研究間接免疫熒光法篩查抗核抗體與特異性抗體檢測的相互關(guān)系

羅學(xué)斌

（廣西柳州市工人醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科，廣西 柳州 545005）

抗核抗體（ANA）檢測在自身免疫疾病診療過程中發(fā)揮著非常重要的作用，間接免疫熒光法（IIF）為檢測抗核抗體的金標(biāo)準(zhǔn)，該檢測方式具有較高的檢測敏感度，在ANA檢測篩選實驗中有著廣泛的應(yīng)用[1]?，F(xiàn)納入23600例2017年～2018年在我院進行抗核抗體檢測的患者，旨在分析間接免疫熒光法篩查抗核抗體結(jié)果與特異性抗體檢測結(jié)果之間的相互關(guān)系，如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

隨機抽取23600例2017年～2018年在我院進行抗核抗體檢測的患者，診斷標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)實驗室檢查等并結(jié)合患者臨床癥狀確診；納入標(biāo)準(zhǔn)：所選患者意識正常且自愿參與本次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：重復(fù)送檢標(biāo)本。男性11976例，女性11624例，年齡18～87周歲，平均年齡（55.46±10.32）歲。確診自身免疫性疾病（結(jié)締組織疾病、干燥綜合征、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡）患者9447例，將之納入甲組。疑似自身免疫性疾病患者8503例，將之納入乙組。5650例非自身免疫性疾病患者并將之納入丙組。本次研究在獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)后開展。

1.2 方法

清晨在患者空腹?fàn)顟B(tài)下抽取肘部靜脈血3～5 ml并對血液標(biāo)本進行離心處理，分離出血清后制成標(biāo)本并進行檢驗。應(yīng)用IIF法篩查血清標(biāo)本，應(yīng)用LIA法檢測特異性抗體[2]。通過HEp-2細胞細胞抗原片檢測血清標(biāo)本中ANA，首先稀釋血清標(biāo)本并與抗原基質(zhì)片反應(yīng)30 min，應(yīng)用PBS吐溫緩沖液流水沖洗后浸泡5 min，加入熒光標(biāo)記二抗，在無光環(huán)境下持續(xù)孵育30 min，然后再次采用PBS吐溫緩沖液流水沖洗，浸泡5 min后加入甘油封片，應(yīng)用熒光顯微鏡觀察[3]。陽性標(biāo)準(zhǔn)：抗體滴度≥1:100。應(yīng)用LIA檢測ANAs特異性抗體，首先稀釋血清標(biāo)本，然后使其與膜條上靶抗原反應(yīng)30 min，洗滌3次之后加入1.5n抗人IgG并反應(yīng)30 min，再洗滌3次，加入底物液并反應(yīng)15 min，應(yīng)用蒸餾水清洗膜條并終止反應(yīng)，分析顯色結(jié)果灰度值。陰性：灰度值≤5；臨界值：6-10；陽性：灰度值≥11[4]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 23.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理和分析相關(guān)數(shù)據(jù)，百分率（%）表示計數(shù)資料，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示計量資料，應(yīng)用獨立樣本t檢驗進行組間對比，通過x2檢驗進行組間對比，P＜0.05，組間存在顯著性差異。

2 結(jié) 果

2.1 LIA-ANAs及IIF-ANA結(jié)果總體分布及相關(guān)性分析

IIF陽性標(biāo)本檢測結(jié)果符合率為77.95%，IIF陰性標(biāo)本檢測結(jié)果符合率為59.65%，兩種檢測方法抗核抗體檢測符合率為70.15%，見表1。

表1 LIA-ANAs及IIF-ANA結(jié)果總體分布及相關(guān)性分析

2.2 LIA灰度情況及疾病間關(guān)系分析

IIF-/LIA±與IIF-/LIA+患者共計4061例，甲、乙、丙各組患者占比分別為44.45%、41.02%、14.53%，甲組患者占比明顯較丙組患者高，P＜0.05，見表2。

表2 LIA灰度情況及疾病間關(guān)系分析[n（%）]

3 討 論

ANA檢測在自身免疫性疾病診治中發(fā)揮著非常重要的作用，IIF法檢測ANA能夠針對整個細胞周期、細胞骨架、細胞漿以及細胞核等成自身抗體進行檢測，屬于實驗室常用ANA篩選方法，但是該檢測方式具有自動化程度低以及操作標(biāo)準(zhǔn)化難度大等缺點，導(dǎo)致應(yīng)用受限[5]。

ANAs特異性抗體及靶抗原純化技術(shù)不斷提高，液相芯片技術(shù)、化學(xué)發(fā)光法、LIA以及ELISA等標(biāo)準(zhǔn)化程度及自動化程度均較高的新型抗體檢測方法也不斷涌現(xiàn)。此次研究中，IIF陽性標(biāo)本檢測結(jié)果符合率為77.95%，IIF陰性標(biāo)本檢測結(jié)果符合率為59.65%，兩種檢測方法抗核抗體檢測符合率為70.15%?？芍狪IF-ANA及LIA-ANAs檢測結(jié)果存在一定的差異，因此兩種檢測方式不能相互替代。以HEp-2細胞，猴肝細胞作為抗原基質(zhì)進行ANA檢測時，不同固定方法、基質(zhì)中抗原含量過低或者抗原分布不均等因素均會影響特定抗原并造成部分特異性抗體出現(xiàn)漏檢現(xiàn)象[6]。IIF-/LIA±與IIF-/LIA+患者共計4061例，甲、乙、丙患者占比分別為44.45%、41.02%、14.53%，甲組患者占比明顯較丙組患者高，P＜0.05，表明ANAs 特異性抗體檢測無法被ANA IIF 檢測取代。

綜上所述，應(yīng)用IIF篩查抗核抗體容易出現(xiàn)出現(xiàn)特異性抗體漏診現(xiàn)象，單純檢測特異性抗體容易出現(xiàn)抗核抗體漏診風(fēng)險，實施綜合檢測有助于提高診斷準(zhǔn)確率。