參芪利心湯對心力衰竭大鼠血漿N 端B 型利鈉肽原、血管緊張素Ⅱ水平及心肌纖維化的影響

莊金龍 ，陳華，劉莉，郭以河，林惠萍，范偉偉，朱健

1.廈門大學附屬東南醫(yī)院，福建 漳州 363000；2.黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040

心力衰竭是多種原因導致心臟結構和/或功能的異常改變，使心室收縮和/或舒張功能發(fā)生障礙而引起的一組復雜臨床綜合征[1]。研究表明，心力衰竭發(fā)生發(fā)展的基本機制是心室重構，而心肌纖維化是其重要的病理基礎[2]。心肌間質膠原纖維的大量增生及膠原蛋白的過度沉積是各種心臟病導致晚期心功能衰竭的共同病理改變。參芪利心湯治療心力衰竭臨床療效確切[3-4]，且課題組前期基礎研究表明，其可改善心力衰竭大鼠的心肌結構、降低細胞炎癥因子，但其干預心力衰竭的機制尚不清楚。本實驗采用參芪利心湯干預阿霉素誘導心力衰竭大鼠，觀察模型大鼠心功能、心肌組織形態(tài)、心肌膠原容積分數（CVF）、血漿N 端B 型利鈉肽原（NT-proBNP）和血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）水平、心肌組織Ⅰ型膠原（CollagenⅠ）和Ⅲ型膠原（Collagen Ⅲ）mRNA 及蛋白的表達，探討其干預心力衰竭的可能作用機制。

1 實驗材料

1.1 動物

SPF 級雄性Wistar 大鼠105 只，體質量（200±20）g，購于上海斯萊克實驗動物有限責任公司，動物許可證號SCXK（滬）2017-0005。分籠飼養(yǎng)于廈門大學附屬東南醫(yī)院動物實驗中心，溫度（22±3）℃，相對濕度42%～58%，光照12 h 明暗交替，自由攝食飲水。

1.2 藥物

參芪利心湯（黃芪20 g，人參20 g，丹參15 g，桂枝10 g，茯苓20 g，白術15 g，淫羊藿20 g，仙鶴草30 g，益母草15 g，葶藶子15 g，甘草10 g），飲片購自廈門大學附屬東南醫(yī)院，由門診中藥房制成水煎液，根據大鼠與人體體表面積比例折算等效劑量，將其分別濃縮成含原藥材0.998、1.995、3.990 g/mL，分裝滅菌，于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩ｑR來酸依那普利片，揚子江藥業(yè)集團江蘇制藥股份有限公司，批號18010301，用滅菌注射用水配成0.21 mg/mL 溶液備用。阿霉素粉針劑，浙江海正藥業(yè)股份有限公司，批號18033311，將10 mg 阿霉素粉針劑溶解于5 mL 滅菌注射用水中，再加入注射用水至12.5 mL，配成濃度為0.8 mg/mL 的溶液，備用。

1.3 主要試劑與儀器

Masson 染色試劑（廈門大學附屬東南醫(yī)院病理科），NT-proBNP ELISA 試劑盒（武漢菲恩生物科技有限公司，批號ER0309），AngⅡ ELISA 試劑盒（武漢菲恩生物科技有限公司，批號ER1637），Trizol 試劑盒（上海諾倫生物醫(yī)藥技術有限公司，批號PR01259），熒光定量PCR 試劑盒（上海諾倫生物醫(yī)藥技術有限公司，批號LK-0103B），裂解液（上海諾倫生物醫(yī)藥技術有限公司，批號PWB-78503），BCA蛋白濃度測定試劑盒（上海諾倫生物醫(yī)藥技術有限公司，批號PWB-563），SDS-PAGE（上海諾倫生物醫(yī)藥技術有限公司，批號PWB-020），Super-GL ECL 超敏發(fā)光液（上海諾倫生物醫(yī)藥技術有限公司，批號PWB-03132），PVDF 轉移膜（美國Millipore 公司，批號IPVH00010），辣根過氧化物酶（HRP）標記山羊抗兔IgG（上海碧云天生物技術有限公司，批號A0208），HRP 標記山羊抗小鼠IgG（美國Jackson 公司，批號000000148774），重組Anti-CollagenⅠ抗體[EPR22894-89]（英國Abcam 公司，貨號ab260043）、Anti-Collagen Ⅲ抗體[FH-7A]（英國Abcam 公司，貨號ab6310），重組Anti-β-actin 抗體[EPR16769]（英國Abcam 公司，貨號ab179467）。彩色多普勒超聲儀（荷蘭Philips 公司，IE33 型，探頭頻率10 MHz），臺式低速離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司，TDZ4-WS），醫(yī)用超低溫冰箱（日本三洋公司，MDF-U53V），多功能染色封片一體機（德國徠卡儀器股份有限公司，ST5020），切片機（德國徠卡儀器股份有限公司，RM2245），生物顯微鏡（上海徠卡顯微系統(tǒng)貿易有限公司，DW4-B），全自動酶標儀（美國Bio-rad 公司，680 型），實時熒光定量PCR 儀（美國Agilent 公司，MX3000P），電泳儀（美國Bio-Rad公司，PowerPacTMHC），垂直電泳槽（上海天能科技公司，VE-180），Semi-Dry Transfer Cell（美國Bio-Rad公司，170-3940），脫色搖床（上海青浦滬西儀器，DY-B1），凝膠成像分析系統(tǒng)（美國Bio-Rad 公司，XR+），Gel-Proanalyzer 分析軟件（美國 Media Cybernetics 公司）。

2 實驗方法

2.1 造模及分組

實驗大鼠105 只，適應性喂養(yǎng)7 d，采用隨機數字表法選取15 只為空白對照組，其余90 只隨機分為模型組、依那普利組和參芪利心湯低、中、高劑量組各18 只。除空白對照組外，余各組大鼠腹腔注射配制的0.8 mg/mL 阿霉素溶液，前3 周3 mg/kg、后3周2 mg/kg，同時空白對照組予等量生理鹽水腹腔注射。每周1 次，連續(xù)6 周。

2.2 給藥

參照《人和動物間按體表面積折算的等效劑量比值表》換算大鼠給藥等效劑量，依那普利組每次灌胃依那普利混懸液1.05 mg/kg，參芪利心湯高劑量組每次灌胃參芪利心湯水煎液19.95 g/kg，參芪利心湯中劑量組每次灌胃參芪利心湯水煎液9.975 g/kg，參芪利心湯低劑量組每次灌胃參芪利心湯水煎液4.988 g/kg，分別相當于臨床成人1 日用量折算大鼠等效劑量2、1、0.5 倍，空白對照組及模型組灌胃等體積蒸餾水，均每日2 次，連續(xù)4 周。

2.3 標本采集

藥物干預4 周，禁食、不禁水12 h，脫毛、稱重，20%烏拉坦（1.5 mg/g）腹腔注射麻醉，超聲心動圖儀檢測心功能指標，腹主動脈采血5 mL，注入EDTA抗凝管，靜置1 h，3000 r/min 離心10 min，留取血漿，置于-20 ℃冰箱保存待測。采血后處死大鼠，立即剪開胸腔，快速準確取出心臟，用冰鹽水充分洗滌血污，冰塊上剪除包膜、血管及心房組織，留取左室心肌組織，濾紙拭干并迅速剪取左室心尖部心肌組織約1 mm3，4%多聚甲醛固定，脫水，石蠟包埋，用于Masson 染色，剩余左室心肌組織快速置于液氮中固定10 min，取出并用干冰包裹轉移至-80 ℃冰箱保存待用。

2.4 指標觀察及檢測

2.4.1 心功能指標檢測

大鼠麻醉后，仰臥固定，用超聲心動圖儀10 MHz高頻探頭置于左胸骨旁，顯示左室長軸切面，獲得M型超聲心動圖，測定左室收縮末期內徑（LVESd），左室舒張末期內徑（LVEDd），用Teichholtz 公式計算射血分數（EF）、短軸縮短率（FS）和心輸出量（CO）。連續(xù)記錄3 個心動周期數據，取平均值。

2.4.2 血漿N 端B型利鈉肽原和血管緊張素Ⅱ檢測

ELISA 檢測大鼠血漿NT-proBNP 和AngⅡ水平，嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

2.4.3 Masson 染色

取石蠟包埋的大鼠左室心尖部心肌組，切片，常規(guī)Masson 染色，鏡下觀察大鼠心肌組織形態(tài)和纖維化程度。每組取6 張切片，每張切片隨機選取4 個不含血管視野，通過Image J 6.0 圖像分析系統(tǒng)測量各區(qū)域CVF，取其平均值。CVF（%）＝膠原纖維面積÷視野面積×100%。

2.4.4 RT-qPCR 檢測大鼠心肌組織Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原mRNA 的表達

取凍存的大鼠左室心肌組織100 mg放入研缽中，加入1 mL Trizol，低溫充分研磨成勻漿，提取心肌總RNA。采用瓊脂糖凝膠電泳分析RNA 的完整度，采用分光光度法測定RNA 的濃度和純度，使總RNA 濃度在3～5 μg/μL，A260/A280比值在1.8～2.0。取2 μg RNA，在20 μL 體系中按照Two Step Real-Time PCR Kit（SYBR Green）試劑盒說明書操作步驟反轉錄成cDNA，置于-20 ℃冰箱保存待用。以β-actin 為內參，取2 μL cDNA，在30 μL 體系中按照上述試劑盒說明書操作步驟，用MX3000P 熒光定量PCR 儀分別對大鼠CollagenⅠ、Collagen Ⅲ進行擴增，引物由上海艾博思生物科技有限公司設計并合成，引物序列見表1。PCR 反應條件：預變性94 ℃、3 min，1 個循環(huán)；變性94 ℃、15 s，退火55 ℃、40 s，延伸72 ℃、60 s，40 個循環(huán)。PCR 結束后用軟件測定Ct 值，用2-ΔΔCt表示CollagenⅠ、Collagen Ⅲ的mRNA 相對表達量。實驗重復3 次。

表1 各基因PCR 引物序列

2.4.5 Western blot 檢測大鼠心肌組織Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原蛋白的表達

剪取凍存的大鼠左室心肌組織300 mg，加300 μL預冷組織細胞裂解液，制成心肌細胞勻漿，置冰上裂解30 min，4 ℃、12 000 r/min 離心30 min，取上清液移至新離心管，BCA 法測定總蛋白。剩余蛋白樣品加入2×loading buffer，混勻，100 ℃加熱5 min，冰上冷卻，12 000 r/min 離心5 min，分別以每孔上樣量為50 μg 蛋白樣品使用10%SDS-PAGE 進行電泳，電轉移至PVDF 膜，5%脫脂奶粉封閉。加入稀釋好的重組Anti-CollagenⅠ或Ⅲ抗體（1 ∶2000）、重組Anti-β-actin抗體（1∶10 000），4 ℃孵育過夜，用1×TBST 洗滌4 次，每次10 min。加入稀釋好的HRP 標記的二抗（1 ∶2000），37 ℃孵育2 h，用1×TBST 洗滌4 次，每次10 min。加入ECL 超敏發(fā)光液孵育后，暗室內曝光、顯影、定影，凝膠成像分析系統(tǒng)拍照，以β-actin為內參照，用Gel-Pro Analyzer 軟件分析各組條帶，計算CollagenⅠ、Collagen Ⅲ蛋白條帶的灰度值與β-actin 蛋白條帶灰度值的比值。

3 統(tǒng)計學方法

4 結果

4.1 存活情況

藥物干預4 周后，空白對照組大鼠生長良好、無死亡，模型組存活13 只，參芪利心湯低劑量組存活14 只，依那普利組和參芪利心湯高劑量組各存活16只，參芪利心湯中劑量組存活15 只。

4.2 參芪利心湯對模型大鼠心功能的影響

與空白對照組比較，模型組大鼠LVESd、LVEDd明顯增大，EF、FS、CO 明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）；與模型組比較，各給藥組大鼠LVESd、LVEDd 均不同程度減小，EF、FS、CO 均不同程度升高，除參芪利心湯低劑量組外，余各組差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）；與依那普利組比較，參芪利心湯低劑量組大鼠LVESd、LVEDd 明顯增大，EF、FS、CO 明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。結果見表2。

表2 各組大鼠心功能指標比較（）

表2 各組大鼠心功能指標比較（）

注：與空白對照組比較，***P＜0.001；與模型組比較，###P＜0.001；與依那普利組比較，△△△P＜0.001

4.3 參芪利心湯對模型大鼠心肌組織纖維化程度的影響

空白對照組大鼠心肌組織排列整齊、緊密，心肌間質僅見極少量條索狀藍色膠原纖維組織；模型組大鼠心肌組織排列紊亂、疏松，心肌纖維化明顯，心肌間質可見大量片狀藍色膠原纖維組織增生；參芪利心湯低劑量組大鼠心肌纖維化程度較模型組稍減輕，但心肌間質仍可見大量小片狀藍色膠原纖維組織增生，心肌組織亦排列紊亂、疏松；其余各給藥組大鼠心肌纖維化程度較模型組明顯減輕，心肌間質可見散在小灶狀或條索狀藍色膠原纖維組織增生，其中參芪利心湯高劑量組和依那普利組大鼠心肌組織排列相對整齊、緊密。結果見圖1。

4.4 參芪利心湯對模型大鼠心肌膠原容積分數的影響

與空白對照組比較，模型組大鼠心肌CVF 明顯升高（P＜0.001）；與模型組比較，各給藥組大鼠心肌CVF 均不同程度降低，除參芪利心湯低劑量組外，余各組差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）；與依那普利組比較，參芪利心湯低劑量組大鼠心肌CVF 升高明顯，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。結果見表3。

圖1 各組大鼠心肌組織形態(tài)（Masson 染色，×200）

表3 各組大鼠心肌CVF 水平比較（，%）

表3 各組大鼠心肌CVF 水平比較（，%）

注：與空白對照組比較，***P＜0.001；與模型組比較，###P＜0.001；與依那普利組比較，△△△P＜0.001

4.5 參芪利心湯對模型大鼠血漿N 端B型利鈉肽原和血管緊張素Ⅱ水平的影響

與空白對照組比較，模型組大鼠血漿NT-proBNP、AngⅡ水平明顯升高（P＜0.001）；與模型組比較，各給藥組大鼠血漿NT-proBNP、AngⅡ水平均有不同程度降低，除參芪利心湯低劑量組外，余各組差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）；與依那普利組比較，參芪利心湯低劑量組大鼠血漿NT-proBNP、AngⅡ水平明顯升高（P＜0.001）。結果見表4。

表4 各組大鼠血漿NT-proBNP、AngⅡ水平比較（，ng/L）

表4 各組大鼠血漿NT-proBNP、AngⅡ水平比較（，ng/L）

注：與空白對照組比較，***P＜0.001；與模型組比較，###P＜0.001；與依那普利組比較，△△△P＜0.001

4.6 參芪利心湯對模型大鼠心肌組織Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原mRNA 表達的影響

與空白對照組比較，模型組大鼠心肌組織CollagenⅠ、Collagen Ⅲ mRNA 表達明顯升高（P＜0.001）；與模型組比較，各給藥組大鼠心肌組織CollagenⅠ、Collagen Ⅲ mRNA 表達均有不同程度降低，除參芪利心湯低劑量組外，余各組差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）；與依那普利組比較，參芪利心湯低劑量組大鼠心肌組織CollagenⅠ、Collagen Ⅲ mRNA表達明顯升高（P＜0.001）。結果見表5。

表5 各組大鼠心肌組織CollagenⅠ、Collagen Ⅲ mRNA 表達比較（）

表5 各組大鼠心肌組織CollagenⅠ、Collagen Ⅲ mRNA 表達比較（）

注：與空白對照組比較，***P＜0.001；與模型組比較，###P＜0.001；與依那普利組比較，△△△P＜0.001

4.7 參芪利心湯對模型大鼠心肌組織Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原蛋白表達的影響

與空白對照組比較，模型組大鼠心肌組織CollagenⅠ、Collagen Ⅲ蛋白表達明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）；與模型組比較，各給藥組大鼠心肌組織CollagenⅠ、Collagen Ⅲ蛋白表達均不同程度降低，除參芪利心湯低劑量組外，余各組差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01，P＜0.001）；與依那普利組比較，參芪利心湯低劑量組大鼠心肌組織CollagenⅠ、Collagen Ⅲ蛋白表達明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，P＜0.01）。結果見圖2。

圖2 各組大鼠心肌組織CollagenⅠ、Collagen Ⅲ蛋白表達比較（）

5 討論

心力衰竭動物模型制備方法很多，本實驗采用近年來國內外比較公認的阿霉素誘導心力衰竭大鼠模型。阿霉素是一種廣譜、高效的蒽醌類抗腫瘤藥物，具有嚴重的心臟毒性作用，其對心肌的損害是一個慢性、蓄積性過程，主要通過大量氧自由基和細胞內鈣超載，直接損傷細胞核，影響線粒體能量代謝，導致心肌細胞凋亡、自噬，引起肌成纖維細胞逐漸增多，膠原纖維組織增生及膠原蛋白過度沉積，最終導致心肌纖維化、心室重構[5]。阿霉素造模目前主要有腹腔注射和尾靜脈注射2 種方式，但具體給藥劑量、給藥時間無統(tǒng)一的標準，國內外相關報道也各不相同。本課題組前期心力衰竭動物造模結果也提示造模后期大鼠死亡率偏高，考慮可能與阿霉素引起骨髓抑制、消化道反應、內環(huán)境紊亂等有關[6]。結合阿霉素致心力衰竭具有劑量累積性、劑量依賴性及時間延后效應等特點，參考相關文獻[7-8]，在課題組前期造模方案基礎上適當予以改良。本實驗采用小劑量、長時間、后期減量、多次給藥的造模方案，又因尾靜脈注射操作困難且易致爛尾，故選用腹腔注射方式給藥，此種造模方法簡便且經濟、成功率較高、可重復性好。本實驗結果顯示，造模大鼠第16 日開始出現中毒癥狀，表現為精神萎靡，少活動、倦臥，進食減少，呼吸加快，皮毛槁枯等，4 周后開始出現死亡；與空白對照組比較，模型組大鼠心肌組織存在嚴重纖維化，心功能顯著下降（EF≤45%），血漿NT-proBNP 水平顯著升高，表明阿霉素誘導心力衰竭模型成功，這與相關實驗研究結果大致相同[9]。

現代研究表明，以神經內分泌為主多種因素參與的心室重構是心力衰竭發(fā)生、發(fā)展的主要病理生理機制，而心肌纖維化是其重要的病理學基礎[10]。心肌纖維化是指心肌間質中出現膠原纖維過度沉積、膠原蛋白（主要是CollagenⅠ、Collagen Ⅲ）濃度升高或成分異常等為特征的心肌間質重構，是心室重構的重要表現形式之一，也是心功能由代償轉變?yōu)槭Т鷥數闹匾h(huán)節(jié)[11]。心肌纖維化后出現心肌僵硬度升高、順應性下降，收縮或舒張功能障礙，引起心功能降低，最終導致心力衰竭[12-13]。心肌纖維化還包括凋亡的心肌細胞被大量心肌成纖維細胞和纖維性膠原成分所取代[14]，因此，抑制心肌纖維化，是改善心功能、延緩心力衰竭進展的重要措施之一。NT-proBNP 是目前國內外急慢性心力衰竭防治指南推薦的最重要的生物學標志物，為心力衰竭的診斷、病情嚴重程度、臨床療效、預后評估及院外管理提供了重要的依據，是心力衰竭最強的獨立預測因子之一[15-17]。現代藥理研究表明，中藥對心力衰竭心肌纖維化有很好的防治作用[18]。本實驗對大鼠行心肌Masson 染色，觀察心肌組織纖維化程度，測定心肌CVF，并檢測心功能指標和血漿NT-proBNP 水平，結果顯示，與空白對照組比較，模型組大鼠心肌組織膠原纖維明顯增生，CVF及NT-proBNP 顯著升高，而心功能指標（EF、FS、CO）明顯降低，表明心力衰竭病程中存在明顯的心肌纖維化，引起心肌順應性下降、僵硬度增加，收縮及舒張功能減退，進而導致心功能顯著下降。與模型組比較，參芪利心湯各劑量組大鼠心肌纖維化均不同程度減輕，其中參芪利心湯中、高劑量組更為明顯；參芪利心湯各劑量組大鼠CVF 和NT-proBNP 均不同程度下降，而EF、FS、CO 不同程度升高，同樣以中、高劑量組改變明顯，表明心力衰竭時心肌纖維化程度與心功能存在明顯的相關性，參芪利心湯中、高劑量可有效減少心力衰竭大鼠心肌組織膠原纖維增生，降低心肌CVF，抑制心肌纖維化，逆轉心室重構，從而改善心力衰竭大鼠的心功能。

心力衰竭時心排血量下降，腎灌注量不足，導致腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）激活，促進血漿AngⅡ分泌增加，而AngⅡ與血管緊張素受體1（AT1）相結合，引起心肌成纖維細胞增殖、細胞間質膠原蛋白過表達、基質沉積等，導致心肌纖維化[19]。目前，血管緊張素轉化酶抑制劑（ACEI）已成為心力衰竭臨床治療的“金三角”之一，其可通過抑制RAAS 激活，降低血漿AngⅡ水平，從而減少心肌纖維化、逆轉心室重構，改善心力衰竭[20]。本實驗結果也表明，依那普利作為目前臨床最常用的ACEI類藥物，可通過降低心力衰竭大鼠血漿AngⅡ水平，減少心肌膠原纖維增生，降低心肌 CVF 及血漿NT-proBNP 水平，起到抑制心肌纖維化、改善心功能的作用。實驗結果顯示，參芪利心湯中、高劑量組血漿AngⅡ、NT-proBNP 水平、心肌膠原纖維增生程度及心肌CVF 與依那普利組比較差異無統(tǒng)計學意義，表明參芪利心湯中、高劑量改善心力衰竭大鼠心肌組織結構、抑制心肌纖維化和改善心功能與依那普利基本相當。

現代研究表明，心肌間質除膠原纖維外，還有大量膠原蛋白，后者主要由CollagenⅠ和Collagen Ⅲ組成，約占心臟干重的3%～6%，其生理功能在于為心肌細胞提供支持、傳導應力并保證心肌順應性[21]。心力衰竭時心肌間質CollagenⅠ、Collagen Ⅲ合成過度是心肌纖維化的生物學基礎[22]。本實驗結果顯示，與空白對照組比較，模型組大鼠心肌組織CollagenⅠ、Collagen Ⅲ mRNA 和蛋白表達顯著升高，表明心力衰竭時同樣存在心肌間質CollagenⅠ、Collagen Ⅲ的過表達，是心肌纖維化的重要病理改變，這與上述研究結果[22]基本相符。參芪利心湯各劑量組大鼠心肌組織CollagenⅠ、Collagen Ⅲ mRNA 和蛋白表達較模型組均不同程度降低，且存在一定的量效關系，中、高劑量組顯著降低，低劑量組降低不明顯。本實驗結果表明，參芪利心湯可有效降低心肌組織CollagenⅠ、Collagen Ⅲ的表達，減少心肌僵硬度，從而抑制心肌纖維化、逆轉心室重構，這可能是其改善心力衰竭大鼠心功能的作用機制之一。

心力衰竭是一組復雜的臨床綜合征，根據其臨床表現及特征，可歸屬中醫(yī)學“喘證”“痰飲”“心悸”“水腫”等范疇。當代諸多醫(yī)家認為其病機為本虛標實、虛實夾雜，本虛為心氣（陽）虛，標實為瘀血、水飲停留，以益氣溫陽、活血利水為治療大法[23]。參芪利心湯是黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院劉莉教授臨床治療心力衰竭經驗方，該方基于“益氣、溫陽、活血、利水”治療大法組方而成，防治心力衰竭臨床療效確切[3-4]。本實驗結果顯示，參芪利心湯可降低心力衰竭大鼠血漿NT-proBNP、AngⅡ水平，減少心肌組織膠原纖維增生，降低CVF，下調CollagenⅠ、Collagen Ⅲ mRNA 及蛋白的表達，從而抑制心肌纖維化、改善心力衰竭，這可能與參芪利心湯中君藥人參和黃芪密切相關。彭程飛等[24]研究表明，人參主要成分人參皂苷Rg1 能有效抑制大鼠急性心肌梗死后心肌纖維化。唐斌等[25]研究表明，黃芪主要成分黃芪甲苷能抑制慢性心力衰竭大鼠心肌纖維化、糾正心肌能量代謝。本研究結果為參芪利心湯臨床治療心力衰竭提供了實驗依據，同時也為中醫(yī)藥防治心力衰竭提供新思路和研究方向。

綜上所述，本研究通過建立阿霉素誘導的心力衰竭大鼠模型，觀察參芪利心湯對心力衰竭大鼠心肌組織膠原纖維和膠原蛋白重構的影響以及心功能的變化，結果表明參芪利心湯能有效減少心力衰竭大鼠心肌間質膠原纖維增生，并下調心肌組織CollagenⅠ、Collagen Ⅲ的表達，起到抗心肌纖維化、逆轉心室重構的作用，這可能是其改善心功能的作用機制之一。參芪利心湯上述作用可能與其阻斷RAAS，降低血漿中AngⅡ水平，減少與AT1 結合，抑制心肌纖維化這一途徑有關，但具體調控機制目前尚不清楚。心肌纖維化發(fā)生發(fā)展受到多種信號通路的共同影響，多種單味中藥提取物或復方制劑均能通過多種機制干預心肌纖維化[26]，參芪利心湯是否通過TGF-β1/Smads、Wnt、MMPS 等其他轉導通路干預心肌纖維化進展，是課題組今后研究的方向。