牛副結核病的發病過程及診斷方法

王榮芳，王洪華，毛景東

（內蒙古通遼市開魯縣種畜場動物防疫監督管理站，內蒙古 通遼 028400）

1 牛副結核病概述

牛副結核病是由副結核分枝桿菌引起的一種慢性消耗性腸炎，對牛養殖業危害較大。本病在我國也一直存在，而且在規模化養殖逐步替代傳統散養模式的過程中其對養牛業的潛在威脅逐漸凸顯。因此，了解副結核病的發病過程并及時診斷對控制該病的發生至關重要。

牛副結核菌感染的臨床表現包括腹瀉、消瘦以及產奶量減少等。這些臨床癥狀通常會在初次感染后兩到五年出現，發病牛腸壁會明顯增厚，抑制營養吸收，隨著病程的發展最終消瘦脫水致死。多數牛副結核菌感染發生在犢牛期，被糞便污染的水、牛奶等均為感染途徑，同時也可能垂直傳播。牛對副結核菌感染的敏感性具有年齡依賴性，犢牛在前3 個月最易感，在4～12 月齡易感性逐漸減弱，這時感染副結核菌需要更高的感染劑量和時間。

2 牛副結核病發病過程

2.1 副結核菌入侵腸道

病原菌最早可經扁桃體黏膜侵入宿主，而扁桃體隱窩可能是副結核菌的感染部位，細菌經扁桃體進入后可隨血液擴散到腸系膜淋巴結和回腸，但多數研究表明其入侵部位主要在回腸。副結核菌侵入腸道后，小腸淋巴結中M 細胞攜帶其穿過上皮細胞，并將細菌釋放于黏膜下層，位于黏膜下層的細菌可被巨噬細胞吞噬。有報道稱，將副結核菌接種于回腸后，5 h內感染部位巨噬細胞中即可檢測到副結核菌的存在，而一旦副結核菌成功在巨噬細胞內寄生，感染將進入下一階段。

2.2 副結核菌入侵巨噬細胞

巨噬細胞吞噬副結核菌后，首先將試圖消滅副結核菌。由Th-1型淋巴細胞產生的多種細胞因子，如干擾素-γ等可以活化巨噬細胞，并對吞噬的副結核菌產生殺滅作用，部分免疫力強的牛可以成功消滅侵入的副結核菌，不會發展為副結核病。但許多受感染牛不能清除副結核菌則會導致其在宿主巨噬細胞內持續生存并繼續擴增。目前，副結核菌胞內存活機制還未完全闡述清楚，但有觀點認為副結核菌可以阻止巨噬細胞的成熟和酸化。一般情況下，早期感染中，宿主的天然防御機制可將副結核菌限制在腸道組織內，感染擴散的時間會非常緩慢，這種緩慢的病程進展通常可以維持兩年以上，期間患病牛通常不會表現出臨床癥狀，減重和對產奶量下降也不明顯，檢測病原菌和抗體通常會呈陰性，而干擾素檢測結果可能為陽性。隨著病程的發展，腸黏膜和腸系膜淋巴結中的副結核菌會引發宿主的炎癥反應，淋巴細胞、巨噬細胞等向該區域大量轉移，隨著炎性細胞浸潤的增強在腸內形成肉芽腫，并隨著副結核菌的持續增殖病情逐漸加重，最終出現臨床癥狀。肉芽腫的形成雖會破壞黏膜層，但同時也可以將吞噬副結核菌的巨噬細胞限制在其中，使病牛呈隱型感染多年也沒有明顯的臨床癥狀。到病程后期，機體細胞免疫逐漸減弱，由Th1型免疫反應轉向Th2型免疫反應，而一旦進入這一過程，病程將會快速發展，此時可在病牛糞便中檢測到副結核菌，同時血清抗體檢測呈陽性，臨床癥狀也會更加明顯。

2.3 病程后期

隨著病程發展，腸道內病變將逐漸嚴重，肉芽腫浸潤的范圍將逐步擴散并影響到空腸、回腸和盲腸，腸道內大量細胞浸潤將影響營養物質的吸收，進而產生腹瀉等癥狀，并出現低蛋白血癥。腹瀉癥狀可反復出現數次且藥物治療無效，產奶量隨之逐漸減少甚至停止泌乳。臨床后期，病牛將向環境中排放大量病原菌，污染畜舍環境、土壤和水源等。此時多數患病牛將被淘汰，如未淘汰病牛將因虛弱脫水而死亡。

3 副結核病的診斷方法

3.1 糞便細菌診斷

采集疑似患病牛糞便或直腸刮取物，用適量蒸餾水沖洗并過濾，制成細菌涂片后抗酸染色觀察，如存在紅色抗酸短桿菌則可初步懷疑感染，后續也可對沖洗物進行PCR診斷，擴增副結核菌特異性序列IS900，如獲得目的條帶則可確認感染；同時也可對糞便中副結核菌進行分離培養，但副結核菌生長緩慢，初次分離需6 周以上時間才可獲得菌落，如實驗條件不夠嚴格很難獲得。此外，在感染前期，病牛糞便中不會一直帶菌，如有其他抗酸菌存在可能干擾檢測結果。

3.2 變態反應

在副結核感染的診斷中，變態反應診斷是最早應用的方法。將副結核菌素皮內注射待檢牛，72 h 觀察變態反應情況，測量反應前后皮厚差異，根據OIE 診斷標準進行判斷。此方法可在發病前期進行診斷，但在病程后期，癥狀已較明顯的病牛變態反應可能會消失。此方法在檢測中可能會受到其他分枝桿菌的干擾，特異性不高，還應結合其他診斷方法準確診斷。

3.3 ELISA診斷

ELISA 診斷是目前發展較快也是應用較普遍的檢測方法，目前主要是通過檢測全血中干擾素-γ的水平來診斷副結核病感染。此方法檢測敏感性較高，可用于大量牛群調查，市場上已有商品化的ELISA試劑盒銷售。

4 防控措施

目前，治療副結核病并無特效抗生素，發達國家在發現副結核感染的病牛后通常會立即淘汰。雖然已有商品化的疫苗，但預防效果不佳且干擾診斷，所以并未大面積推廣使用。因此，提高飼養管理水平仍是現階段控制副結核病的最有效方法，在飼養過程中應及時清理糞便，加強新生犢牛護理，盡量減少與成年牛的接觸，使犢牛與副結核菌的接觸率和接觸時間降低，可以有效控制該病發生。此外，規模化養殖場應定期進行檢測并及時淘汰病牛。