山東地區新生兒地中海貧血篩查及基因檢測結果分析

劉 瑞， 朱 娜， 雒 猛， 趙 丹， 楚中華

1.山東省臍帶血造血干細胞庫，濟南 250102 2.山東大學齊魯醫院血液科，濟南 250102

地中海貧血是一種遺傳性、慢性、溶血性貧血，因最早在地中海沿岸國家發現而得名[1]。它是由遺傳的基因缺陷致使血紅蛋白(Hb)中1種或1種以上珠蛋白鏈合成缺失或不足所導致的病理狀態[2]。該病在我國常見于南方省份，主要集中在廣東、廣西、云南、海南等，是一種對人體健康危害較大的遺傳病[3]。隨著經濟的發展與交通工具的變革，流動人口的社會融合也越來越普遍，導致北方這種疾病的發生率也逐步提高。但目前對北方地區地中海貧血流行病學相關的大樣本數據研究報道較少，本研究通過對16 098例臍帶血樣本進行地中海貧血檢測，旨在為地中海貧血檢測研究提供一定的數據支持，同時也可填補北方地區在這一方面的空白。

臍帶血(umbilical cord blood，UCB)是胎兒分娩后殘留在胎盤和臍靜脈中的血液，通常是廢棄的[4]。隨著臍帶血中的大量造血干細胞被發現，且有研究[5]證實自體造血干細胞移植可有效治療惡性血液病，因此近幾年臨床對臍帶血的使用越來越普遍。另一研究[6]表明，臍帶血血紅蛋白電泳在篩查新生兒地中海貧血中也起到了非常重要的作用，可作為新生兒地中海貧血及異常血紅蛋白病有效的篩查方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年7月1日至2017年12月31日山東省臍帶血造血干細胞庫16 098例異體庫新生兒臍帶血樣本，均來自足月產兒。

1.2 儀器與試劑 SPIFE-3000血紅蛋白電泳儀(Helena，美國)；PCR擴增儀(ABI，美國)；血紅蛋白電泳試劑盒(Helena，美國)；AFSA2質控品(Helena，美國)；生理鹽水(威高，中國)；四氯化碳(富宇，中國)。

1.3 血紅蛋白電泳檢測 取100 μL臍帶血，經生理鹽水洗滌3次后，加入血紅蛋白電泳試劑盒中的紅細胞裂解液100 μL，振蕩30 s，再加入300 μL四氯化碳振蕩1 min后，離心5 min，制成血紅蛋白懸液。然后將懸液在SPIFE-3000血紅蛋白電泳儀上樣電泳，同時電泳的還有AFSA2質控品。操作步驟嚴格按照儀器使用說明書操作，電泳完成后將瓊脂糖凝膠片進行染色、脫色、烘干及數據分析等[7]。

1.4 基因分型測定 對電泳得到的有地中海貧血異常的臍帶血血樣，提取DNA后進行基因檢測。采用熒光PCR熔解曲線法檢測α和β-地中海貧血，所用試劑盒為成都博奧獨立醫學實驗室提供；對異常血紅蛋白樣本采用DNA測序法檢測。

1.5 判斷標準 健康嬰兒血紅蛋白電泳結果顯示：無異常Hb區帶； Hb A組分占比約為30% 、Hb F組分占比約為70%；Hb A2組分占比為0.1%～1%。α-地中海貧血：有異常Hb Bart區帶[8]、Hb CS區帶；β-地中海貧血：Hb A低于12%且Hb F高于88%。異常血紅蛋白：檢出異常Hb區帶[9]。

2 結 果

2.1 血紅蛋白電泳檢測結果分析 結果(圖1)顯示：在16 098例臍帶血樣本中，共檢出血紅蛋白異常樣本105例，篩查陽性率為0.65%；其中疑似α-地中海貧血61例，疑似β-地中海貧血20例，疑似異常血紅蛋白24例。

圖1 各種血紅蛋白電泳條帶

2.2 血紅蛋白電泳結合基因診斷結果分析 對105例血紅蛋白電泳陽性的樣本進一步進行基因檢測，結果(表1)顯示，α-地中海貧血為50例，篩查符合率為81.97%。所檢出的類型均為我國常見α-地中海貧血突變，其中常見缺失突變48例，占比最高的是3.7基因缺失(-α3.7/αα)，為0.16%，其次東南亞缺失型(--SEA/αα)，占0.10%；常見點突變2例，分別是αCSα/αCSα和αQSα/αQSα各1例；β-地中海貧血為5例，篩查符合率為25%，基因型均為βCD26/βN。檢出異常血紅蛋白20例，篩查符合率為83.33%，其中Hb D 15例，Hb G 2例，Hb J 、Hb E和Hb H各1例。

表1 105例血紅蛋白電泳陽性樣本的基因檢測結果

2.3 電泳異常樣本父母戶籍所在地分析 在105例陽性嬰兒樣本中，父母雙方均為山東籍92例，父母有一方為省外戶籍13例，無父母均為省外戶籍樣本。在13例省外樣本中，其中南方戶籍人數僅為3例，分別是四川、云南和福建各1例，其他均為北方地區人口，主要分布于東北三省及內蒙古、河南等地。

3 討 論

地中海貧血是一種危害人類生命健康的遺傳疾病，也是影響我國國民健康的幾大遺傳病之一，因其在南方的發病率較高，所以大多數的地中海貧血研究及文獻都來源于我國南方地區，對北方地中海貧血的狀況卻鮮有報道。關于地中海貧血的檢測方法，從最開始的血常規檢測到現在的血紅蛋白電泳聯合地中海貧血基因檢測，為地中海貧血的篩查與診斷提供了可靠依據，而后者也是目前各實驗室主流的地中海貧血檢測方法[10]。

本研究采用血紅蛋白電泳法結合基因檢測對山東地區新生兒臍帶血進行地中海貧血檢測，結果與南方地區相比，具有一定的差異性。首先，相比于南方地區地中海貧血的高檢出率(10%～40%)[11]，山東地區地中海貧血檢測率較低，約為0.65%，這說明北方地區的發生率遠遠低于南方地區；其次，在基因類型上也存在差異性：我國常見的α-地中海貧血類型主要是--SEA/αα、-α3.7/αα和-α4.2/αα 這3種，南方地區中--SEA/αα一般占比最高，而在本研究中最高為-α3.7/αα，共計26例，另檢出泰國型基因缺失1例(--Thai/αα)。β-地中海貧血類型中，南方地區常見的類型主要是βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD17/βN、βCD41-42/βN，但山東地區只檢測到βCD26/βN，這可能是因為此基因型為山東地區主要的β-地中海貧血類型，另一原因可能為選取的檢測樣本主要出現異常條帶而疑似為β-地中海貧血的樣本，血紅蛋白含量異常的樣本選取較少。

在對某一地區的地中海貧血攜帶及發病情況進行調查時，還需考慮人群成分的多樣性對調查結果的影響[12]。在戶籍所在地數據統計中，僅有3例樣本父母為南方戶籍，占總樣本的0.02%，其他樣本均為北方樣本。因此，本研究中所選取樣本可以代表山東地區及北方地區地中海貧血基因型類型。

綜上所述，相比于南方地區，山東地區地中海貧血發生率偏低。地中海貧血類型具有一定的地區特點。