大豆異黃酮增強免疫作用的實驗研究

郭智慧

（開灤總醫院內分泌二科，河北 唐山 063001）

大豆異黃酮被稱為植物雌激素，屬于一種黃酮類化合物。近年研究發現大豆異黃酮通過調節體內雌激素水平對防治更年期婦女癥狀，骨質疏松，抑癌（胃癌、乳腺癌、肺癌和直腸癌等），心血管疾病，老年癡呆等多種病癥有改善作用[1-2]，而對其增免作用研究較少。本實驗對其增免作用做一研究，為后期上市推廣提供依據。

1 材料與方法

1.1 受試物：

大豆異黃酮（純度為40%），生產企業為東明薈仁生物制品有限公司。

1.2 實驗動物：

清潔級昆明種小鼠，體重18～22g，由斯貝福（北京）實驗動物科技有限公司。實驗前適應性飼養一周。

1.3 分組及給藥：

將小鼠按體重隨機分為三批12個實驗組，每組10只。分別為對照組、高（30mg/kg·BW）、中（20mg/kg·BW）、低劑量組（10mg/kg·BW）。稱取大豆異黃酮，與蒸餾水混合均勻配成3mg/ml、2mg/ml、1mg/ml濃度的受試物溶液，實驗組給予相應受試物溶液，對照組灌胃等體積蒸餾水。灌胃體積均為10ml/kg·BW， 1次/d，連續30d。

1.4 方法

1.4.1 臟器/體重比值：給藥結束后，小鼠稱重，處死，取脾臟和胸腺，處理干凈臟器表面血污，并濾紙吸干，稱脾臟重和胸腺重量，計算臟器/體重比值。

1.4.2 脾淋巴細胞轉化試驗：小鼠脫頸椎處死后無菌取脾，研磨后制成脾細胞混懸液。用Hanks液將細胞懸液洗滌后離心，置于完全培養液中，將細胞濃度調整為3×106個/ml。每只小鼠脾細胞混懸液分兩孔加入到24孔培養板中，一孔做對照，一孔加ConA液，每孔1mL。置5%CO2，在37 ℃培養箱72 h。培養結束前4 h，每孔都吸去上清液0.7 ml，同時加入0.7 ml不含小牛血清的1640培養液，并加5m/mL MTT， 50μl/孔，繼續培養4 h。結束后，每1孔加1 ml酸性異丙醇，吹打均勻，至紫色結晶溶解完全。用酶標儀570nm處測光密度值（OD）。

1.4.3 測定NK細胞活性：小鼠脫頸椎處死后無菌取脾，研磨后制成脾細胞混懸液。調整脾細胞濃度到2×107個/ml，為效應細胞，傳代后的YAC-1細胞濃度調整到4×105個/ml，為靶細胞，二者比例50：1，加入96孔培養板培養；將100μL靶細胞和1%NP40均加到最大釋放孔中，于37℃、5%CO2條件下培養4h，每孔加入LDH基質液反應3min，后加入HCL溶液終止。酶標儀測定OD值。

1.5 數據統計：

數據采用Spss軟件統計，以±s表示，P＜0.05有統計學意義。

2 結 果

2.1 對小鼠體重的影響：

經口給予大豆異黃酮30d后，低、中、高三個劑量組與與對照組相比，小鼠體重無顯著性差異（P＞0.05），提示大豆異黃酮對小鼠體重無影響。

2.2 對小鼠臟器/體重比值的影響：

經口給予大豆異黃酮30d后，與對照組相比，中、高劑量組的脾臟/體重比值與對照組相比明顯升高（P＜0.05），高劑量組的胸腺/體重比值與對照組相比明顯升高（P＜0.05），差異有統計學意義。結果見表1。

表1 大豆異黃酮對小鼠臟器/體重比值的影響

2.3 對小鼠淋巴細胞增殖能力和NK細胞活性的影響：

經口給予大豆異黃酮30d后，與對照組相比，中、高劑量兩個的組脾淋巴細胞增殖能力明顯提高，NK細胞活性率顯著增加（均P＜0.05）。結果見表2。

表2 小鼠脾淋巴細胞增殖能力和NK細胞活性指標結果（ ±s）

表2 小鼠脾淋巴細胞增殖能力和NK細胞活性指標結果（ ±s）

注：與對照組相比，*P＜0.05。

組別（n=10） 脾淋巴細胞的增殖能力 NK細胞轉化率（%）對照組 0.051±0.008 22.23±6.40低劑量組 0.062±0.005 26.54±5.13中劑量組 0.071±0.011* 30.36±5.03*高劑量組 0.082±0.014* 33.29±5.56*

3 討 論

脾臟和胸腺均是體內重要的免疫器官，含有多種免疫活性細胞和細胞因子，脾臟在細胞免疫和體液免疫中發揮重要作用；胸腺是誘導淋巴細胞增殖分化成免疫細胞的重要場所，臟器體重比值與淋巴細胞增殖的程度相關，是衡量免疫能力強弱的一項基本指標[3-4]。MTT法通過檢測細胞的轉化而間接反應細胞增殖程度，是機體免疫的重要指標；通過Con A誘導脾淋巴細胞增殖，刺激免疫活性細胞的增殖。NK細胞是非特異免疫重要組成部分，LDH法是巨噬細胞激活重要的標志[5]。

本研究實驗前后，各給藥組小鼠體重與對照組相比無顯著差異（P＞0.05），說明大豆異黃酮對小鼠體重無影響。給予大豆異黃酮30d后，中、高劑量組的脾臟/體重比值和高劑量組的胸腺/體重比值與對照組相比明顯升高（均P＜0.05），且中、高劑量組能明顯提高脾淋巴細胞的增殖能力并能提高NK細胞的轉化率（P＜0.05），從而說明大豆異黃酮通過促進淋巴細胞增殖，促進免疫器官發育，從而提高機體的免疫能力。