卵巢上皮性腫瘤凋亡相關蛋白3和活化白細胞黏附分子的表達及臨床意義

王 行，楊 陽，何慧容，康克國，唐 英

卵巢上皮性腫瘤是最多見的卵巢腫瘤，其來源于卵巢表面的生發上皮[1]，其發生原因與持續排卵、遺傳因素、未孕、不孕、月經延遲等有關[2]。目前，早期診斷并評估病情進展而采取相應治療措施是提高該病治療效果的關鍵[3]。相關研究表示，卵巢上皮性腫瘤的發生與細胞黏附因子及細胞凋亡等基因密切相關[4]。凋亡相關蛋白3(apoptosis associated protein 3， APR3)的過高表達在多種腫瘤細胞中均有細胞聯系，對腫瘤分化、凋亡起到重要作用；活化白細胞黏附分子(activated leukocyte cell adhesion molecule, ALCAM)廣泛存在于人體各器官，是一種跨膜糖蛋白，與腫瘤發生、發展、轉移等有關[5]。因此，本研究選取98例卵巢上皮性腫瘤患者作為研究對象，分析卵巢上皮性腫瘤患者APR3和ALCAM的表達及與臨床病理特征和預后的相關性。現報告如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取本院2014年10月—2017年4月收治的98例卵巢上皮性腫瘤患者作為研究對象，均經病理檢查證實。納入標準：術前未接受化療、放療等輔助治療；臨床資料均完整；無其他惡性疾病；患者均簽署知情同意書。排除標準：合并肝、腎、心臟等臟器嚴重疾病者；合并嚴重神經功能、認知功能障礙者；依從性差者。年齡18～43(32.31±6.65)歲；良性42例，交界性31例，惡性25例。

1.2儀器與試劑 SP試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司)、免疫組化二抗試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)、磷酸鹽緩沖液(PBS，北京賽默飛世爾生物化學制品有限公司)、APR3兔抗人多克隆抗體(SANTACRUZ公司)、ALCAM抗體(美國abcam公司)。

1.3APR3和ALCAM蛋白表達水平檢測方法 參考文獻[1]方法：SP法，石蠟切片標本厚2 μm，烘烤60℃，二甲苯脫蠟，浸泡3次。3次離子水中浸泡抗原修復切片，PBS洗3次。內源性過氧化物酶阻斷劑滴加，室溫孵育15 min，沖洗。一抗(GPCR124多克隆抗體濃度1∶100)滴加，室溫孵育1 h，沖洗。辣根酶標羊抗小鼠/兔IgG聚合物滴加，室溫孵育30 min。對照組采用PBS代替一抗；滴加山羊抗兔二抗(eBioscience)室溫孵育30 min。二氨基聯苯胺顯色，蘇木精復染，梯度乙醇脫水，樹膠封片。

1.4結果判定 APR3和ALCAM的免疫組化結果判定[6]：由兩位病理科醫生在400倍光鏡下隨機選取10個視野對染色細胞數量和染色程度進行評分，其中陽性細胞數量<1%為0分，1%～10%為1分，11%～50%為2分，>50%為3分；染色程度中無染色為0分，弱陽性顯黃色為1分，中等陽性顯淺棕色為2分，強陽性顯棕褐色為3分。并將二者所得分數合計：0～3分為無表達或低表達，4～6分為高表達。所有患者治療結束后均隨訪3年，隨訪截止日期為2020年1月30日。

2 結果

2.1APR3和ALCAM在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達 APR3和ALCAM在惡性上皮性腫瘤組織中高表達率明顯高于良性及交界性上皮性腫瘤(P<0.05)。見表1。

表1 APR3和ALCAM在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達[例(%)]

2.2不同臨床病理特征惡性卵巢上皮性腫瘤患者APR3蛋白表達情況比較 惡性卵巢上皮性腫瘤患者APR3蛋白表達與年齡無關(P>0.05)，而與臟器、淋巴結轉移、TNM Ⅲ～Ⅳ期和組織低分化有關(P<0.01)。見表2。

表2 不同臨床病理特征惡性卵巢上皮性腫瘤患者APR3蛋白表達情況比較(例)

2.3不同臨床病理特征惡性卵巢上皮性腫瘤患者ALCAM蛋白表達情況比較 惡性卵巢上皮性腫瘤患者ALCAM蛋白的表達與年齡無關(P>0.05)，但存在臟器、淋巴結轉移、低分化、TNM Ⅲ～Ⅳ期的患者ALCAM蛋白高表達者比例較高(P<0.01)。見表3。

表3 不同臨床病理特征惡性卵巢上皮性腫瘤患者ALCAM蛋白表達情況比較(例)

2.4惡性卵巢上皮性腫瘤患者預后情況 隨訪3年后，25例惡性卵巢上皮性腫瘤患者3年總生存率52.00%(13/25)。APR3高表達和低表達的3年總生存率分別為27.78%(5/18)、71.43%(5/7)。APR3高表達患者3年總生存率低于低表達者(P<0.05)。ALCAM高表達和低表達的3年總生存率分別為21.05%(4/19)、66.67%(4/6)。ALCAM高表達患者3年總生存率低于低表達者(P<0.05)。

2.5APR3和ALCAM表達與惡性卵巢上皮性腫瘤病理特征的相關性分析 經Spearman相關進行分析，APR3和ALCAM水平與TNM分期呈正相關，但與組織分化程度呈負相關(P<0.05，P<0.01)。見表4。

表4 APR3和ALCAM表達與惡性卵巢上皮性腫瘤病理特征的相關性分析

3 討論

據統計，在卵巢腫瘤中，卵巢上皮性腫瘤占50%～70%，其中，卵巢上皮性腫瘤占卵巢惡性腫瘤的85%～90%[7]。近年來，卵巢上皮性腫瘤的發病率呈上升趨勢[8]。由于該病早期良性腫瘤時進展緩慢且無明顯癥狀，多數晚期惡性時可侵犯鄰近器官，引發破裂、感染、惡變等并發癥，故及時明確診斷并改善預后是目前臨床上的研究熱點[9-10]。目前尚不清楚該病發展和轉移機制，臨床上缺乏相應有效的分子標志物。

隨著生物學研究的進展，研究者發現相關生物蛋白改變在卵巢上皮性腫瘤的發生和進展中具有舉足輕重的病理作用，與卵巢上皮性腫瘤預后關聯大[11]。本研究結果顯示，ALCAM及APR3在良性腫瘤、交界性腫瘤及惡性腫瘤中的陽性表達率逐漸升高，且在惡性腫瘤中表達水平高于良性及交界性腫瘤。隨著惡性卵巢上皮性腫瘤臨床分期增高，組織分化程度的增加，ALCAM及APR3蛋白的高表達率也顯著上升。由此可知，ALCAM及APR3蛋白與惡性卵巢上皮性腫瘤患者病情的發展密切相關。

ALCAM又稱為CD166和MEMD，是免疫球蛋白基因超家族的成員，主要表達在白細胞和胸腺上皮細胞，同時也是淋巴細胞抗原CD6的配基[12]。近年來大量文獻已經證明ALCAM與多種癌癥的發生、發展具有相關性，ALCAM在涎腺腺樣囊性癌中呈高水平狀態，該因子可誘導癌癥進展，引起復發和轉移，對癌癥的發生具有促進作用[13]。而也有相關研究表示，ALCAM在癌癥中表達水平越高、復發越早、預后越差[14]。提示ALCAM與癌癥進展具有相關性。而APR3與細胞凋亡密切相關，相關研究對全反式維甲酸誘導細胞內APR3情況發現，APR3不僅可以抑制細胞凋亡，還可促進細胞分化、發育，在多種全反式維甲酸敏感細胞中顯示APR3轉錄呈上升趨勢[15]。還有研究報道APR3作為抑制成骨細胞增殖重要的輔助因子，可促進成骨細胞的分化[16]。由此可知，ALCAM及APR3蛋白的表達與卵巢上皮性腫瘤具有相關性，本研究結果與文獻報道一致。

本研究還發現，ALCAM及APR3的表達與患者年齡無關，而與TMN分期呈正相關，與組織分化程度呈負相關，表明了ALCAM及APR3參與了卵巢上皮性組織病變過程，在一定程度上可對腫瘤細胞及相關因子產生推進作用，這與相關國外文獻[17]研究結果一致。同時，通過3年隨訪惡性卵巢上皮性腫瘤患者分析ALCAM及APR3表達及生存率的關系，結果顯示二者表達的差異與惡性卵巢上皮性腫瘤生存率具有相關性，當患者病情越重，臨床分期增高，分化程度越低，導致患者體內細胞增殖能力增強，出現臟器、淋巴結轉移，病情惡化，APR3和ALCAM高表達患者3年總生存率越低[18]。

綜上所述，APR3與ALCAM表達在惡性卵巢上皮性腫瘤的發生、發展及臟器、淋巴結轉移等過程中發揮著重要作用，臨床上可根據APR3與ALCAM的表達情況評估病情并指導制訂治療方案。