基于液相生物芯片技術(shù)的腰椎間盤突出癥寒濕證證候生物標(biāo)志物篩選研究

曾朝輝，趙金亮，何 林，梁 劍

（湖南中醫(yī)藥高等專科學(xué)校附屬第一醫(yī)院，湖南 株洲 412000）

腰椎間盤突出癥是腰椎間盤發(fā)生退行性變以后,在外力作用下,纖維環(huán)破裂,疏核突出,刺激或壓迫神經(jīng)根而引起腰痛及下肢放射痛等一系列癥狀和體征[1]。腰椎間盤突出癥發(fā)病率居椎管疾病首位，占腰腿痛患者的60%以上。30～50歲為腰椎間盤突出癥發(fā)病的高危人群，且趨向年輕化。腰椎間盤突出癥病程反復(fù)、因其帶來(lái)的炎癥性疼痛，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。中醫(yī)將該病分為四個(gè)類型，即濕熱型、寒濕型、腎虛型、淤血型。現(xiàn)如今，有大量的臨床研究顯示[2]，炎性細(xì)胞因子TNF-α及血清IL-6在腰椎間盤突出癥發(fā)病機(jī)制中起到重要的作用，與神經(jīng)性疼嚴(yán)密相關(guān)。另外有學(xué)者指出[3]，TNF-α與腰椎間盤突出癥個(gè)證型分布規(guī)律，可最為中醫(yī)證型的輔助判斷。為此，本文就使用液相生物芯片技術(shù)對(duì)腰椎間盤突出癥寒濕證證候生物標(biāo)志物篩選，結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入本院2017年2月～2019年4月腰椎間盤突出癥寒濕證100例（A組），非寒濕證患者（B組）及健康志愿者（C組）各50例，A組男58例，女42例，年齡31～68歲，平均（45.72±1.83）歲。B組男27例，女23例，年齡30～68歲，平均（45.36±1.65）歲。C組男26例，女24例，年齡30～68歲，平均（45.53±1.72）歲。患者各項(xiàng)資料組間比對(duì)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

腰椎間盤突出癥寒濕證、非寒濕證、非腰椎間盤突出癥寒濕證及健康志愿者均禁食12小時(shí)，于次日清晨坐位抽取左肘前靜脈血，以促凝管分別采血4 mL，以3000 rpm/min，離心10 min，取血清。

1.3 觀察指標(biāo)

分析液相生物芯片技術(shù)檢出不同分型腰椎間盤突出癥TNF-α、IL-6的表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

全文數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行計(jì)算分析，其中均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）用于表達(dá)計(jì)量資料，x2用于檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料，P決定是否有差異，其中P＜0.05表示數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

A組患者TNF-α、IL-6表達(dá)水平均高于B組與C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見表1。

表1 TNF-α、IL-6表達(dá)水平組間比對(duì)（ ±s，mg/L）

表1 TNF-α、IL-6表達(dá)水平組間比對(duì)（ ±s，mg/L）

組別 例數(shù) TNF-α IL-6 A組 100 1.62±0.46 135.83±31.38 B組 50 2.25±0.47 125.27±30.94 C組 50 1.13±0.33 93.72±30.56 F 9.158 10.831 P 0.000 0.000

3 討 論

中醫(yī)治療腰椎間盤突出癥講求辨證論治。在辨證的基礎(chǔ)上，人們發(fā)現(xiàn)即便是同一證型要想尋求完全相同的證候狀態(tài)很難，個(gè)體間總有程度輕重不同的差異。加之中醫(yī)辨證過(guò)程具有主觀性，使得缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的證候分類方法，繼而導(dǎo)致中醫(yī)臨床缺乏重復(fù)性驗(yàn)證，結(jié)果難以被國(guó)際廣泛認(rèn)同。因此，運(yùn)用現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)詮釋證候本質(zhì)，把握辨證的規(guī)律是當(dāng)今中醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)問題[5]。生物標(biāo)志能對(duì)生物過(guò)程或病理過(guò)程及藥物反應(yīng)的指示物進(jìn)行客觀的標(biāo)準(zhǔn)，在生物體受到損傷時(shí)進(jìn)行預(yù)警，預(yù)警生物代謝過(guò)程、細(xì)胞分子結(jié)構(gòu)、生理活動(dòng)等異常變化等。此外，生物標(biāo)志物在醫(yī)學(xué)診斷、新藥開發(fā)、臨床研究等方面具有較高的臨床指導(dǎo)價(jià)值，有利于對(duì)為醫(yī)師提供有效的臨床診斷。液態(tài)生物芯片技術(shù)也可稱之為液態(tài)懸浮芯片，該技術(shù)已微球的多指標(biāo)數(shù)據(jù)采集和分析平臺(tái)為基礎(chǔ)，起源于流式細(xì)胞儀。液態(tài)懸浮芯片由四部分組成（探針、微球、檢測(cè)樣品、報(bào)告分子）。微球表面固定有不同的探針分子。液相生物芯片檢查具有以下優(yōu)勢(shì)[6]：①檢測(cè)樣品的多重性：現(xiàn)如今，微球采用雙色熒光編碼技術(shù)，可一次對(duì)多個(gè)目標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附法僅能對(duì)1種因子展開檢測(cè)、分析。②敏感性高：微球表面積相對(duì)較大，單個(gè)微球可結(jié)合多達(dá)約（1～2）×106個(gè)目標(biāo)分子，熒光信號(hào)及探針密度強(qiáng)度顯著增加，再加之采取熒光檢測(cè)，敏感性得以進(jìn)一步提升。③檢測(cè)速度快：由于雜交在懸浮的液相中進(jìn)行，所有指標(biāo)分析可在一次反應(yīng)中同時(shí)進(jìn)行，能在3 h內(nèi)完成分析，檢測(cè)效率大幅度提升。

本文研究顯示，A組患者TNF-α、IL-6表達(dá)水平均高于B組與C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中醫(yī)認(rèn)為腰椎間盤突出癥屬于“腰痛”、“腰腿痛”、“痹癥”、“痿證”等范疇中[7-8]。據(jù)中醫(yī)經(jīng)典文獻(xiàn)記載及現(xiàn)代中醫(yī)研究，認(rèn)為痹證之病機(jī)，均是因寒邪、寒濕、風(fēng)邪、濕熱、濕邪、痰濁、腎虛等因素所致。近年來(lái)，骨科專家對(duì)腰椎間盤突出癥的癥候分型進(jìn)行了深入研究，腰椎間盤突出癥分為寒濕證、血瘀證、濕熱證及肝腎虧虛證4型。相較于健康人群，腰椎盤突出癥患者的血清IL-6與TNF-α的水平顯著升高，且患者腰腿疼痛程度與TNF-α呈正相關(guān)關(guān)系。此外，TNF-α與IL-6可按腰椎盤突出癥各證型規(guī)律分布，對(duì)患者的中醫(yī)證型具有指導(dǎo)意義。

總而言之，液相生物芯片技術(shù)對(duì)腰椎間盤突出癥寒濕證證候生物標(biāo)志物的敏感度與特異度均較高，可對(duì)腰間盤突出的分型做出指導(dǎo)性作用，有良好的應(yīng)用前景。