷為PD 者[7]；②病例資料完整且自愿參加本研究者；③無嚴重心、肺等基礎性疾病。

排除標準：①精神障礙、重度抑郁、先天性智力發育不全者；②視力、聽力障礙、鼻和鼻竇病變者；③近期急性上呼吸道感染者。

1.2 儀器與試劑 采用酶聯免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)檢測SNCA 蛋白水平，檢測試劑盒由南京卡米洛生物工程有限公司提供。

1.3 方法 嗅覺評估方法：采用嗅覺評估工具Sniffin’Sticks 方法中的16 種氣味識別(SS-16)進行評估。具體如下：選取醬油、雞精、橙子、大蒜、米飯、香蕉、檸檬、綠茶、咖啡、巧克力、桂皮、玫瑰、草莓、黃油、香水及海藻16 種常見氣味。檢測時讓受試者充分聞嗅后記錄識別結果，每間隔4周進行1 次檢測，共3 次。計分0～16 分，以16 種氣味識別(SS-16)評分≤10 分為有嗅覺障礙[8]。

唾液SNCA 的檢測方法：檢測前受試者禁食2h，清晨用生理鹽水漱口，刺激唾液分泌，收集3ml 唾液并置于離心管中，將唾液標本離心除菌后冷凍保存。采用ELISA 法檢測SNCA 的表達水平，具體操作按試劑盒說明書嚴格進行。

1.4 統計學分析 選用SPSS22.0 統計學軟件處理和分析數據。對于符合正態分布的計量資料以均數±標準差(±s)表示，對于不符合正態分布的計量資料以M(P25，P75)表示。多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK 檢驗。計數資料以(n/%)表示，相關性分析采用pearson 或Spearman 秩相關分析，P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組SS-16 評分、嗅覺障礙率和唾液SNCA的比較 觀察組嗅覺障礙共34 例，嗅覺障礙率為75.56%。對照組嗅覺障礙11 例，嗅覺障礙率為24.44%。兩組嗅覺障礙率差異具有統計學意義(χ2=23.511，P＜0.05)。 兩組唾液SNCA（1 272.13±38.52pg/ml vs 1 235.16±23.46pg/ml）和SS-16 評分水平（8.51±3.79 分 vs 11.04±3.96 分）差異均具有統計學意義（t=5.499，3.096，P＜0.05）。

2.2 不同程度PD 患者SS-16 評分和唾液SNCA 的比較 見表1。不同程度PD 患者的SS-16 評分和唾液SNCA 差異具有統計學意義(H=7.456，F=5.130，P＜0.05)。經Spearman 秩相關分析，PD 病情發展程度與SS-16 評分呈顯著負相關關系(r=-0.351，P=0.000)，與唾液SNCA 呈顯著正相關關系(r=0.426，P=0.000)。

表1 不同程度PD 患者SS-16 評分和唾液SNCA 的比較

圖1 SS-16 評分和唾液SNCA 判斷早期PD 的ROC 分析

2.3 SS-16 評分與唾液SNCA 在PD 早篩中的價值以SS-16 評分和唾液SNCA 為檢驗變量，以是否為早期PD 為狀態變量繪制ROC 曲線，見圖1。結果顯示SS-16 評分和唾液SNCA 對PD 的早期判斷具有一定的應用價值(P＜0.05)。進一步對SS-16 評分和唾液SNCA 進行二分類Logistic 回歸分析，見表2。ROC 分析結果發現兩者聯合預測概率判斷早期PD 的AUC 為0.807，顯著高于SS-16 評分和唾液SNCA 單項檢測的AUC 值。

表2 SS-16 評分和唾液SNCA 判斷早期PD 的Logistic 回歸分析

3 討論

PD 是病程較長的神經退行性疾病，PD 的早期識別和防治對改善患者預后具有重要意義。已有研究證實PD 存在較長的前驅階段，此階段因神經細胞變性逆行，導致鼻腔上皮和嗅球細胞功能異常[10]，患者臨床表現為嗅覺障礙等非運動癥狀。羅懿等[11]報道嗅覺障礙可被認為是PD 的早期預警篩查項目。另外，周立等[12]還提出嗅覺障礙不僅是PD 的首發癥狀，其嚴重程度與PD 病情呈顯著相關性，此與本文結果一致。本文探討了SS-16 評分對PD 診斷的臨床價值，結果顯示其判斷PD 風險的AUC 為0.664，提示SS-16 可作為早期PD 的輔助篩查項目，但單項檢測的價值有限。PD 患者嗅覺障礙僅反映嗅腦病理改變，而與黑質多巴胺神經元功能損傷無關[13]，這是造成SS-16 評分診斷早期PD 特異度較低的重要原因。

對于處于非運動癥狀的PD 患者，大多已伴有臨床生物學標記物的異常，因而有學者認為聯合檢測非運動癥狀和生物標記物有助于提高PD 陽性檢出率[14]。由SNCA 基因編碼組成的路易小體是PD重要的病理標記物，SNCA 不僅可通過激活小膠質細胞，成為PD 的始發因子，還可能成為SNCA 基因變異和PD 易感性的誘因[15]。既往有報道顯示腦脊液SNCA 與Hoehn-Yahr 分級相關，對PD 和阿爾茨海默病鑒別診斷也有輔助作用，但臨床也有研究認為腦脊液SNCA 在健康志愿者與PD 患者間無顯著差異[16-17]，且受標本取材限制，腦脊液SNCA 檢測在臨床應用難以推廣。而外周血作為目前臨床實驗室常用檢測標本，因其易受紅細胞污染，PD 患者外周血SNCA 仍存在爭議[18]。本研究選用唾液作為實驗標本，不僅因唾液標本具有無創、簡便易收集特點，且最近有研究證明分泌唾液的下頜下腺是PD早期的受累靶器官[19-20]。本研究采用ELISA 法進行檢測，結果發現唾液SNCA 與PD 病情程度呈顯著相關性，且唾液SNCA 診斷PD 的AUC 為0.716，提示唾液SNCA 有可能成為PD 早期篩查的潛在生物標記物。

本研究聯合應用SS-16 評分和唾液SNCA，結果顯示其AUC 達0.807，顯著高于SS-16 評分與唾液SNCA 單項檢測的AUC 值，說明生物標記物與非運動癥狀聯合篩查模式有助于提高PD 的敏感度和特異度。