探索茵陳對小鼠酒精性脂肪肝的保肝作用及其效果

蔣鴻燕，高 悅，路夢琦，劉小溶，隋竹欣*

（齊魯醫(yī)藥學(xué)院，山東 淄博 255300）

近年來，伴隨著人民生活質(zhì)量的增加和生活水平的上升，飲酒不良習(xí)慣的增加，酒精性脂肪肝的趨勢呈現(xiàn)出逐年上升的狀態(tài)，酒精性肝病在中國已成為第二大肝臟疾病。脂肪肝病因各種各樣，多種病因均可導(dǎo)致脂肪代謝障礙，導(dǎo)致形成脂肪肝。肝細(xì)胞內(nèi)總膽固醇（total cholesterol，TC）和甘油三酯（triglyceride，TG）合成和分泌之間不均衡是引起肝細(xì)胞脂質(zhì)非正常積蓄的重要因素。最近幾年來由于酒精誘發(fā)腸粘膜透析增加，血液內(nèi)腸內(nèi)毒素泄漏及肝k細(xì)胞活性化，生成了炎癥性cytork機(jī)制，是研究酒精肝損傷機(jī)制的熱點之一。其是因酒精性肝病類型而產(chǎn)生，只要是因為長時間飲酒過量，肝細(xì)胞脂肪變性、損傷及炎細(xì)胞浸潤為特點的疾病[1]。長時間飲酒可引起酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝硬化等[2]。酒精性肝病發(fā)病初期可無明顯臨床表現(xiàn)，但其肝臟內(nèi)部結(jié)構(gòu)在鏡下與正常組織相比早就產(chǎn)生了明顯的變化，酒精性肝病的病因顯而易見，是以大量的并且長期的飲酒為主所產(chǎn)生的，雖然病因簡單，但是它的發(fā)病機(jī)理卻是非常復(fù)雜的。社會在發(fā)展人民的生活質(zhì)量也在抬高，患有酒精性脂肪肝的病人也越來越多。因此酒精中毒對病毒性的肝炎和肝癌的產(chǎn)生、進(jìn)展和預(yù)后有著非常重要的作用。目前，國內(nèi)外尚無理想的靶向治療藥物，因此對治療酒精性脂肪肝的安全有效藥物的研究已引起越來越多國家和研究人士的關(guān)注。茵陳為菊科植物濱蒿或茵陳蒿干燥地上部分[3]。其具有利膽保肝、退黃利濕、鎮(zhèn)痛、抗炎等各種效用，特別是肝膽系統(tǒng)疾病療效確，也是黃疸治療方劑中使用率最高的藥物[4]。藥用植物中草藥茵陳可以有效的減少血清轉(zhuǎn)氨酶的活性，其中艾草色酮，6，7-二甲氧基香豆素，類黃酮等成分具有保肝作用。關(guān)于肝臟保護(hù)方面，亦可用茵陳做成茵陳蒿湯，其可以通過調(diào)血脂減少脂肪在肝臟積蓄，從而防止酒精性脂肪肝形成[5]。本研究以酒精性脂肪肝小鼠為模型，觀察茵陳對酒精性脂肪肝小鼠的保護(hù)作用及其效果。

1 材料與方法

（1）藥品與試劑

TC和TG試劑盒南京建成生物工程研究所。茵陳草是采得野生頭茬綿茵陳干草，中醫(yī)藥房購買。基礎(chǔ)飼料和高脂飼料購買于南京盛民科研動物養(yǎng)殖場，15%的乙醇按比例勾兌。

（2）實驗動物成年雄性小白鼠，體重20～25 g，齊魯醫(yī)藥學(xué)院動物中心購買。

（3）茵陳全汁制備及給藥

干葉磨碎100 g加蒸餾水100 mL煮開，即為100%全果汁，過濾后丟棄廢渣。茵陳葉干預(yù)組每天全汁0.5 mL，15%乙醇0.5 mL；模型組每天15%乙醇0.5 mL，對照組等量生理鹽水，各組連續(xù)6周每天灌胃一次。

（5）實驗方法

30只小鼠適應(yīng)飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分對照組、模型組和治療組，各組別為10只。對照組基礎(chǔ)飼料，模型組高脂飼料+15%乙醇不定量自由飲食，治療組高脂飼料+15%乙醇+茵陳。6周后小鼠眼球取血法取血，各組別隨機(jī)抽取6只取肝臟，多聚甲醛溶液固定，進(jìn)行石蠟切片制備HE染色。甘油三酯和總膽固醇采用酶偶聯(lián)比色法測定。

2 結(jié) 果

2.1 茵陳對酒精性脂肪肝小鼠肝組織學(xué)改變

對照組：鏡下可見肝細(xì)胞形態(tài)完整，核圓居中，偶爾有雙核的細(xì)胞，肝板以及肝板之間的肝血竇清晰規(guī)則。模型組：鏡下可見密集散布、大小不等脂滴空泡，部分細(xì)胞腫大，細(xì)胞核被脂滴推擠至細(xì)胞一側(cè)，肝板混亂，肝血竇辨別不清，正常肝組織結(jié)構(gòu)明顯遭到破壞。治療組：鏡下見肝細(xì)胞體積輕度增大，胞漿內(nèi)有些許小泡狀脂滴，肝細(xì)胞排列較模型組規(guī)則，中央靜脈周圍肝細(xì)胞較規(guī)則排列，可見到肝血竇，脂肪肝的改變明顯減輕。

2.2 TG、TC含量（表1）

表1 TC、TG含量結(jié)果（±s，n=10）

表1 TC、TG含量結(jié)果（±s，n=10）

?

aP＜0.05vs對照組bP＜0.05vs模型組。模型組TC和TG的含量較對照組明顯升高，經(jīng)茵陳干預(yù)治療后，TC和TG較模型組明顯下降，但是較對照組還是略有升高，結(jié)果提示茵陳對酒精性脂肪肝小鼠肝臟TC和TG有降低作用，從而可以有效保護(hù)肝臟的作用。

3 討 論

實驗結(jié)果模型組小鼠TC和TG含量水平均明顯升高，肝細(xì)胞也發(fā)生了組織學(xué)變化，提示很好復(fù)制酒精性脂肪肝動物模型。經(jīng)茵陳喂養(yǎng)干預(yù)后，對小鼠酒精性脂肪肝的肝細(xì)胞形態(tài)有明顯變化。茵陳中的主要成分為6，7-二甲基香豆素，這個成分對于酒精性脂肪肝的損害有著較為極強(qiáng)的改變，是茵陳保肝作用的最重要的成分，可以抗氧化，從而起到保肝的作用。我們在利用茵陳開展實驗查閱文獻(xiàn)的同時發(fā)現(xiàn)，茵陳還可用作茵陳蒿湯，是祖國醫(yī)學(xué)經(jīng)典方劑，首見于東漢張仲景的《傷寒論》和《金匱要略》，前者治療陽明病“瘀熱在里”的發(fā)黃，后者治療黃疸病的“谷疸”[6-7]。通過實驗表明茵陳干預(yù)組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)的損害比模型組癥狀明顯有所降低，茵陳對于TC和TG含量有明顯的下降，這說模型組在一點點誘導(dǎo)酒精性脂肪肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變，表明茵陳對酒精性脂肪肝小鼠具有一定的保護(hù)作用，但是具體酒精性脂肪肝發(fā)病機(jī)制以及如何預(yù)防和保護(hù)還有待后期進(jìn)一步的研究。