色譜法在巴比妥類藥物含量測定中的應用分析

李儼，孫立麗，王婉婷

（吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林）

0 引言

巴比妥類藥物內最主要的成分就是巴比妥酸鹽，該成分具有抑制中樞神經的作用，因此在臨床上常用于鎮痛、鎮靜、催眠需求上，而介于此類藥物的安全隱患，在使用時保障巴比妥酸鹽含量符合標準，否則容易出現醫療事故。就這一點，依照國家規定任何巴比妥類藥物都必須經過藥品檢驗，而色譜法就是此類藥品檢驗中的常用方法，但隨著現代技術發展，色譜法在巴比妥類藥物測定中的應用方式也越來越多，對此文章將依照測定流程，分析色譜法測定巴比妥類藥物的常見方式，且闡述各方法的特點。

1 巴比妥類藥物特征

要對巴比妥類藥物進行測定，就必須先了解此類藥物的特征，這一基礎上下文將對常見巴比妥類藥物的結構與理化性質進行分析。常見巴比妥類藥物包括：巴比妥、苯巴比妥、戊巴比妥、環己烯巴比妥、司可巴比妥、異戊巴比妥、硫噴妥鈉、甲苯巴比妥、己鎖巴比妥。

巴比妥類藥物的理化性質包括分子量、溶劑，針對以上常見藥物，其理化性質分別為：巴比妥分子量：184.19、溶劑：pH值9.4的硼酸鹽緩沖液；苯巴比妥分子量：232.24、溶劑：0.1mol/L NaOH溶液；戊巴比妥分子量：226.27、溶劑：pH值9.4的硼酸鹽緩沖液；環己烯巴比妥分子量236.27：、溶劑：pH值10或13的堿性溶液；司可巴比妥分子量：260.27、溶劑：pH值9.4的硼酸鹽緩沖液；異戊巴比妥分子量：226.27、溶劑：pH值9.4的硼酸鹽緩沖液；硫噴妥鈉分子量：264.3227、溶劑：pH值9.4的硼酸鹽緩沖液；甲苯巴比妥分子量：246.26、溶劑：pH值10的堿性溶液；己鎖巴比妥分子量：236.27、溶劑：分子量：246.26、溶劑：pH值10的堿性溶液。

2 色譜法應用

介于國標巴比妥類藥物測定流程，色譜法應用可以分為兩個步驟，即前處理、色譜法測定，下文將對兩個步驟中的色譜法應用常見方式、應用方法及特點進行分析。

2.1 前處理

目前，色譜法巴比妥類藥物測定當中的前處理方法有二，即蛋白沉淀法、溶劑萃取法，下文將對兩種方法的應用進行分析。

（1）蛋白沉淀法

蛋白沉淀法主要適用于血樣狀態的巴比妥類藥物測定當中，應用具有針對性特點，且該方法應用方式簡便、容錯率較高，因此受到了廣泛關注。在應用方法上，針對巴比妥藥物類型，需要先選擇對應的蛋白沉淀劑，后將蛋白沉淀劑滴入藥物溶液當中，使兩者產生反應，此時蛋白受沉淀劑影響會逐漸下降，而剩余巴比妥鹽酸則浮于上層，實現了蛋白與巴比妥鹽酸分離，后續采用色譜法可以進行檢驗。這種方法的應用可以保護色譜柱被污染、避免萃取時的乳化現象。原理上，該方法中的蛋白沉淀劑屬于有機溶劑，具有降低溶液中介電常數的作用，接觸后會使溶液內的蛋白質分子凝集而沉淀。此外，關于蛋白沉淀劑的選擇，一般常用的沉淀劑為甲醇、乙腈，這兩種沉淀劑在前人實驗當中均具有良好表現，特點在于甲醇沉淀劑的安全性更高，而乙腈的沉淀效果最好[2]。

（2）溶劑萃取法

因為巴比妥類藥物具有親脂性特征，所以其與有機溶液接觸之后很容易榮家，同時此類藥物當中的內源性干擾物質普遍數據強極性水溶性物質，在這一基礎上通過有機溶液是可以對巴比妥類藥物進行萃取的。關于容積萃取法的應用方式有二，即液-液萃取法、固相萃取法，其中前者主要在兩相之間對藥物的物分配系數進行提取，在根據提取結果對不同組分物質進行分離即可，而后者則是在固相基礎上進行相同操作，該方式相對簡陋，因此現代測定中已經不太常用。另外，在液-液萃取法應用當中要注意兩個要點，即萃取時間與二次萃取應用，其中萃取時間需要根據溶液來進行確認，例如當溶液為甲苯時，萃取時間應當控制在15min左右；二次萃取應用中要重視方式方法的選擇，這一點根據前人研究了解到，與溶劑萃取法契合度較高的二次萃取法為超聲波萃取，該方法可以有效提升萃取效率[3]。

（3）固相萃取法

固相萃取法是一種主要通過柱色譜分離原理來實現遷出了方法，在現代應用當中常用于生物樣品條件下。原理上，首先需要采用固定相對生物樣品進行吸附處理，可得樣品當中的目標物或者干擾物，其次完成后采用常規洗脫分離手段可知實現樣品分離，這種方法的優勢在于流程較為簡單，可以在短時間內多大批量樣品進行處理，同時處理完成后的回收率、萃取率都有良好表現，因此被廣泛應用。但值得注意的是，固相萃取法雖然流程簡單，但實際操作卻較為復雜，同時需要大量的有機溶液作為支撐，說明該方法的成本、污染性較高，且在一些特殊條件下，可能出現微量分析物過量損失的問題，例如當非特異性的沉淀反應過量時會導致這一問題，此時固相萃取法的凈化效果、檢測靈敏度、可靠性都會隨之貶低，因此在前處理環節當中，如果條件允許不建議選擇這種方法。

2.2 色譜法測定

結合上述前處理方法，在對巴比妥類藥物處理完成之后，即可開始色譜法測定，此步驟測定方式較多，主要包括：高效液相色譜法、超高效液相色譜、反相高效液相色譜法、液相色譜-質譜聯用聯用技術，下文將對各類方法進行分析。

（1）高效液相色譜法

高效液相色譜法在巴比妥類藥物測定當中應用最為常見，其主要利用高壓輸液泵將樣品液流動相輸入固定相色譜柱當中，在分離后通過檢測儀器獲取色譜柱檢測結果即可。該方式主要來源于氣相色譜法、液相色譜法，利用這兩種方法的特點，進行分析可以得到準確結果，且因為不同巴比妥類藥物性狀不同，這種方式的應用范圍十分廣泛。例如可以將高效液相色譜法應用于液態巴比妥藥物測定當中，即采用Diamonsil TM C18的反相柱作為色譜柱、將醋酸銨-甲醇作為流動相進行測定，結果顯示該方法的檢出限在1.0μg/mL范圍，滿足測定要求。

（2）超高效液相色譜

超高效液相色譜是一種脫胎于高效液相色譜法的先進技術，在近幾年的巴比妥類藥物測定中應用逐漸頻繁。介于兩種方法的相似性，在原理上兩者并沒有太多差異，但區別在于超高效液相色譜中采用的固定相為超高柱效細粒徑新型固定相，這種固定相的填料粒度較于上述方法更低，因此色譜柱功效提升，據悉可達到20萬塊/m的理論要求，在實際測定中具有更快的分離速度。例如在苯巴比妥含量測定當中，可以以C18s色譜柱作為固定相，結合高效液相色譜法原理進行分離，整個過程十分短暫，于4min內可將藥物中的四種成分完全分離，且標準曲線表現良好，可見該方法具有分離程度高、靈敏度高、測定速度快的優勢，有利于測定成本降低。

（3）反相高效液相色譜法

反相高效液相色譜法應用當中，主要以表面為非極性的載體作為固定相、以高極性溶劑作為流動相來進行測定。應用方法上，固定相可選擇ODS-18系列色譜柱、流動相可選擇甲醇-水，測定當中可以得到準確的線性曲線圖，且曲線圖線性關系表現良好，同時根據前人研究了解到，該方法的回收率達到了95%以上，可見其具有精度優勢。

結合上述三種方法應用可見，各類方法在應用當中互有優劣，因此原則上需要根據實際要求來選擇相應方法，但綜合對比下，超高效液相色譜的應用性能最為優秀，因此其在準確性、速度、成本上均有優勢，因此測定中可以重點考慮該方法的應用。

（4）液相色譜-質譜聯用技術

液相色譜-質譜聯用技術是一種系統化的測定技術，即首先依照液相色譜-質譜聯用的基本原理進行系統設計，系統中至少要包括液相色譜系統、樣品導入系統、接口、質量分析器、離子檢測器、真空系統和數據處理系統。其次將巴比妥類藥物通過樣品導入系統導入液相色譜系統當中，后經過接口與質量分析器、離子檢測器、真空系統接觸，在真空系統當中藥物成本將會逐漸分離，分離完成后在質量分析器、離子檢測器作用下可得分離成分數據，數據將會被數據處理系統接收，依照運行邏輯將數據對應后展示。這種方法具有較高的自動化表現，應用中更具便捷性優勢。

3 結語

綜上，本文主要對色譜法在巴比妥類藥物含量測定中的應用進行了分析，通過分析可見，巴比妥類藥物種類較多，結構、理化性質各異，需要采用相應方法來進行測定；參照測定流程，對色譜法巴比妥類藥物測定的前處理、測定步驟中的各類方式進行了分析，了解了各方式原理、功效以及優劣表現，在選擇時應當根據實際需求來選定方式。