厚樸炮制藥材的GC-MS聯(lián)用技術(shù)快速鑒別研究

邱常萍

【摘要】目的：探討與研究厚樸炮制藥材的氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用技術(shù)快速鑒別的方法與效果。方法：建立厚樸炮制藥材中厚樸酚的氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測定方法，并對5批生厚樸和6批姜厚樸的相似度進(jìn)行分析。結(jié)果：通過多次實(shí)驗(yàn)得出了最好的鑒別條件，具體如下。將萃取池的溫度一直保持在50℃的溫度，在壓力是20 Mpa的環(huán)境下試驗(yàn)，解析時(shí)溫度控制在40℃;動態(tài)萃取環(huán)節(jié)耗時(shí)1小時(shí)15分鐘，靜態(tài)萃取環(huán)節(jié)耗時(shí)10 min，二氧化碳的流量控制為每分鐘1.0 L。生厚樸和姜厚樸所測的厚樸酚在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，生厚樸和姜厚樸中厚樸酚的精密度與穩(wěn)定性RSD值分別為0.29%和0.27%、0.59%和1.35%;平均回收率均為98.7%和102.8%。6批姜厚樸樣品相似度在0.71-0.84之間，5批生厚樸相似度在0.84～0.96之間。結(jié)論： GC-MS 聯(lián)用技術(shù)在厚樸炮制藥材的應(yīng)用能快速鑒別生厚樸和姜厚樸，具有很高的精密度、穩(wěn)定性與加樣回收率，具有很好的實(shí)際使用價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù);厚樸;炮制藥材;厚樸酚;快速鑒別

【中圖分類號】R943【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】2096-5249（2021）20-0045-02

厚樸（Magnolia O?cinalis Rehd）為臨床上常用的中藥組方藥物，可用于治療消化道感染、便秘、消化不良等疾病[1]。中藥炮制是根據(jù)中醫(yī)藥相關(guān)的理論、各個(gè)藥材自身的特性以及對藥物的需求情況所實(shí)施的一種制藥技術(shù)，中藥材炮制的目的在于“增效減毒”[2]。但是在炮制過程中，很多中藥藥材容易發(fā)生結(jié)合、水解、絡(luò)合等不合理的反應(yīng)，導(dǎo)致中藥的藥效受到較大的影響，進(jìn)而影響服用此藥的患者的治療效果，甚至給其帶來很大的安全隱患[3]。厚樸的主要炮制方法為姜制，姜制可以加強(qiáng)其溫中下氣的作用，也可發(fā)發(fā)揮去油、去除刺激性、消除過敏等作用[4]。氣相色譜-質(zhì)譜（Gas Chromatography-Mass Spectrometer，GC-MS）聯(lián)用具有靈敏度高、前處理簡單、消耗溶劑少、分辨率佳等優(yōu)點(diǎn)，當(dāng)前在藥物鑒定中應(yīng)用比較多。本文探討了厚樸炮制藥材的 GC-MS 聯(lián)用技術(shù)快速鑒別方法與效果。

1資料與方法

1.1一般資料

使用賽默飛世爾科技公司的TRACE 1300型號的氣相色譜儀（色譜柱是VF-waxms型的色譜柱，長度是30[u3]cm，內(nèi)徑為0.32μm）、美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司生產(chǎn)的型號為3200 QTRAPTM 的質(zhì)譜儀（其中含有 Turbo V離子源）、梅特勒公司生產(chǎn)的 TOLEDO XS105DV 電子天平。

使用的甲酸和乙酸為色譜純，整個(gè)實(shí)驗(yàn)使用的水均為純凈水，其他試劑均為分析純。厚樸酚（購于北納生物有限公司），5批生厚樸和6批姜厚樸樣品購于當(dāng)?shù)刂兴幣l(fā)市場。1.2氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用條件

氣相色譜條件：載氣利用氦氣來進(jìn)行，注意純度要很高才可以，進(jìn)入樣品的地方將溫度調(diào)整為220℃，傳輸線調(diào)整為230℃的溫度，樣品的流速設(shè)置為每分鐘2.50 mL。進(jìn)樣的方式為不分流，進(jìn)樣量1μL，離子源溫度調(diào)整為200℃，設(shè)置升溫程序是開始溫度在100℃，3 min后，不斷升溫，一分鐘升高15℃，直到200℃，維持10 min。

質(zhì)譜的條件：電噴霧離子化源，正離子監(jiān)測模式，采集范圍50～500 m/z。

1.3樣品處理

利用精密的天平準(zhǔn)確稱取厚樸酚對照品2.50 mg，先用少量的醇溶解后，在繼續(xù)加醇直到10 mL 的刻度線為止，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液的儲備液，濃度是250?m。用粉碎機(jī)將生厚樸和姜厚樸打成粉末，選擇3號目篩來過篩，準(zhǔn)確稱取0.04 g的粉末放置到容量是50 mL的試管中，往里倒入甲醇10 mL，之后再超聲15min后，在轉(zhuǎn)數(shù)為1000轉(zhuǎn)的離心機(jī)中離心后分離上清液，之后利用0.45?m膜再次過濾，然后行 GC-MS分析。

（1）精密度試驗(yàn)。精密量取較低質(zhì)量濃度的生厚樸和姜厚樸溶液10μL，進(jìn)行色譜-質(zhì)譜分析，連續(xù)重復(fù)3次，記錄各峰面積，計(jì)算4種糖皮質(zhì)激素的RSD值。

（2）穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密量取較低質(zhì)量濃度的生厚樸和姜厚樸溶液10μL，分別在0、2、4、8 h 按實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣，記錄各峰面積。

（3）加樣回收率試驗(yàn)。精密稱取已知含有量的生厚樸和姜厚樸，平均分為3組，精加高質(zhì)量濃度對照品混合溶液1 mL、2 mL 和6 mL，平行操作處理，使其成低、中、高質(zhì)量濃度的加標(biāo)溶液，進(jìn)樣10μL，記錄各峰面積。

（4）樣品含量測定。共檢查了5批生厚樸和6批姜厚樸，比較樣品與對照品中各色譜峰的色譜-質(zhì)譜行為。

1.4觀察指標(biāo)

研究鑒別厚樸炮制藥材的氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）技術(shù)最佳條件并對5批生厚樸和6批姜厚樸的相似度進(jìn)行分析。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS021.0分析。計(jì)數(shù)資料用（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn);計(jì)量資料用（±s）表示，比較用 t檢驗(yàn)。當(dāng) P<0.05表示有顯著差異。

2結(jié)果

2.1 GC-MS條件優(yōu)化

通過多次實(shí)驗(yàn)得出了最好的鑒別條件，將萃取池的溫度一直保持在50℃的溫度，在壓力是20 Mpa的環(huán)境下試驗(yàn)，解析時(shí)溫度控制在40℃;動態(tài)萃取環(huán)節(jié)耗時(shí)1小時(shí)15分鐘，靜態(tài)萃取環(huán)節(jié)耗時(shí)10 min，二氧化碳的流量控制為每分鐘1.0 L。

2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

將峰面積與其相對應(yīng)的組分質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，生厚樸和姜厚樸所測的厚樸酚在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2≥0.99），見表1。

2.3精密度、穩(wěn)定性與加樣回收率結(jié)果

生厚樸和姜厚樸中厚樸酚的精密度與穩(wěn)定性RSD值分別為0.29%和0.27%、0.59%和1.35%。厚樸酚在生厚樸和姜厚樸中平均回收率均為98.7%和102.8%，見表2。

2.4鑒別分析

6批姜厚樸樣品相似度為0.71～0.84，5批生厚樸相似度為0.84～0.96。

3討論

隨著國內(nèi)外社會對天然藥物需求日益擴(kuò)大，也為我國中藥的發(fā)展提供了廣闊而美好的發(fā)展空間。但是現(xiàn)階段我國對于中藥的炮制過程的標(biāo)準(zhǔn)化以及質(zhì)量控制方面的工作情況還不是很健全，因此各種藥材的質(zhì)量情況有好有壞，嚴(yán)重影響者中藥的使用[5]。如今已經(jīng)有很多已學(xué)者等對厚樸的炮制方法及工藝流程進(jìn)行深入研究，目的是使其更加規(guī)范，但是多集中于提取方法的優(yōu)化、檢測方法的改善，很少進(jìn)行厚樸炮制藥材的快速鑒別[6]。厚樸的組成成分很多，包括揮發(fā)油成分可達(dá)到幾十種、生物堿類物質(zhì)、多種酚類物質(zhì)以及其他，藥理作用包括抗?jié)儭⒕徑馓弁础⒌挚共《尽⒓?xì)菌等侵犯，另外對治療腫瘤也發(fā)揮一定的作用。厚樸酚為厚樸的主要生物活性成分，對機(jī)體胃腸運(yùn)動功能有正面促進(jìn)影響，且能刺激成骨細(xì)胞功能并抑制骨疏松，也具有保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)免受損害的功能。中藥炮制當(dāng)前在藥學(xué)分析上比較常見，其主要作用如下。（1）潔凈藥物、保證用量;（2）矯正不良?xì)馕兑岳诜?（3）利用藥物貯藏及保存療效;（4）便于調(diào)劑和制劑，保證藥物質(zhì)量;（5）改變藥性和功能，提高藥物療效;（6）降低或消除毒副作用，保證中藥的安全性。不過受炮制溫度、輔料、炮制工藝的影響，其實(shí)際應(yīng)用效果也不同。GC-MS 聯(lián)用技術(shù)具有靈敏度高、分辨率佳等優(yōu)點(diǎn)，且對于樣本的處理比較簡單迅速，可實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)化合物進(jìn)行準(zhǔn)確迅速的定性分析[7]。本次研究通過多次實(shí)驗(yàn)得出了最好的鑒別條件，將萃取池的溫度一直保持在50℃的溫度，在壓力是20 Mpa的環(huán)境下試驗(yàn)，解析時(shí)溫度控制在40℃;動態(tài)萃取環(huán)節(jié)耗時(shí)1小時(shí)15分鐘，靜態(tài)萃取環(huán)節(jié)耗時(shí)10 min，二氧化碳的流量控制為每分鐘1.0 L。

《中國藥典》厚樸項(xiàng)下炮制品為姜厚樸，姜厚樸的目的是為了去除刺激性，消除過敏與去油，增強(qiáng)寬中和胃之功效。不過炒干的程度有所不同，姜有鮮干之分，用量不盡相同，有炒干、炒至深黃色，微帶焦斑、炒至褐色等，厚樸藥材切制規(guī)格及凈制中的個(gè)別環(huán)節(jié)也有不同之處[8]。傳統(tǒng)的色譜技術(shù)具有良好的重現(xiàn)性及定性定量能力，但無法對藥材直接分析，且方法耗時(shí)耗力[9]。 GC-MS 聯(lián)用技術(shù)可應(yīng)用于檢測小分子與易揮發(fā)化合物，可對目標(biāo)標(biāo)記物進(jìn)行準(zhǔn)確的定性分析[10]。并且該方法具有潛在信息的強(qiáng)大挖掘能力，提高了分離效率和掃描速度，有利于對已知的和未知的標(biāo)記物進(jìn)行模式判斷分析。本研究顯示 GC-MS 聯(lián)用技術(shù)在厚樸炮制藥材的應(yīng)用能使得生厚樸和姜厚樸中的厚樸酚能得到良好的分離，在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平實(shí)驗(yàn)方法精密度符合要求，且伴隨有穩(wěn)定性良好。同時(shí)本研究檢測了11個(gè)批次的生厚樸與姜厚樸相似度計(jì)算等都可將生藥材與姜制品分為兩類，鑒別的準(zhǔn)確性較好，并且速度也很快。當(dāng)然研究依然存在一些不足，沒有對不同產(chǎn)地的厚樸炮制藥材進(jìn)行分析，也沒有進(jìn)行更加詳細(xì)的精密度、穩(wěn)定性分析，將在后續(xù)研究中進(jìn)行探討。

綜上所述， GC-MS 聯(lián)用技術(shù)在厚樸炮制藥材的應(yīng)用能快速鑒別生厚樸和姜厚樸，具有很高的精密度、穩(wěn)定性與加樣回收率，具有很好的實(shí)際使用價(jià)值。

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（收稿日期：2021-03-23）