ROC曲線設置流式細胞術檢測HLA-B27的臨界值在強直性脊柱炎診斷和鑒別診斷中的應用

張 靜 ，董松武 ，孫 峰

(亳州市人民醫院a.檢驗科；b.心內科，安徽亳州236800)

BREWERTON 等人[1]于1937年提出HLA-B27 抗原的表達與強直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）的發病高度相關，90%以上AS 患者攜帶HLA-B27 基因，且不同種族的人群表達陽性率不同，HLA-B27 的檢測對于沒有明顯癥狀的早期AS的輔助診斷有較高的應用價值。目前我院使用BD公司的流式細胞儀檢測HLA-B27，其診斷臨界點是以白種人的表達水平建立的，國內較少報道以國人的表達水平建立的臨界值，本文將經臨床確診的AS 患者作為研究組，與AS 患者癥狀相近的類風濕關節炎（Rheumatoid arthritis，RA）患者、骨性關節炎患者（osteoarthritis，OA）、腰椎間盤突出(Lumbar Intervertebral disc Herniation, LIDH)、痛風（gout）患者和健康體檢者(healthy controls，HC)合并作為對照組，對其進行HLA-B27 的熒光值檢測，分析探討流式細胞術（flow cytometer，FCM）檢測HLA-B27 臨界值的設置及對診斷和鑒別診斷AS 的影響。

1 材料與方法

1.1 研究對象 本院 2016年 1月～2019年7月收治的符合診斷要求[2]的AS 患者40 例作為研究組，男性32 例，女性8 例，年齡15 ～72 歲；RA 患者40例，男性4 例，女性36 例，年齡32 ～73 歲；OA 患者22 例，男性3 例，女性19 例，年齡47 ～79 歲；LIDH 等腰痛病患者26 例，男性11 例，女性15 例，年齡26 ～78 歲；痛風患者31 例，男性29 例，女性2 例，年齡18 ～75 歲；健康體檢者50 例，男性22 例，女性28 例，年齡13 ～74 歲，此五組合并為對照組。

1.2 儀器和試劑 儀器為BD FACSCalibur 雙激光四色分選流式細胞儀，試劑盒為HLA-B27 檢測試劑盒（BD 公司)。

1.3 方法 所有研究對象均空腹抽取2ml 靜脈血，乙二胺四乙酸二鉀抗凝，由檢驗師按照規定操作程序進行檢測并記錄結果。

1.4 統計學分析 應用SPSS17.0 統計軟件進行數據處理，正態分布檢驗采用SW 檢驗，符合正態分布的數據以均值±標準差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，率的比較采用卡方檢驗，采用ROC 曲線分析檢測指標的診斷效能，以P ＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組間HLA-B27的檢測熒光值比較 見表1。AS 組和其余各組進行單因素方差分析，各組熒光值比較差異具有統計學意義（F=40.45，P ＜0.05），進一步行兩兩比較，AS 患者與RA 組、OA 組、LIDH 組和痛風組比較熒光值差異均具有統計學意義（均P ＜0.05），其余各組之間兩兩比較差異均無統計學意義（P ＞0.05）。

表1 各組檢測HLA-B27 熒光值比較

2.2 ROC 曲線分析 見圖1。以AS 為研究組，所有非AS 患者合并為對照組，以臨床診斷為金標準，做ROC 曲線，評價HLA-B27 診斷AS 的效能，AUC 為0.92。根據Youden 指數確定最佳診斷臨界點為151.50。

圖1 流式細胞術檢測HLA-B27 的ROC 曲線

2.3 不同臨界值診斷AS 的效能 原裝試劑盒設定熒光強度界值為146，根據Youden 指數確定的診斷臨界點為151.50，以兩個不同臨界值標準計算出的診斷效能詳，見表2。

表2 不同臨界值診斷AS 的效能

3 討論

AS 是一種主要累及骶髂關節和脊柱關節、主要與遺傳因素有關的病因未明的自身免疫性慢性炎癥疾病，目前AS 的診斷標準[2]是以臨床表現和影像學檢查為主要依據，該病早期癥狀與LIDH，RA和OA 等相似，有一定的漏診誤診率，明確診斷時患者病程往往已進入中期階段[3]，延誤早期治療，故而對疑為AS 的患者進行HLA-B27 抗原檢測是很有必要的。

我院檢測HLA-B27 采用美國BD 公司的流式細胞儀及配套試劑盒，FCM 檢測HLA-B27 抗原的熒光強度與T 淋巴細胞表面HLA-B27 表達水平有關，其表達存在人種和個體差異，而且HLA-B27具有高度多態性，亞型眾多，并非所有亞型都與AS 相關[4]，不同地區、民族和人種之間HLA-B27基因亞型分布有差異[5]。我國是一個多民族國家，不同民族間HLA-B27 的基因型與AS 的相關性也有差異，陳亞豪等[6-7]研究表明漢族人和維吾爾族人診斷AS 的臨界值有差距，蒙古族和漢族AS 的陽性檢出率也不同[8]，因此進口試劑盒所設置的臨界值是否對我國AS 的診斷和鑒別診斷有最高的診斷效率有待斟酌。本研究發現，AS 組的熒光檢測值、陽性率和所有非AS 組比較差異均具有統計學意義（P＜0.05），用試劑盒設定的臨界值146 作為判斷標準，敏感度為90.00%，特異度為91.72%，誤診率為8.28%，漏診率為10.00%，Youden 指數為0.82，ROC 曲線下面積為0.92；根據Youden 指數確定最佳診斷臨界點為151.50，根據新的臨界點診斷AS的敏感度為90.00%，特異度為93.49%，漏診率為10.00%，誤診率為6.51%，Youden 指數為0.83。應用新的臨界值診斷的敏感度不變，特異度有所提高，但兩者較為接近，差異無統計學意義，說明試劑盒所設定的界值較為可靠，和肖琳琳等[9]人研究結果不一致，肖琳琳[9]等人研究認為試劑盒設定的臨界值對于診斷研究組的假陰性率過高，原設定臨界值對于在國內的應用價值有待斟酌。在本研究中，由于AS 起病隱匿，采用病例均為經過臨床確診的住院病人，有大量AS 病人是門診病人，或病例資料不完善而無法采用，是否會導致數據有所偏頗？后續我們會加大研究樣本量，加大和風濕免疫科合作，將反應性關節炎、銀屑病關節炎等與AS 癥狀類似的其他脊柱關節病納入非AS 對照組做更為精確的驗證。臨床上早期診斷AS 可以降低致殘率，在本研究中根據新界值在敏感度不變的前提下提高特異度，對于臨床更有指導意義。目前的診斷標準主要根據臨床癥狀和影像學檢查結果，巫翠萍等[10]人研究確診的AS 患者和可疑AS 患者HLA-B27 檢測結果與 X 線結果比較，HLA-B27 檢測結果與X光片在AS 組時差異無統計學意義，但可疑AS 組HLA-B27 的陽性率明顯高于X 線結果，認為在AS的早期診斷中，檢測HLA-B27 有著重要的價值，因此若患者有腰骶疼痛等癥狀，影像學檢查陰性，而HLA-B27 陽性，在排除其他引起腰骶部疼痛疾病的情況下，需考慮AS 早期。

我國是一個多民族國家，不同民族遺傳背景、地區分布、生活習慣不同，在后續研究中我們會加大樣本量，將更多的與AS 癥狀相近的其他脊柱關節疾病組納入研究，做更為精確的分析，HLA-B27在疑似AS 患者的早期篩查中有不可替代的作用，應引起醫患高度重視。