靜脈血真空采血管預稀釋法校正EDTA依賴性假性血小板減少的效果探討

汪學耀，荊成寶，張 倩，王 禪

（1.安康市漢濱區第三人民醫院，陜西安康 725018；2.安康市中心醫院，陜西安康 725000；3.安康市中醫醫院，陜西安康 725000）

EDTA 依賴性假性血小板減少癥（EDTA-PTCP）是指臨床檢測中血樣的血小板數目原本正常，但其檢測結果卻顯示假性減少的現象，其原因是血樣應用EDTA-K2來作為抗凝劑抗凝而導致血小板聚集，使血液細胞分析儀不能正確識別血小板，在假性血小板減少癥中占比高達九成以上[1]。臨床工作中若不能及時鑒別EDTA-PTCP 而采取不必要的醫療措施，不但增加患者痛苦，還會引起醫療糾紛。

目前校正EDTA-PTCP 的方法有：稀釋模式法、更換抗凝劑法、微量離心法、藥物穩定法[2]，但稀釋模式法、微量離心法和藥物穩定法在實際應用中存在著操作不便，更換抗凝劑法雖然操作簡單但是存在校正不徹底的缺陷[3]。本次實驗采用由筆者發明的預稀釋真空采血管（實用新型名稱：預稀釋真空采血管專利號ZL 2017 20335701.X）。此方法是建立在稀釋模式法的基礎上，但又解決原稀釋模式法采集末梢血不方便、標本不可靠，操作環節多、血小板計數穩定時間短、計數不可靠等問題，可操作性強，便于在臨床上推廣。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2015年3月～2018年12月漢濱區第三人民醫院門診及住院確診的假性血小板減小癥患者（PTCP）共60 例，依據實驗室復檢標準篩選出47 例患者作為研究對象，其中男性22 例,女性25 例,年齡9～86 歲,平均年齡57±20.34 歲。

1.2 儀器與試劑 深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司BC-5300 血液細胞分析儀及原廠配套試劑，三力醫用科技發展有限公司EDTA-K2抗凝管，日本奧林巴斯BX41 雙目顯微鏡，重慶天海醫療設備有限公司骨髓圖像分析管理系統，珠海貝索生物技術有限公司瑞氏-吉姆薩復合染色液。

1.3 方法 采集靜脈血2ml到EDTA-K2抗凝管中，倒置放正混勻8 次后，使用全自動血細胞分析儀BC-5300 在全血模式下進行PLT 檢測。采靜脈血1 ml 于預稀釋真空采血管（內含稀釋倍數為10 倍的氯化鈉稀釋液）[4]中,倒置放正混勻8 次后，使用全自動血細胞分析儀DxH800 在稀釋模式下進行PLT檢測。分別記錄患者1，2和3 h的PLT檢測數據。

1.4 統計學分析 統計分析軟件使用SPSS19.0，計量資料用均數±標準差(±s)及差值的均數±差值的標準差(±Sd)表示，采用方差分析及配對t檢驗對數據進行分析，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同采血管各時間組PLT 計數比較 見表1。47 例EDTA-PTCP 患者不同采血管各時間PLT 計數值的方差分析結果差異有統計學意義（F=4.79,P=0.01）；而靜脈血真空采血管預稀釋法組內PLT 計數值各時間分析結果無統計學意義（F=0.65,P=0.53），3h內整體的PLT計數值結果穩定。

表1 不同采血管各時間組PLT 計數值比較[(±s)×109/L]

表1 不同采血管各時間組PLT 計數值比較[(±s)×109/L]

項 目 1h 2h 3h F P EDTA 法 173.69±78.33 144.37±71.49 128.45±70.17 4.79 0.01靜脈血真空采血管預稀釋法 206.76±71.75 203.35±70.31 190.92±75.37 0.65 0.53

2.2 不同時間下靜脈血真空采血管預稀釋法 見表2。靜脈血真空采血管預稀釋法不同時間測得的PLT計數值與EDTA 真空采血管法所測得PLT 計數值之差的結果差異有統計學意義（t=4.19～6.92,P＜0.001），且均遠大于0，證明靜脈血真空采血管預稀釋法可以校正EDTA-PTCP 的計數結果。

表2 不同時間下靜脈血真空采血管預稀釋法與EDTA 法PLT 計數值之差分析結果

3 討論

EDTA-PTCP 是指因使用EDTA-K2作為抗凝劑而導致臨床檢測血樣中的PLT 數目原本正常，其檢測結果卻顯示假性減少的現象。雖然EDTA-PTCP發病概率為0.03%～1.9%[5]，但若就診患者人數多，加之血細胞檢測是臨床檢驗的常規項目，如不加以鑒別而導致誤診,不僅加重患者負擔，還會引起醫療糾紛。

本文實驗結果表明，采用EDTA 法對EDTAPTCP 患者的血樣進行檢測，組內PLT 計數結果在采樣后3h 內降低較為明顯，差異具有統計學意義（P＜0.05）；而采用靜脈血真空采血管預稀釋法檢測EDTA-PTCP 患者的血樣，3 h 內整體的PLT計數結果穩定，雖PLT 計數結果隨著血樣放置時間（1h,2h,3h）而稍有降低，但差異無統計學意義（P＜0.05），證明靜脈血真空采血管預稀釋法對臨床EDTA 依賴性假性血小板減少的PLT 計數結果有較好的校正作用。不同時間段（1h,2h,3h）的靜脈血真空采血管預稀釋法測得的PLT 值與EDTA 真空采血管法所得PLT 計數值之差的結果差異均有統計學意義（P＜0.05），且均遠大于0，證明靜脈血真空采血管預稀釋法對血小板具有保護作用，這是由于此次實驗使用不含抗凝劑的非溶血性稀釋液來稀釋患者的靜脈血，穩定血小板膜表面糖蛋白GPIIb/IIIa，防止出現隱蔽抗原的暴露，同時通過固定比例（1∶10）的稀釋來降低抗體的滴度，以此來有效地拮抗抗凝劑誘發的血小板聚集。

靜脈血真空采血管預稀釋法解決了抗凝管帶來的血液聚集問題。以其結構簡單，具有精準的刻度線，用來稀釋靜脈全血，防止抗凝劑(鈣離子螯合劑)誘發暴露血小板膜上糖蛋白GPIIb 中的自身抗原(Ag)；預稀釋真空采血管內血溶液中所有凝血因子的濃度因大比例稀釋靜脈血液而降低，增大凝血因子之間的距離，阻斷凝血因子之間的鏈式激活，從而阻止預稀釋真空采血管內血溶液的凝固[6]；通過采血管上的精密刻度，保證采集靜脈血液血量的準確可靠；采集靜脈血，防范采集末梢血時，組織液及皮膚表面殘留物質對血液的稀釋和干擾、對血小板及凝血因子的活化；以往開放式采集血液由于操作者和環境的污染，導致血液樣本的再現性受到影響，現通過真空采血的方式，采用預稀釋真空采血管，實現血液采集、制樣保存為一體，簡化操作，保證血小板數目的準確可靠；且采用預稀釋真空采血管進行臨床采集血樣,綜合了采血、稀釋、抗凝、血樣保存一步完成，降低臨床操作難易度,增加血液樣本的再現性，且靜脈采血已在臨床廣泛應用，使此法更易于推廣。

綜上所述，使用靜脈血真空采血管預稀釋法校正EDTA-PTCP 患者的血小板計數減少問題，具有簡單、有效、徹底、可靠的優點，避免臨床誤診誤治。