江蘇省泰興地區300例聽力正常孕婦藥物性耳聾的基因篩查

肖 穎, 吳玉璘, 趙永秀, 林 寧

(1. 江蘇省泰興市婦幼保健院 婦產科, 江蘇 泰興, 225400;2. 江蘇省衛生健康發展研究中心, 江蘇 南京, 210000)

耳聾是較為常見的感覺神經系統缺陷性疾病，研究[1]統計約2/3的聽力損害是由遺傳缺陷所致，其中線粒體遺傳是一種母系遺傳，而線粒體DNA 12S rRNA是氨基糖苷類抗生素誘導的非綜合征性耳聾研究中的熱點區域[2]，其中A1555G和C1494T這2個位點的突變是目前公認的與藥物性耳聾密切相關的致病性突變，可引起突變攜帶者對氨基糖苷類抗生素表現出高度敏感[3-5]。目前，江蘇省泰興地區孕婦藥物性耳聾基因篩查知識普及率較低，有關藥物性耳聾基因的突變率等基礎數據及相關研究報道較少。本研究對孕婦進行A1555G、C1494T基因突變篩查，早期發現藥物性耳聾敏感個體、遲發型遺傳性耳聾個體，為藥物性耳聾遺傳咨詢及預防提供理論依據和干預措施，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取 2019年5月—2020 年6月江蘇省泰興市婦幼保健院定期參加產前檢查的孕婦300例，篩查前均詳細告知線粒體DNA 12S rRNA基因突變篩查相關知識和風險，所有研究對象均自愿簽訂知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 資料收集: 收集所有研究對象的基本信息，包括耳聾家族史、耳聾發病原因等資料。

1.2.2 樣本采集: 抽取研究對象的外周靜脈血2 mL, 乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，樣本保存于-20 ℃冷凍備用。

1.2.3 藥物性耳聾基因篩查: 應用藥物性耳聾基因檢測試劑盒(山東英盛生物技術有限公司，貨號191201), 采用堿基突變全血檢測法，在1.5 mL離心管中分別加入抗凝血液200.0 μL; 加純水600.0 μL, 震蕩混勻，室溫放置10 min; 12 000 轉/min離心5 min后棄上清; 加純水600.0 μL, 震蕩混勻，室溫放置5 min, 期間混勻1次, 12 000轉/min離心5 min后吸棄上清; 加200.0 μL DNA提取液, 100 ℃水浴 8 min; 短暫震蕩, 12 000轉/min離心5 min, 取上清用于檢測。

在96孔板上擺放2套八連管，標記檢測位點(1555A>G、1494C>T)、樣本編號、陰性/陽性質控; 每管分裝23.0 μL待測位點的聚合酶鏈式反應(PCR)的反應液于PCR反應管內; 確認離心好的樣本、陰性/陽性質控品與PCR反應管的排列順序一致; 向分裝好試劑的PCR管內分別加入2.0 μL待測DNA模板、陰性/陽性質控。開啟ABI7500熒光PCR儀，設置PCR擴增參數，并設定FAM、HEX(VIC)檢測通道; 核對擴增程序及擴增體積25.0μL無誤，按順序放入待擴增樣本，開始擴增。最后根據“反應孔信息表”項目下儀器自動讀取的Ct值進行結果判讀。

1.2.4 子代聽力篩查: 采用丹麥MADSEN耳聲發射儀和自動聽性腦干反應篩查儀，對出生48 h至出院前的新生兒進行聽力篩查。

1.3 評估指標

統計300例孕婦藥物性耳聾基因篩查突變率; 對突變基因攜帶者提供科學用藥指導，對子代進行藥物性耳聾基因篩查，對子代進行聽力篩查并隨訪跟蹤。

2 結 果

300例孕婦中, 298例通過了藥物性耳聾基因篩查, A1555G基因突變攜帶率為0.67%(2/300), 未發現C1494T基因突變。子代耳聾基因篩查結果顯示，未通過篩查的2例孕婦子代均為A155G攜帶者。2例A1555G基因突變攜帶者的子代均通過了新生兒聽力篩查。

3 討 論

藥物性耳聾是指使用某些藥物引起的位聽神經系統中毒性損害而誘發的一種非綜合征性耳聾，具有遺傳易感性[6-7]。線粒體DNA 12S rRNA突變是其主要致病機制, A1555G和C1494T是較為常見的突變位點。研究[8-10]報道，線粒體DNA 12S rRNA突變攜帶者出生時聽力正常，若使用氨基糖苷類抗生素可出現感應神經性耳聾。氨基糖苷類抗生素具有較強的毒副作用，對聽覺、前庭系統都會造成不可逆的損傷[11], 因其具有抗菌譜廣、臨床起效快等特點，目前仍廣泛應用于臨床，導致氨基糖苷類抗生素誘發致聾成為新發耳聾的主要原因。

本研究對300例孕婦進行藥物性耳聾基因篩查，研究對象均為首次就診，說明泰興地區的孕婦及家屬對耳聾基因篩查的重要性認知不足，因此需要加強專業衛生人員相關培訓，大力宣傳孕婦耳聾基因篩查的重要性。本研究采用PCR法檢測出孕婦線粒體DNA 12S rRNA的A1555G攜帶率為0.67%, 子代線粒體DNA中A1555G攜帶率也為0.67%, 因線粒體基因具有母系遺傳特點，故突變位點在母體與子代中的攜帶率并無差異。

線粒體12S rRNA突變可導致氨基糖苷類抗生素耳聾[12]。在中國，線粒體DNA 12S rRNA基因以A1555G突變為主, C1494T突變概率較低[13-14]。本研究共檢出2例A1555G基因突變，說明攜帶者應避免使用氨基糖苷類藥物，防止藥物性耳聾的發生。本研究孕婦A1555G突變率僅為0.67%，且未檢測到C1494T突變，低于研究[13-14]報道的突變率，可能與本研究樣本量較少、各地區間存在差異等因素有關。本研究孕婦線粒體DNA 12S rRNA中A1555G突變2例，突變率為0.67%, 原因可能為本研究僅篩查了線粒體DNA 12S rRNA的2個熱點區域，即A155G和T1494T, 而線粒體DNA上其他位點突變造成的藥物性耳聾存在漏篩。因此，需進一步完善本研究中線粒體DNA其他位點上的篩查。

綜上所述，在江蘇省泰興地區對孕婦人群開展藥物性耳聾基因突變篩查，不僅可指導攜帶者合理用藥，為攜帶者家庭揭示分子病因，避免孕期藥物性耳聾的發生，還可對孕婦子代進行跟蹤隨訪，進行專項管理，及早干預并構建完整的藥物性耳聾防控體系。