豬傳染性胃腸炎病毒PCR檢測方法研究進展

申識川，劉文正，李 利

（1.濮陽市檢驗檢疫服務中心，河南 濮陽 457000；2.臺前縣農業農村局，河南 臺前 457600；3.營口市食品藥品檢驗檢測中心，遼寧 營口 115004）

豬傳染性胃腸炎是由豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）引起的以脫水、嚴重腹瀉、嘔吐、腸絨毛萎縮、初生仔豬高死亡率為主要特征的一種接觸性傳染病，是造成哺乳期仔豬死亡的主要疫病之一。我國20世紀50年代開始有該病的報道，給我國養豬業造成了重大經濟損失。如能在發病早期快速確診該病，對于本病的防治具有非常重要的作用。豬傳染性胃腸炎、豬流行性腹瀉和豬輪狀病毒病在臨床癥狀、病理變化、流行病學等方面高度相似，僅靠臨床癥狀很難確診。因此，建立準確的豬傳染性胃腸炎病毒的檢測方法意義重大。本文綜述了國內近幾年PCR檢測方法研究進展。

1 豬傳染性胃腸炎病毒概述

TGEV屬于冠狀病毒科成員，該病毒形態在電鏡下觀察類似于王冠，基因組是連續單股正鏈RNA，全長28.6 kb，編碼7 個開放閱讀框，編碼4 種結構蛋白和3 種非結構蛋白。目前研究表明，豬傳染性胃腸炎病毒只有一種血清型。

2 豬傳染性胃腸炎病毒PCR檢測方法研究進展

TGEV 傳統的病毒分離、熒光抗體試驗等檢測方法樣品處理繁瑣、耗時長，靈敏度低，不適合推廣應用，隨著PCR 技術的成熟，相關儀器和試劑價格的降低，PCR檢測方法在動物傳染病檢測中已成為一種常規的檢測方法。

2.1 RT-PCR檢測豬傳染性胃腸炎病毒

相對于病毒分離鑒定和中和試驗，PCR 檢測具有快速、準確、對人員和設備要求不高的優勢，在基層得以廣泛應用。王黎等根據TGEV的N基因序列建立了檢測TGEV的RT-PCR 方法，并對豬傳染性胃腸炎高發季節的四川省成都市、德陽市、綿陽市、遂寧市、南充市各地豬場送檢的疑似病料進行了檢測，檢測結果表明在四川省的這些地區TGEV 的感染率非常高，此項研究為該病的防控提供了流行病學資料。滿坤等根據TGEV的S基因建立的RT-PCR方法從河北某豬場疑似TGEV 的病豬小腸內容物中分離出了一株TGEV的強毒株，為進一步研究TGEV的變異情況提供了依據。

2.2 多重RT-PCR檢測豬傳染性胃腸炎病毒

多重PCR技術是在一個PCR反應體系中加入多對以上引物和多個模板，同時進行擴增的

PCR技術，可用一種病料通過一次PCR 反應，檢測多種病原體，實現對多種疾病的診斷，被廣泛應用于動物疫病檢測。張坤、何啟蓋根據Gen Bank 收錄的PEDV M 基因序列、TGEV N 基因序列和豬輪狀病毒（GAR）VP 7 基因序列設計3 對引物，建立了能夠同時檢測PEDV、TGEV 和GAR 的多重PCR 方法，應用該方法檢測了華中地區75 份腹瀉豬糞樣,結果表明該方法檢測PEDV、TGEV、GAR 的敏感性高、特異性強, 是一種有效檢測PEDV、TGEV 和GAR的方法。

2.3 熒光定量PCR檢測豬傳染性胃腸炎病毒

熒光定量PCR 技術是近年發展起來的基因檢測技術，相對于傳統PCR 具有擴增效率高、靈敏度更高、特異性好、能精確定量等優點，而且可以有效避免檢測過程中的污染和假陽性問題。董玲娟等根據TGEV-TH98株的N基因序列建立的TGEV熒光定量RT-PCR檢測方法，對采自陜西楊凌周邊的30份臨床樣品進行檢測，結果表明，該方法特異性高、重復性好、敏感性比普通PCR 方法高2個數量級，可應用于臨床檢測TGEV。龔雙燕等建立的檢測豬初乳的熒光定量PCR方法檢測結果顯示，熒光定量PCR檢測方法的敏感性高于普通PCR 方法，可以用于豬初乳檢測TGEV。

2.4 多重熒光定量PCR檢測豬傳染性胃腸炎病毒

李軍等根據Gen Bank 中登錄的TGEV 的S 基因、PEDV的S 基因、豬輪狀病毒（PRoV）A 型的NSP 基因序列，建立了針對這3種病毒的多重熒光定量RT-PCR方法，用建立的方法對來自廣西壯族自治區、廣東省、江蘇省等地的9 個大型豬場的糞便、小腸和乳汁樣品豬腹瀉38份臨床樣品進行了檢測，結果表明該方法能夠特異性檢測PEDV、TGEV和PRoV，而與其他病原無交叉反應。

2.5 RT-LAMP方法檢測豬傳染性胃腸炎病毒

高睿澤等根據TGEV N 基因序列設計了兩對反轉錄環介導等溫擴增（RT-LAMP）引物，建立了針對TGEV-N基因的RT-LAMP快速檢測方法，通過與經RT-PCR和ELISA檢測驗證過的47 份臨床樣品進行比對，結果顯示符合率為100%，表明該方法可用于臨床檢測TGEV。

3 小 結

以上幾種RT-PCR 檢測方法，都是隨著分子生物學技術的發展而建立的，經歷了從定性到定量的發展過程，豬場、動物衛生檢疫部門和高校研究所等可以根據自身條件選擇適合自己的檢測方法。