淺談雞禽流感實驗室檢測注意事項

程連山

（西華縣動物疫病預防控制中心，河南 西華 466600）

雞禽流感HA-HI實驗為當前世界普遍選用的實驗方法，可有效鑒定出其內里的病毒，并判斷其是否帶有免疫抗體，由于該實驗檢測會用到多個環節，每個環節的準確度都會影響實驗結果，應制定出合適的注意事項來加強檢測管理。

1 雞禽流感實驗室檢測的基本特點

針對雞禽流感實驗室中的檢測，由于流感病毒的表面會帶有血凝素蛋白，其帶有識別意識，并能依附在紅細胞的受體結構中，血凝素又叫HA，因而該實驗也被稱為HA實驗。當HA蛋白中的受體與抗體在結合后會干擾到HA蛋白與紅細胞的受體結合，也就是常說的HI實驗。在進行該項實驗的過程中技術人員需嚴格遵照雞禽流感診斷技術，并嚴格遵守相應的行為規范，從而增強實驗檢測效果。

在實行HA-HI實驗期間，基于其自身特點，也有著不同程度的優勢與不足，針對該實驗的不足，出現HI現象的條件較苛刻，只會發生在抗體與抗原中HA亞型一致時，各亞型之間不會出現明顯的交叉反應。與此同時，采用雞的紅細胞測試水禽或哺乳動物時，除了雞的血清外都要將其血清內的非特異凝集素清除。針對不同的禽種要選擇該種類下的紅細胞，并在每次進行實驗的過程中都要開展抗原標準化活動。對實驗室檢測的結果需進行正確解讀，由于人為干擾因素較多，其室內的解讀人員需擁有良好的解讀水準，在某些時段可能會影響該實驗數據的準確性。

2 雞禽流感實驗室檢測的注意事項

2.1 配制紅細胞懸液

在開展雞禽流感實驗室檢測的過程中，工作人員需仔細配制紅細胞懸液，具體來說，檢測中的紅細胞懸液要達到相應的實驗標準，其來源需為擁有健康體魄或無禽流感的健康公雞。值得注意的是，工作人員需仔細觀察當前所測試的病原抗體是否在該雞體內，需規范采集雞血液，保障此操作的無菌效果，防止出現因殺菌而帶去的污染。若實驗室內發生污染可能造成抗原血清出現非特異性反應，在采血時會出現凝血現象，嚴重影響實驗室的檢測結果。

選取血細胞的量要依照實驗的需求而定，在洗滌血細胞的過程中要選擇透明狀的清液，并在洗滌時進行適當的混勻與輕柔吹打，并及時更換洗滌吸管，特別是在提取血細胞期間盡量做到一次一根。

在配制紅細胞懸液期間進行多次洗滌，并適時開展紅細胞積壓活動，在完成洗滌工作后紅細胞懸液需被放置到4℃的環境內進行1h左右的觀察，只有無溶血或其他異常情況時才會進行相應的實驗。

在進行HA-HI實驗前，工作人員要詳細觀察家禽中的血清，觀測其是否與紅細胞發生非特異性聚集，若存有該類特征，利用雞的紅細胞及時吸附實驗血清，排除其非特異性聚集素，主要的吸附方式為將0.5ml抗血清添入0.025ml的紅細胞中，通過輕搖靜置的方法將其混合，待30min后進行上清的收集，并處理相應血清，增強該實驗數據的精準度。

2.2 詳細掌握實驗細節

在進行HA-HI實驗期間，工作人員需精準掌握其過程中的各項細節，首先，針對反應試劑的使用與保存，若該試劑處于凍干狀態，要按照其說明書中的方法進行溶解與保存，為防止其出現細菌感染或反復凍融，需盡量采用無菌操作，并將整套的試劑分成多個小包裝，利用反復凍融可有效增強該試劑的使用性能。其次，在進行實驗的過程中，為方便比較結果，需同時采用兩排病毒抗原測試，在選取實驗結果時可取二者的平均值，從而使血凝終點滴度值更為精準。比如，兩組的血凝終點滴度值為1∶512與1∶256，在取其二者的平均值后該數值為1∶362。最后，在使用抗原與紅細胞懸液期間要將其不斷搖勻，使實驗狀態始終保持著均質態勢。由于紅細胞的新鮮程度與實際數量會影響紅細胞表面的受體數量，也會對該實驗的準確度產生較大影響，因而紅細胞數量與抗體效價有關，抗原量數量會決定著與其結合的抗體量的數量，此類實驗的最終測試結果能反映出抗體效價。

2.3 精準解讀實驗結果

針對紅細胞懸液的添加順序，HA實驗中的順序為兩組細胞對照、高稀釋溶液倍數、低稀釋倍數；而HI實驗的順序與HA實驗相同，在完成低稀釋倍數后再增加抗原對照。

對于實驗中的靜置時間要嚴格控制，由于室內溫度的變化工作人員需隨時觀察，當紅細胞完全沉淀時應立即對其判讀，通常來講，靜置環境的溫度為4℃，若放置的溫度過高，可放回4℃的環境中。在解讀實驗結果的過程中，工作人員可適當將板子傾斜以加強結果的準確度，在判定HI結果時若對照后的結果相似，則斷定其為抑制狀態。□