高通量測序在原發性肝細胞癌mRNA患者測序中的應用研究新進展

覃文周，曾灝，翚纓

(廣西醫科大學附屬第八臨床學院(貴港市人民醫院) 檢驗科，廣西 貴港 537100)

0 引言

原發性肝細胞癌屬于臨床上比較多見的惡性腫瘤疾病類型導致此類疾病發生的原因具有一定的復雜性，其中長時間酗酒以及慢性肝炎病毒感染等屬于較為多見的危險性因素[4]。原發性肝細胞癌患者發病時相對比較隱匿，且發病早期的臨床癥狀具有一定的不典型性，其診斷率明顯較低。當前臨床上對疾病進行早期診斷時缺乏科學合理的手段，當對疾病確診時其病情往往已經進展到晚期，而接受手術治療的患者在術后極易出現復發以及遠處轉移等不良事件，而接受靶向藥物治療的患者其療效也并不理想，患者預后情況也難以達到實際預期，難以進一步延長患者生存率，因而提早預測以及診斷肝癌疾病的發生以及進展對于進一步促進患者病情以及預后改善具有關鍵作用[5]。相關研究顯示，抑癌基因失活以及促癌基因活性被激活這兩者之間獨立作用或者是共同發生作用都會導致患者出現腫瘤，從而導致患者機體內的部分基因表達存在一定異常，并使細胞出現明顯增殖以及不斷凋亡等狀況，對腫瘤的發生以及進展起到了極大地促進作用。因而 對已經發生改變的基因做詳細且深入性的研究，能在一定程度上為科學準確治療肝癌疾病提供一定的參考[6]。而差異表達基因篩選的主要方式包括mRNA差異顯示技術、消減雜交技術以及高通量測序技術等。

1 高通量測序的含義

高通量測序技術屬于現代生命科技領域內對傳統性測序方式所進行的一次具有較大革命性的巨大創新，它能夠一次性準確檢測幾十甚至到幾百萬條的DNA分子，因而又經常被叫作下一代測序技術，由此可以看出此項技術發生額劃時代的巨大變化[7]。而且高通量測序技術的應用，能夠在一定程度上細致全貌的分析一類物種的轉錄組以及基因組變化情況，因此也常常被叫作深度測序技術。

2 基于高通量測序技術對七種肝癌細胞株體細胞突變進行檢測

近幾年來，于高通量測序基礎上所提出的多組學以及多中心等癌癥基因組重大項目，將原發性肝細胞癌患者的關鍵性致癌基因網絡以及相對詳細的基因突變圖譜等內容做了全面的顯示[8]。但仍舊難以快速明確原發性肝細胞癌細胞株的體細胞突變情況。對肝癌細胞株可能存在的基因突變形式做科學研究，能夠更加深入性的了解腫瘤常用細胞模型，但仍舊需要進一步探討以及分析大多數克隆產生的肝癌細胞株以及突變相似性較大的部分分子機制等[9]。因而，通過測序技術對原發性肝癌細胞株中的相關通路以及突變基因進行全面的分析，能夠為肝癌細胞克隆來源以及肝癌異質性變化情況提供相對準確的參考方向[10]。

3 高通量測序技術在臨床應用中的價值

高通量測序技術最本質的特征為PCR，它屬于一類具有較高開放性的新型系統，能有效檢測未知以及已知的所有序列，但在對相關序列進行建庫期間，其所得樣本的數量會被迅速擴大到1000倍往上，因而研究過程中樣本的基因量會存在一定程度的誤差[11]。所以在做探索性試驗時選用高通量測序技術更加恰當，能夠在試驗期間找尋到新的東西。如果所要研究的對象屬于已知類型，且會更加嚴格的要求定量選擇的準確性，這時比較適當的方式為基因芯片[12]。通常情況下腫瘤是經由多種綜合性且相對危險復雜的因素所導致的，此時患者機體內產生了異質性相對較強的腫瘤微環境，主要表現為不同患者之間的腫瘤類型具有一定的差異性，相同患者但病灶存在明顯不同，以及相同腫瘤結節內部細胞具有一定程度的其異質性[13]。且細胞內已經出現明顯的基因突變、表達異常以及激活、失活等狀況，因而臨床上及時發現以及診斷癌細胞及其配對癌旁差異基因時，應用高通量測序技術相對來說更加恰當[14]。

高通量測序技術的應用能夠深度測序數量繁多且種類不同的基因片段混合物，并能在較短的時間得到個體以及疾病的所有基因數據信息，其中讀長時間短為最關鍵的一項標志[15]。高通量測序技術同過去的測序方式對比來說，其關鍵性優勢在于使用成本不高、測序比較迅速、測序準確性高以及通量高等[16]。同時能夠在是面對未知序列信息的背景下有效測序已有的樣本數據，必能對最新產生的基因以及突變等進行及時發現以及鑒別診斷，有利于進一步找尋到多種復雜疾病在發生以及進展期間所存在的致病靶點[17]。

高通量測序技術的應用能夠在最大范圍以及深度上快速測序已知樣本中的DNA以及RNA數目，從而能全景式的探討以及分析患者基因組的具體情況，還可以對DNA以及RNA相對較低的發生頻率進行準確測定，有利于對全基因組關聯性研究中出現的假陰性率以及高假陽性考率等問題進行進一步解決，使結構變異的敏感性以及導致疾病發生的稀有變異等均得到進一步提升[18-19]。高通量測序技術本身具有的全面性以及多樣性等特征，能夠對復雜疾病分子的調控有進一步的了解，對于快速研究、診斷以及合理治療疾病具有關鍵意義。對于部分具有明顯個體細胞以及遺傳基因雙重病變，且存在較高階段異質性的癌癥類型疾病比較適用。當前高通量測序技術已經得到廣大研究者的深度認可，同時在有關疾病領域內獲得了相對較大的突破以及發展[20]。

綜上所述，近幾年來高通量測序技術在臨床醫學中的發展越來越迅速，且在生命科學領域中的應用也更加普遍。而臨床對多種復雜性疾病的深入性研究以及有效推動，能對宏觀基因組學的探究以及有關解決策略分析進行有合理改變。而在對肝癌疾病進行有效研究以及探討的過程中使用高通量測序技術，不但能在分子層面上對同肝癌臨床分型存在密切關聯的樞紐基因進行精確且合理的鑒別診斷，還能對患者原發性肝細胞癌體細胞的突變表達形式進行準確判斷，能為進一步掌握疾病的發生機制提供科學且全面的參考以及理論依據。