布洛芬顆粒含量測定的優化方法

劉素如

布洛芬是臨床上經常使用的一種藥物,其主要具有消炎、鎮痛、解熱的作用,如痛經、感冒引起的發熱、關節痛等,作用機制是通過對環氧酶的抑制,以此來減少前列腺素的合成,最終降低人體的神經痛覺,調節人體溫度,達到解熱鎮痛的目的［1］。布洛芬顆粒屬于非甾體抗炎藥,其分子式是C13H18O2,分子量是206.28,化學名為2-甲基丙基(2-甲基-4-)苯乙酸。在臨床研究中發現,布洛芬也能對血小板有顯著的抑制作用,但是相比于阿司匹林來說,布洛芬顆粒的作用時間更短［2］。世界衛生組織已經將布洛芬劃定為家中必備藥物之一,并且布洛芬在人們生活中已經得到了十分廣泛的應用。關于布洛芬顆粒含量的測定方法有很多,如紫外分光光度法、容量法、氣相色譜法、HPLC等。同時,在《國家藥品標準》中明確記錄了布洛芬顆粒的檢測標準,在該標準中主要采用HPLC方法對其含量進行測定,其中的流動相是具有較大毒性的氯乙酸,并且在實際的處理過程中樣品消耗時間較長,檢測波長也有差異性,進而在操作人員實際的操作過程中,可能會造成樣品出現不同程度的損失,藥品的真實質量反應也十分不準確［3］。因此,本文參考《中國藥典》中布洛芬各類制劑標準中的含量測定方式,在原有的基礎上對相關方法進行優化,不僅大大提升了操作的便捷性和靈敏性,還能夠更好地控制制劑質量,得出較為準確的數據結果。

1 儀器和試藥

1.1儀器 在本次研究中,選用Waters e2695高效液相色譜儀,具體涵蓋了四元梯度輸液泵,二極管陣列檢測器；選用了天平AL104-IC(METTLER TOLEDO),一體式超純水制備機PCJ-40(成都品成科技有限公司),恒溫數控超聲波清洗器KQ-500gdv［昆山市超聲儀器有限公司(昆山舒美)］。

1.2試藥 標準對照品：選取經過HPLC測定含量為99.5%的布洛芬顆粒(中國食品藥品檢定研究院,批號100722201203)。檢測樣品：布洛芬顆粒(海南贊邦制藥有限公司,國藥準字H20110027,規格：0.4 g×8片)。試劑：本次研究中使用的甲醇、乙腈均為色譜純,水為超純水,醋酸鈉、冰醋酸為分析純［4］。

2 方法與結果

2.1制備各個溶液 對照品溶液：稱取布洛芬對照品10 mg放置于20 ml量瓶中,借助甲醇將其稀釋至刻度。供試品溶液：稱取本品10包,將其充分混勻之后放置于50 ml的量瓶中,加入甲醇超聲20 min讓其充分的溶解,并最終稀釋到刻度位置,應用0.45 μm的微孔濾膜將其過濾,取出續濾液獲得。陰性溶液：按照處方的具體比例制備空白輔料,按照上述方法獲得［5］。

2.2考察色譜條件及系統適用性 采用Waters XBridge C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),將6.13 g的醋酸鈉融入到750 ml的水中,等待其充分溶解并借助冰醋酸將溶液的pH值調至到2.5,流動相是該溶液-乙腈的比例控制為40∶60,流速為1.0 ml/min,進樣量20 μl。

2.3考察專屬性 按照2.1的方式制備溶液后采用HPLC進行檢測,檢測結果得知布洛芬的理論塔板書是9556,最高峰和相鄰的分離度都高于1.5,其余的空白輔料對該項檢測試驗沒有明顯干擾。

2.4空白輔料干擾試驗 根據相應的處方比例取出空白輔料顆粒,然后按照供試品溶液制備方法,對空白輔料溶液進行制備,進樣20 μl,將反應結果的色譜圖記錄下來。同時,另外取出布洛芬對照品和供試品溶液適量,按照上述方法操作,得出最后的結果,表明了空白輔料對布洛芬顆粒的含量測定不會造成顯著影響。

2.5峰純度檢查 取出對照品溶液和供試品溶液各20 μl,分別注入進高效液相色譜儀器中,通過電二極管陣列檢測器(DAD檢測器),記錄其在200～400 nm波長范圍內的色譜圖,為后續的峰純度檢查提供參考依據。檢測結果是對照品溶液峰純度為999.2,供試品溶液峰純度為999.3.可見,色譜圖中的主峰為純物質峰。

2.6考察線性關系 稱取布洛芬對照品25 mg,將其放置于20 ml的容量瓶中,并應用甲醇稀釋至刻度。分別取出1、2、4、5、10 ml置于10 ml量瓶中,借助甲醇稀釋制作成0.134、0.267、0.534、0.668、1.336 mg/ml的溶液,再依次注入高效液相色譜儀中測定,應用方程計算峰面積A=1277.393C-0.169(r=0.9999,n=6),可見在0.134～1.336 mg/ml范圍內線性關系良好。

2.7考察精密度 將對照品溶液按照2.2的方法進行檢測,檢測6次之后取平均值,記錄對照品峰面積,峰面積相對標準偏差(RSD)為0.37%,證明了該儀器精密度良好。

2.8考察穩定性 將供試品溶液提取出來,在0、4、8、12、24 h的各個階段按照2.2的方法進行檢測,由此計算布洛芬的含量,RSD為0.31%,證明了供試品溶液在24 h內具有較高穩定性［6］。

2.9最低檢出限與定量限 將布洛芬對照品溶液進行提出,并用甲醇按照不同比例程度稀釋之后,按照2.2的方法檢測,S/N=10定為定量限,S/N=3表示最低檢出限。布洛芬的定量限為0.267 μg/ml,最低檢出限為0.0891 μg/ml。

2.10重復性實驗 取出檢測樣品并稱取5份,按照2.1的方法進行溶液制備,按照2.2的方法測定,最終在6次試驗之后取平均數RSD為0.54%(n=6),可見該檢測方法的重復性較好。

2.11耐用性試驗 為了證明檢測方法的耐用性是否良好,分別考察其流動相的比例、柱溫和流速的實際變化情況,借助三根不同色譜柱對其進行測定,檢測布洛芬顆粒中其含量和RSD,結合各個條件綜合觀察,布洛芬理論塔板數高于2500,RSD低于2.0%。

2.12檢測加樣回收率 精密稱取布洛芬25 mg,共準備6份。將6份樣品分別放置于20 ml的量瓶中,并加入甲醇超聲使其溶解,稀釋樣品至刻度,將過濾之后的溶液1 ml放置于25 ml量瓶中,加入濃度為1.254 mg/ml的1 ml對照品溶液,用甲醇稀釋至刻度［7］。依據2.2的方法進行測定,并計算回收率,最終結果如表1所示。

表1 加樣回收率試驗結果 (n=6)

2.13檢測樣品含量 將布洛芬顆粒樣品準備各兩份,每份樣品約等于布洛芬25 mg,依次按照2.1和2.2的方法進行制備和分析,并記錄下色譜峰面積,最終計算出布洛芬的含量為99.3%(n=2)和98.9%(n=2)。

3 討論

3.1選擇合宜的流動相 我國《國家藥品標準》中明確規定了,布洛芬顆粒在含量測定時,其流動相是1%的氯乙酸溶液-乙腈(48∶52)。但是在現實生活中,氯乙酸屬于中等毒性的化學藥品,若使用不當,其不僅會造成皮膚灼傷、眼部灼傷,還會通過呼吸道進入到人體內,引起肺部組織損傷。與此同時,長期的接觸氯乙酸,還會加大人體患癌的風險,所以本文選取了醋酸鈉緩沖液-乙腈(40∶60)作為流動相［8］。將6.13 g醋酸鈉融入到750 ml的水中,并應用冰醋酸將其pH值調至2.5。采用醋酸鈉緩沖液不僅毒性較小,且十分容易提取和存儲。

3.2選擇合適的檢測波長 在原有的標準中顯示,布洛芬顆粒含量檢測的波長是254 nm,和已有的研究結果差異不大。在本次研究過程中,通過紫外光譜掃描,得知在263 nm、273 nm的波長時,布洛芬會呈現最大吸收。通過HPLC檢測發現：如果檢測波長是220 nm,那么布洛芬發信噪比為3,如果檢測波長是254 nm,那么信噪比是1340,如果檢測波長是263 nm,那么信噪比是3991。由此本文最終確定263 nm作為檢測波長［9］。

3.3確定樣品溶液制備方法 在本次研究中,通過向布洛芬顆粒中加入70%的甲醇溶液并充分搖晃20、30、45 min后,分析甲醇超聲15、20、30 min對布洛芬含量的實際影響情況［10］。得知,應用純甲醇提取的布洛芬含量高于使用該方法提取的所有布洛芬含量,并且在45 min的時候,純甲醇提出的布洛芬含量最高。與此同時,超聲20 min和超聲30 min得到的含量無顯著差異,所以采用甲醇超聲20 min更加簡單高效。

4 結語

布洛芬存在的形式有很多,如膠囊、顆粒、緩釋片、混懸液等等。在傳統的布洛芬顆粒含量測定方法中,如酸堿滴定法、紫外分光光度法等,因為專屬性較差,所以檢測的結果十分容易受到輔料等因素的影響。本文通過前期的方法測驗得知,本次測定方法中空白輔料對布洛芬顆粒的含量測定并沒有影響,因此可以排除其干擾,獲得的準確性也更高。與此同時,在上述色譜條件下對布洛芬顆粒的含量進行檢測,得知色譜峰峰形較好,在合理的時間范圍內,輔料對測定無干擾。通過對布洛芬顆粒的含量測定,進一步優化的測量方法,方法在準確性、精密度等各個方面都符合相關要求,且操作便捷、易于重復,能夠為布洛芬顆粒的質量控制提供更加科學合理的參考建議。在證明本方法作為該藥品的含量測定依據時,能夠確保布洛芬顆粒檢測的數據真實性,能夠為藥品的質量提供檢測依據。