廣州地區(qū)2460例呼吸道感染患者7種呼吸道病原體RNA檢測(cè)結(jié)果分析

劉勝男，侯鐵英，廖建楓，史艷萍，鄭有為，吳 際，黃 革*

[1.廣東省人民醫(yī)院(廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院) 檢驗(yàn)科，廣東 廣州510080；2.南部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院第四派駐門診部 檢驗(yàn)科，廣東 廣州510010]

急性呼吸道感染(ARTI)是最常見的感染性疾病之一，發(fā)病率居急性傳染病的首位。95%的急性上呼吸道疾病和大部分的下呼吸道疾病是由細(xì)菌外的病原引起的，例如病毒、支原體或衣原體等，且容易出現(xiàn)復(fù)合感染。核酸雙擴(kuò)增法作為新研發(fā)的病原體核酸檢測(cè)分子生物學(xué)技術(shù)，可以一次性檢測(cè)流感病毒(FluA/FluB)、副流感病毒(PIV- 1/2/3)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(AdV-B/E)、肺炎支原體(MP)以及肺炎衣原體(Cpn)7種較為常見的引起急性呼吸道感染的細(xì)菌外病原體。此外，已有研究證實(shí)咽候拭子是目前監(jiān)測(cè)呼吸道病原體的首選標(biāo)本之一[1]。本文采用核酸恒溫雙擴(kuò)增法檢測(cè)2460例呼吸道感染患者咽喉拭子中7種呼吸道病原體RNA并對(duì)其結(jié)果進(jìn)行分析，旨在探討呼吸道病原體現(xiàn)癥感染的分布情況，以及在不同性別、年齡組、季節(jié)的感染特點(diǎn)，為臨床防治提供準(zhǔn)確、有效的病原學(xué)依據(jù)及流行病學(xué)參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2019年3月至2020年2月廣東省人民醫(yī)院門診及住院呼吸道感染患者2460例。排除重復(fù)病例。其中，女性874例，男性1586例；少年組(<18歲)687例；青年組(18-44歲)318例；中年組(45-59歲)346例；老年組(>59歲)1109例，年齡劃分參照世界衛(wèi)生組織 (WHO) 2016 年年齡分類標(biāo)準(zhǔn)[2]。

1.2 儀器與試劑

試劑為武漢中幟生物科技股份有限公司研制的7項(xiàng)呼吸道病原體核酸檢測(cè)試劑盒(雙擴(kuò)增法)。儀器為Tethys85全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光酶免儀和MiniG-R100干式恒溫器。

1.3 檢測(cè)方法

使用咽喉植絨拭子采集患者咽部上皮細(xì)胞并置于細(xì)胞保存液中，當(dāng)日及時(shí)檢測(cè)，未能及時(shí)檢測(cè)標(biāo)本置-20℃保存。采用核酸恒溫雙擴(kuò)增法定性檢測(cè)患者咽部脫落細(xì)胞中7種呼吸道病原體RNA，包括流感病毒(FluA/ FluB)、副流感病毒(PIV- 1/2/3)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(AdV-B/E)、肺炎支原體(MP)以及肺炎衣原體(Cpn)。每個(gè)樣本均同時(shí)檢測(cè)18SrRNA以保證咽喉拭子取材成功，每批次試驗(yàn)均設(shè)立陽(yáng)性和陰性對(duì)照。根據(jù)試劑盒說明書判讀結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)或者Yates連續(xù)性校正χ2檢驗(yàn)，當(dāng)P<0.05時(shí)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 7種呼吸道病原體mRNA陽(yáng)性檢出率

2460例呼吸道感染患者中，呼吸道7項(xiàng)病原體RNA陽(yáng)性208例，陽(yáng)性檢出率為8.46%(208/2460)。其中單一感染200例，占比96.15%(200/208)，混合感染8例，占比3.85%(8/208)。單一感染為主要的感染模式。混合感染主要的感染模式為呼吸道合胞病毒合并副流感病毒，有4例，檢出率為0.16%，在混合感染中占比50%。在7種呼吸道病原體中，陽(yáng)性率最高的是呼吸道合胞病毒，70例陽(yáng)性，陽(yáng)性率為2.85%，占總陽(yáng)性的33.65%，其次為肺炎支原體和副流感病毒。各病原體RNA陽(yáng)性檢出率見表1。

表1 2460例咽喉拭子標(biāo)本呼吸道病原體RNA陽(yáng)性檢出率

2.2 7種呼吸道病原體RNA在不同性別、年齡和季節(jié)的陽(yáng)性檢出情況

2.2.1不同性別呼吸道病原體RNA陽(yáng)性檢出情況 女性肺炎支原體RNA的陽(yáng)性檢出率(3.20%)顯著高于男性(1.89%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余6種病原體的陽(yáng)性檢出率無(wú)性別差異(P>0.05)，見表2。

表2 不同性別組呼吸道病原體RNA陽(yáng)性檢出率

2.2.2不同年齡組呼吸道病原體RNA陽(yáng)性檢出情況 不同年齡組呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腺病毒的陽(yáng)性檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。少年組呼吸道合胞病毒的陽(yáng)性率(3.93%)、副流感病毒的陽(yáng)性率(3.35%)、腺病毒的陽(yáng)性率(1.31%)高于其他年齡組，見表3。

表3 不同年齡組呼吸道病原體RNA陽(yáng)性檢出率

2.2.3不同季節(jié)呼吸道病原體RNA陽(yáng)性檢出情況 甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、肺炎支原體RNA陽(yáng)性檢出率在不同季節(jié)中比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，春季的陽(yáng)性檢出率最高；甲型流感病毒和呼吸道合胞病毒在秋季的陽(yáng)性檢出率最低；副流感病毒和肺炎支原體在冬季的陽(yáng)性檢出率最低，見表4。

表4 不同季節(jié)呼吸道病原體RNA陽(yáng)性檢出率

3 討論

呼吸道感染是臨床最常見的疾病之一，由于引起急性呼吸道感染的病原體種類繁多、傳播快、感染力強(qiáng)，且同一種病原體可引起多種臨床癥狀，不同的病原體亦可引起相似的臨床癥狀[3-4]，因此要求實(shí)驗(yàn)室能夠?qū)粑啦≡w快速檢測(cè)和早期鑒別以協(xié)助臨床對(duì)呼吸道感染進(jìn)行早期防控和治療[5]。作為引起急性呼吸道感染最主要的病原體，病毒、支原體或衣原體難以培養(yǎng)，而免疫學(xué)檢測(cè)則有抗原檢測(cè)靈敏度低，抗體檢測(cè)窗口期的缺點(diǎn)，因此，分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)成為其首選手段。恒溫雙擴(kuò)增技術(shù)作為新型分子檢測(cè)手段，通過T7線性擴(kuò)增和多生物素信號(hào)放大系統(tǒng)檢測(cè)病原體在宿主細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄的mRNA，反映的是病原體在宿主體內(nèi)的復(fù)制活性，有效甄別患者呼吸道感染是否為現(xiàn)癥感染，從而為臨床提供更準(zhǔn)確的診斷信息。

由于不同地區(qū)和不同年份的病原體流行性不盡相同[6-7]，所以定期或不定期對(duì)本地區(qū)呼吸道感染的病原學(xué)和流行病學(xué)調(diào)查研究對(duì)呼吸道感染的有效預(yù)防尤為重要[8]。本文通過對(duì)2019年3月至2020年2月呼吸道感染患者mRNA檢測(cè)結(jié)果分析來提供該時(shí)間段呼吸道疾病現(xiàn)癥感染的流行病學(xué)特征。

本研究對(duì)廣州地區(qū)2640例呼吸道感染患者7種呼吸道病原體mRNA檢測(cè)結(jié)果分析，陽(yáng)性率為8.46%，低于之前研究報(bào)道的呼吸道病原體IgM抗體檢出率[4,8-9]，也明顯低于已有報(bào)道的通過熒光定量PCR檢測(cè)的呼吸道病原體核酸的檢出率[10]。我們分析可能存在幾方面的原因。一方面，由于不同地區(qū)，不同年份的季節(jié)氣候特點(diǎn)以及人群易感性不同，呼吸道病原檢測(cè)陽(yáng)性率在不同地區(qū)或者不同年份可能存在一定差異。廣州屬于海洋性亞熱帶季風(fēng)氣候，溫暖多雨，夏季長(zhǎng)，冬季陰冷時(shí)間短，呼吸道病原體流行時(shí)間較北方地區(qū)短。另一方面，我們檢測(cè)的是病原體在宿主細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄的mRNA，只有現(xiàn)癥感染患者才可能檢測(cè)陽(yáng)性，而有研究指出呼吸道病原體的特異性IgM抗體可在感染后的2-3個(gè)月持續(xù)存在[11]。MP感染后1個(gè)月時(shí)其DNA的檢出率仍然高達(dá)50%，MP-DNA持續(xù)攜帶的中位數(shù)時(shí)間為7周，個(gè)別長(zhǎng)達(dá)7個(gè)月之久[12]；此外，2020年1月至2月期間，由于COVID-19疫情的爆發(fā)和居家隔離防疫策略的實(shí)施，也有效阻斷了其它呼吸道病毒的傳播和流行，使本該高發(fā)呼吸道疾病的冬季各病原體的陽(yáng)性檢出率顯著下降，進(jìn)而導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)期間這七種呼吸道病原體總陽(yáng)性檢出率的下降。就單一病原體而言，甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒的陽(yáng)性檢出率高于之前抗體IgM檢測(cè)的報(bào)道，肺炎衣原體與腺病毒陽(yáng)性率與報(bào)道相一致，而肺炎支原體、乙型流感病毒、副流感病毒陽(yáng)性檢出率則低于之前的研究[8]。

此外，本研究也從性別、年齡、季節(jié)等幾個(gè)方面分析了廣州地區(qū)急性呼吸道傳染病的流行特點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)女性患者肺炎支原體陽(yáng)性率顯著高于男性患者(P<0.05)，但由于本研究中男女構(gòu)成比有較大差異且目前針對(duì)性別對(duì)呼吸道傳染病影響的研究尚少，因此結(jié)論還需進(jìn)一步證實(shí)。年齡方面，研究結(jié)果顯示少年組呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腺病毒的陽(yáng)性率顯著高于其他年齡組，與王麗等人的研究一致[8]。其可能原因一是由于少年人群頻繁出入學(xué)校、公共交通等人群密集的公共場(chǎng)所，有更多的機(jī)會(huì)接觸呼吸道病原體引起交叉感染，另一是少年人群免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未完全，對(duì)呼吸道病原體的抵抗力較成年人差，是呼吸道病原體感染的高危人群，導(dǎo)致呼吸道病原體更容易在少年人群中傳播。季節(jié)方面，研究結(jié)果顯示呼吸道病原體的流行與季節(jié)有密切關(guān)系。甲型流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、肺炎支原體的陽(yáng)性檢出率在四個(gè)季節(jié)中存在顯著性差異(P<0.05)，春季的陽(yáng)性檢出率最高，這與謝紅梅等人的研究相一致[9]，提示春季為廣州地區(qū)呼吸道傳染病的高峰季節(jié)，廣州地區(qū)應(yīng)在春季加強(qiáng)呼吸道傳染病的防護(hù)工作。值得注意的是，由于廣州地區(qū)冬季較暖，而且因COVID-19疫情居家隔離相關(guān)政策的影響，本研究結(jié)果顯示廣州地區(qū)呼吸道病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體的流行情況并未像北方地區(qū)那樣在冬季表現(xiàn)得尤為嚴(yán)峻，還需更多數(shù)據(jù)進(jìn)一步論證。

綜上所述，呼吸道病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體現(xiàn)癥感染的主要模式為單一感染，少數(shù)病例表現(xiàn)為混合感染；其中，呼吸道合胞病毒和肺炎支原體的陽(yáng)性率最高，在全年均有檢出；少年組的陽(yáng)性檢出率最高，春季是陽(yáng)性檢出率最高的季節(jié)。本研究通過對(duì)廣州地區(qū)2460例呼吸道感染患者7種呼吸道病原體RNA檢測(cè)結(jié)果分析為廣州地區(qū)呼吸道感染的病原學(xué)和流行病學(xué)研究提供了相關(guān)數(shù)據(jù)。