東莞地區高毒力肺炎克雷伯菌耐藥基因研究

謝小燕，張拔山，李麗娟，張榮華

（1.東莞市人民醫院檢驗科，廣東 東莞 523000；2.東莞市婦幼保健院檢驗科，廣東 東莞 523000）

現階段，高毒力肺炎克雷伯菌（hvKP）成為臨床上著重關注的病菌。自上世紀80年代首次在臺灣地區檢出，隨后感染病例數量呈現逐年增加的趨勢[1]。目前，通過對高毒力肺炎克雷伯菌的耐藥基因研究可以選擇適宜且有效的治療藥物，增強患者的臨床治療效果和縮短治療時間，減少對機體的傷害[2]。本文研究分析了東莞地區高毒力肺炎克雷伯菌耐藥基因，其報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年6月～2018年12月東莞地區醫院檢驗科采集的住院患者中255株菌株，均為從患者的血液中分離出來的菌株，每菌株經VITEK -2型全自動細菌檢測分析系統和配套的細菌鑒定卡GNI實施檢測和鑒定，16SrRNA基因PCR及其產物實施測序鑒定，上述兩種檢測方法檢測結果具有一致性。全部患者的一般資料具有可比性（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 儀器、試劑

全自動微生物分析儀（生產廠家：法國梅里埃生物公司；型號：VITEK-2）；PCR 擴增儀（生產廠家：美國ABI公司；型號：Veriti Dx）；GSG-2000凝膠成像分析系統（生產廠家：珠海黑馬醫學儀器有限公司/Hema）；電泳儀（生產廠家：上海天能科技有限公司；型號：EPS-300）。2×Taq Master Mix、D2000 DNA Marker等生化試劑（生產廠家：北京百泰克生物技術有有限公司）；引物均由上海生工生物工程公司合成。

1.2.2 篩選hvKP 菌株

拉絲試驗（黏液表型檢測）：將所分離等待檢測的菌接種在血平板上，在37℃恒溫條件下培養16-18小時后，利用接種環將菌落挑取，如重復3次均未能將黏液絲挑起或黏液絲長度短于5 mm，則拉絲試驗結果呈陰性（cKP），如果黏液絲長度不低于5 m m，則拉絲試驗結果呈陽性（hvKP）。

1.2.3 菌株鑒定、藥敏試驗

主要應用VITEK-2 全自動微生物分析儀，對菌株肺炎克雷伯菌實施藥敏試驗，判斷藥敏呈現的結果均依照臨床CLSI標準實施。

1.2.4 ESBLs基因檢測

利用煮沸法對細菌總DNA進行提取。利用PCR法對blaTEM和blaCTX-M以及blaSHV等耐藥基因進行檢測。

1.3 觀察指標

對比東莞地區高毒力肺炎克雷伯菌中的hvKP 菌株和cKP菌株中blaTEM、blaSHV 和 blaCTX-M 3 種ESBLs 基因對藥物的耐藥性。

1.4 統計學方法

使用SPSS 22.0進行分析，所有數據當中，（%）類計數數據，行x2檢驗檢測；“±s”類計量數據，行t檢驗檢測；P＜0.05時，提示差異顯著。

2 結 果

hvKP 菌株的blaTEM、blaSHV 和 blaCTX-M 3 種ESBLs 基因耐藥性在不同抗生素中與cKP菌株相比較具有差異性（P＜0.05），見表1。

表1 blaTEM、blaSHV 和 blaCTX-M 3 種ESBLs 基因耐藥性[n（%）]

3 討 論

自上個世紀80年代由德國第一次報道 hvKP菌株以來，世界上大許多國家均對高毒力肺炎克雷伯菌中的hvKP菌株進行了相關報道[3]。有大量臨床研究及實踐結果表明，hvKP菌株的標本主要來源于所采集的痰液、血液、尿液和各種分泌物及膿汁等標本，同時hvKP菌株與cKP菌株在標本來源上并未存在明顯不同，均以痰液標本居多，其主要是因為cKP菌株普遍存在于機體的呼吸道、腸道內[4]。

現階段，hvKP作為一種具有高侵襲性和高毒力特征的cKP在臨床上得到重點關注，其是機體出現血液、泌尿系統等部位感染的重要因素。目前因為抗生素的濫用情況的發生，臨床上的ckP在耐抗菌藥物性持續提高。臨床上對hvKP的耐藥基因進行檢測和研究具有重要意義，能夠有效預防感染癥狀，進一步為臨床用藥進行合理和適當的指導。hvKP和ckP菌株具有較大的差異，經本研究表明，hvKP 菌株的血清分型情況明顯區別于cKP菌株，體內不同的血清分型能夠為判斷菌株類型提供重要依據[5]。ESBLs 是由TEM、SHV和OXA及CTX-M和其他型β-內酰胺酶發生突變形成的，其形成的基因型數量至少存在400多種。本研究結果表明，hvKP 菌株的blaTEM、blaSHV 和 blaCTX-M 3 種ESBLs 基因耐藥性在不同抗生素中與cKP菌株相比較具有差異性（P＜0.05），說明hvKP 菌株與ckP菌株相比較ESBLs存在數量較少，且三種不同基因在抗生素中具有不同的耐藥性。ckP 本質上屬于一類致病菌，藥物濫用情況的發生造成其耐藥性和抗感染性降低。不同的基因型一定程度上影響了抗菌藥物的耐藥性，對hvKP進行控制 的同時重視cKP的臨床癥狀，依據具體情況對藥物用量進行合理指導。

綜上所述，通過對東莞地區高毒力肺炎克雷伯菌耐藥基因的研究分析，能夠清晰反映出不同基因型的耐藥情況，從而為隨后的用藥進行合理的指導。