核酸檢測與酶聯免疫吸附檢測在無償獻血血液標本乙肝病毒篩查中的應用比較

成守澤

【摘要】目的：分析核酸檢測與酶聯免疫吸附檢測在無償獻血血液標本乙肝病毒篩查中的應用情況。方法：選擇2019年1月至2020年1月某中心血站所收集的無償獻血樣32428份為研究樣本，所有受試者的血液樣本均經過金標試紙法檢測HBsAg以及干化學法測定ALT顯示合格，將樣本分為兩份，分別開展核酸檢測以及ELISA測定，分析結果。結果：相較于ELISA檢測法，核酸檢驗法的特異性以及靈敏度明顯更高（P<0.05）。核酸檢測特異度為99.98%。靈敏度為80.85%;ELISA檢測特異度為70.05%，靈敏度為70.21%。結論：在開展HBVI臨床篩查時，應用核酸檢測法所得出的結果特異性更強、靈敏度更高，該法應用前景廣闊，因此值得進一步推廣應用。

【關鍵詞】核酸檢測;酶聯免疫吸附試驗;無償獻血;乙肝病毒篩查

[中圖分類號]R446.6：8512.62 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2021）01-0137-02

酶聯免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）為經典血清學診斷方式。其有著快速、靈敏以及價格經濟等等特征。其主要實驗原理為：抗體與酶復合物聯合顯色，其能夠發揮出維持抗體免疫活性的效用。現如今，酶聯吸附免疫法為臨床中開展乙肝病毒檢測的常用方式。這種方法于血液篩查中可發揮出一定作用。而核酸檢測法（nucleic acid testing，NAT）不但能夠有效減少輸血傳播病原體風險度，另外也可縮減病毒檢測窗口期。其在測定隱匿性乙肝病毒感染方面意義重大[1]。

為了全面探究兩種檢測方式于無償獻血血液樣本乙肝病毒篩查中的應用價值，本實驗選擇2019年1月至2020年1月某中心血站所收集的無償獻血樣32428份為研究樣本，對上述病情進行全面分析，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年1月至2020年1月某中心血站所收集的無償獻血樣32428份為研究樣本。所有受試者的血液樣本均經過金標試紙法檢測HBsAg以及干化學法測定ALT顯示合格。將樣本分為兩份，分別開展核酸檢測以及ELISA測定。并在樣本試劑瓶上有效記錄編碼以及收集日期，于采集后4h內離心處理，放在冰箱內低溫保存。

1.2 方法 本實驗所使用的ELISA測定設備為瑞±哈密頓公司生產，型號為FAME24/20型全自動酶免分析儀。核酸檢測利用美國羅氏公司所生產的實時熒光定量PCR系統完成。

所有受試樣本均實施PCR系統HBV-DNA檢測以及ELISA法實施HBV血清標記物檢測，將1g（HBV-DNA）在2.7以上陽性標準[2]。完成靜脈采血之后留取兩份樣本，完成核酸檢測以及ELISA檢測。均在收集樣本之后48h內完成。針對無法完成的樣本，需要在提取血漿之后放置于-20℃環境下妥善保存，并在1周內完成檢測。

1.3 觀察指標 針對于三類HBV感染狀態的HBeAg陽性情況加以記錄以及分析，具體包含慢性感染或急性感染[HBsAg（+）/HBeAb（+）]、小三陽[HBsAg（+）/HBeAb（+）/HBcAb（+）]、大三陽[HBeAg（+）/HBeAg（+）/HBeAb（+）]。

1.4 統計學原理 本實驗使用SPSS20.0統計軟件，對數據內的計數資料開展x2檢驗分析，若P<0.05，證實相關數據存在統計學差異。

2 結果

相較于ELISA檢測法，核酸檢驗法的特異性以及靈敏度明顯更高（P<0.05）。核酸檢測特異度為99.98%。靈敏度為80.85%;ELISA檢測特異度為70.05%，靈敏度為70.21%。ELISA檢測結果、核酸檢測結果分別與金標試紙法檢測結果對比情況，詳見表1、表2。

3 討論

相關文獻證實：當人體生成抗體以后，其會在相當長一段時間內留存于機體之中。但因為抗體濃度水平較低，在此刻利用酶聯免疫吸附法開展檢測效果精準度差。核酸檢測法所出具的結果有著良好的靈敏度和特異度。在臨床中，一般將核酸檢測結果視為酶聯免疫吸附實驗結果的互補型實驗結論。

核酸檢測法是通過分析血液內微小病毒核酸，經聚合酶鏈式反應擴張，通過熒光信號加以識別。盡早實施核酸檢測，可以顯著縮短窗口期時間。在全面推廣核酸檢測法之前，美國有90%以上的輸血者傳播人類免疫缺陷病毒;有75%以上的輸血傳播丙肝病毒的危險性主要來自于窗口期感染獻血。迄今為止，諸多國家紛紛開設了和血液篩查項目。其主要內容包含篩查丙肝病毒、乙肝病毒以及人類免疫缺陷病毒。利用此法可以全面提升臨床用血的安全性，另外也可以減少輸血感染發生率。

中國屬于HBV感染的高發國。乙肝病毒感染往往經血液傳播。由此能夠看出，做好HBV篩查工作是相當重要的。當前，ELISA檢測法已然成為了臨床診斷HBV感染的最常用方式。其在疾病診斷與血清學篩查中發揮了不可替代的作用。這種方法有著進行方便快捷、價格經濟等等優勢。但值得注意的是，此法也存在一定局限性。比如說HBV感染具有一定窗口期，進而令ELISA檢測法與臨床應用中存在漏檢的不良情況[3]。

而HBV-DNA為一類近幾年發展而來的新式分子生物學檢測方式。其能夠實現于早期發現HBV感染，同時也可對病毒加以定量。利用此法所取得的結果靈敏性高可、靠性強。該法可以對HBV感染真實情況加以反應，其靈敏度以及特異性均較高。現如今，我國諸多血站已然廣泛應用了核酸檢測法用于無償獻血者血液病毒感染篩查工作之中，且取得了滿意成效[4]。

有文獻報道表明[5]：HBV-DNA檢測以及ELISA檢測法測定HBV-DNA的結果存在一定差異。在該實驗中，共計28例樣本HBsAg檢測陰性，而經HBV-DNA檢驗結果為陽性。之所以出現這種情況，主要原因在于在乙肝病毒感染先期無償獻血者血液內病毒數量極少，而應用ELISA無法檢測出HBsAgo而在這時，病毒的DNA已然存在于無償獻血者的血清樣本之內。所以說，其HBV-DNA檢測結果表現為陽性。在該實驗中，有19份血液樣本的HBsAg陽性，而HBV-DNA為陰性。之所以出現這種現象，主要原因在于乙肝患者經藥物治療之后，血液內僅僅存在HBsAg，而無病毒DNA。此刻，該受試者的病毒復制率和傳染性均較低。

長久以來，在中國無償獻血受試者的血液篩查工作之中，通常沿用的模式為：擇取兩類不同廠家生產的酶聯免疫吸附試驗試劑盒，針對于血液樣本開展2次篩查。利用這種方法以削減血液檢測所造成的誤差。有文獻表明：針對于10571例標本應用酶聯免疫吸附法加以測定，最終檢測出50例乙肝表面抗原陽性樣本，綜合檢出率為0.4%;抗-HCV陽性共計58例，檢出率為0.54%;抗-HCV陽性共計%例，檢出率為0.9%。雖然說現如今我國ELISA檢測技術比以往更為先進，能夠在一定程度上減少輸血感染風險。但值得說明的是，應用ELISA檢測HIV、HCV、HPV病毒的抗原或抗體，針對于HIV、HCV以及HBV窗口期感染變異病毒等等仍舊沒有辦法第一時間檢出。另外也會受到諸如環境操作、試劑設備等等因素所產生的影響，因此存在較高的漏診率。

以酶聯免疫吸附實驗為基礎，聯合實施核酸檢測能夠取得滿意成效。在該項調查中，應用此法檢測出HBV-DNA陽性共計20例，檢出率約0.18%。而HIV-RNA與HCV-RNA沒有發現陽性樣本。經過對比，單一檢測法以及綜合檢測法測定乙肝病毒陽性樣本結果，在此其中共計4例樣本屬于酶聯免疫吸附實驗陰性而核酸檢測陽性。經后期采血隨訪，表明其屬于窗口期感染。

核酸檢測為一類新式的生物分子學檢測方式。其能夠有效測定受試者HBV-DNA含量水平繼而體現出機體真實的感染情況。該法有著易實現自動化、核酸標本回收率高等優勢，屬于一類血清學診斷方式的有效補充，尤其適合于大量血樣本篩查工作。

有文獻表明：將某血液中心所收集的12758例血樣本為研究對象，分別開展ELISA檢測以及NTA檢測，結果證實：兩類方式在測定HBV陽性率方面無明顯差別（P>0.05），相較于ELISA法，NAT法針對于HBV診斷特異度、靈敏度明顯更高，并且核酸檢測法的窗口期顯著比ELISA法更短。由此能夠看出，核酸檢測法在測定血樣本內HBV應用價值更高。之所以出現這種情況，主要原因在于乙肝病毒感染存在隱匿性的特征。另外感染也存在窗口期。ELISA法主要經過把酶復合物以及抗體結合顯色方式用于檢測，其非常容易受到諸如病毒感染窗口期以及病毒變異等等因素的影響，繼而引發漏診事件發生。

與之相比，NAT能夠經過核酸擴張技術，繼而測定出血樣本內較早出現的病毒核酸。同時，對其開展定量可以更為直接有效的體現出機體HBV感染的真實情況。因而利用此法所得出的效果靈敏性高、特異性強。另外有研究表明：在大三陽血樣本內HBV-DNA含量水平以及陽性率明顯比小三陽以及急性感染/感染慢性期的標本。由此能夠看出，HBV-DNA含量水平可以在極大程度上體現出HBV傳染程度。隨著受試者機體中HBV-DNA水平上升，病毒傳染性越強。在此其中，慢性感染期以及急性感染HBV不存在傳染性;小三陽雖然有一定傳染性，但并不強。而大三陽則有相當高的傳染性。臨床中，可以通過定量測定的方式，用以檢測HBV-DNA含量水平，進而知曉HBV傳染性。

本實驗中，將32428份無償鮮血的血液樣本視為研究對象，全面對比了該血液樣本中HBV篩查時利用核酸檢測以及ELISA檢測兩種方法的測定結果。最終證實：在開展HBV篩查時，核酸檢測法所體現出的特異性、靈敏性明顯比ELISA更高，組間數據存在統計學意義（P<0.05）。

由此能夠看出，在開展HBVI臨床篩查時，應用核酸檢測法所得出的結果特異性更強、靈敏度更高，該法應用前景廣闊，因此值得進一步推廣應用。

參考文獻

[1]蘇俊，駱冬云.核酸檢測與酶聯免疫吸附檢測在無償獻血血液標本乙肝病毒篩查中的應用價值比較[J].中國鄉村醫藥，2015，22（16）：58-59.

[2]高永慶.化學發光酶免疫分析法與酶聯免疫吸附法檢測乙肝病毒標志物比較[J].臨床軍醫雜志，2019，47（2）：215-216.

[3]黃百里.磁微粒化學發光法與酶聯免疫吸附法檢測乙肝病毒標記物的作用評價[J].臨床檢驗雜志（電子版），2019，8（3）：146-147.

[4]Chenyin H，Nizhen J，Man C，et al.Discussion on screening strategyfor human immunodeficiency virus，hepatitis C virus and hepatitis Bin blood donations[J].chinese journal of blood transfusion，2015.

[5]Dong W，Yuan Y，Liang Z，et al.Application of identification nucleicacid testing for screening of hepatitis B virus in blood samples[J].intemational journal of laboratory medicine，2012.